罗氏Cobas e411分析仪“反扫描法”利用剩余试剂的价值研究

蓝保毅，梁振昌，唐龙，祝红梅

（广东省中山市石岐苏华赞医院检验科，广东 中山 524800 E－mail：liuzhoulby＠foxmail.com）

电化学发光免疫测定（electro－chemiluminescence immunoassay，ECLIA），采用先进的化学原理和生物医学工程技术，与酶免疫技术、放射免疫技术相比，它具有检测灵敏度高、检测线性范围宽、检测试剂稳定、无污染以及快速的检测时间等优点，并且对患者及检测的工作人员没有放射性伤害，目前已被医学检验运用于肝炎病毒、激素类、肿瘤标志物、药物浓度监测及冠状动脉疾病等方面的检测，是免疫分析重要的发展方向和趋势［1－2］。

但其检测成本相对昂贵，一个试剂盒的价格从上千元至上万元不等，被称为“金水”。因此降低检测成本成为用户最关心的问题［3］。试验过程观察发现，试剂本身经发光仪的编码扫描后进行样本检测，100（或200）人份的试剂做完后，仪器会自动报警用完试剂（提示要更新试剂才能继续下一步的检测），但试剂实际剩余的量还足以进行多个（7～15）人次的测试。本研究旨在通过“反扫描法”充分利用剩余试剂再进行检测，并对其可行性进行评价，以达到既降低测试成本，又保证检测结果的准确性。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂 ①罗氏Cobas e411电化学发光免疫分析仪。②新试剂为罗氏Cobas e411电化学发光免疫分析仪配套试剂；③用“反扫描法”利用的剩余试剂。③定标液和质控物由罗氏原装配套提供。定标液和质控血清：分低、中、高三个不同浓度。

1.2 标本收集 中山市石岐苏华赞医院检验科收集检测血清，分低、中、高三个浓度的标本，于干净容器内混匀，少量分装置低温保存备用。精密度测试用临床常规检测后病人的新鲜混合血清。

1.3 方法

1.3.1 剩余试剂的“反扫描” 已报警“用完试剂”的试剂盒（最好在盒上标注“反”字），反向置于仪器的试剂盘上（即黑瓶的条码朝向扫描窗一侧），进行“试剂扫描”，扫描后，仪器显示试剂的量跟原装新试剂的量是一样的，因此可进行常规检测操作。

1.3.2 实验项目 AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH。应注意的是检测均在各项目的同批号试剂内，并在有效期内进行。

1.3.3 精密度测定

1.3.3.1 批内精密度 精密度测定样本10份，置室温30min后，取5份样本与常规标本一起，用原装试剂检测AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH。随后另取5份标本用反扫描的剩余试剂检测同样的项目。记录所得数据，并计算两组试剂检测项目的（±s）和变异系数（CV）。

1.3.3.2 批间精密度 每天用原装试剂对 AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH 进行一次精密度测试，再用反扫描法的剩余试剂检测相同的项目进行一次精密度检测。共10次后，收集所得数据，计算两组试剂检测的（±s）和CV。

1.3.4 质控血清测定 分别用原装试剂和反扫描的剩余试剂做质控分析，检测低、中、高三个水平质控品的 AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH结果对比，见表3。

1.3.5 回收试验 取广东省临床检验中心提供的室间质评样本7份（各100μl）作为基础样本，分别加入等量的AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH 定值值标准品作为分析样本，先用“反扫描”的剩余试剂检测基础样本中AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH 各项目的值，再检测分析样本各3次，各取平均值，再算其回收率。

1.4 统计学分析 统计学处理运用SPSS数据统计分析软件进行，计量资料用（±s）表示，组间比较用t检验，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组试剂的精密度试验 具体数据见表1和表2。两组试剂检测AFP等项目的批内精密度比较发现P＞0.05。批间精密度比较，P＞0.05。

表1 两组试剂检测各项目的批内精密度

2.2 两组试剂的质控血清检测结果 分别用原装试剂和“反扫描法”的剩余试剂做质控分析，低、中、高三水平的质控样品测定值均在规定的参考范围内，两组试剂各项目检测结果，见表3。

2.3 “反扫描法”利用剩余试剂做回收试验 回收试验的结果，见表4。

3 讨论

研究相关电化学发光免疫分析仪的工作原理及其运行的规律，发现：罗氏公司生产的全自动电化学发光免疫分析仪有E170、Elecsys1010、Elecsys 2010以及改良的Cobas e411、E401、E601等，其生产的配套试剂均通用于这一系列的仪器上。根据这个工作原理，本研究经过多次实验，创造出“反扫描法”，即三联试剂瓶的扫描侧反方向转至内侧，即R2瓶侧的条码转至外侧，运行试剂扫描，扫描完毕后，把试剂瓶转至原正常位置，即可进行样本测试。

表2 两组试剂检测各项目的批间精密度

表3 两组试剂检测低、中、高水平质控血清的结果比较 （±s）

表3 两组试剂检测低、中、高水平质控血清的结果比较 （±s）

原装试剂项目“反扫描法”的剩余试剂低值 中值 高值 低值 中值 高值AFP（μg／L） 24.0±7.4 103.7±33.3 236.4±55 23.6±6.4 104.1±40.3 239.1±61 CEA（μg／L） 2.2±0.7 14.2±5.4 45.9±14.9 1.8±0.8 10.2±7.0 45.2±15.4 CA19－9（U／ml） 43.3±13.4 122.0±34.6 341±70.2 40.7±16.0 127.0±38.2 350±71.1 T3（nmol／L） 1.5±0.4 5.7±2.0 11.1±2.5 1.3±0.5 5.3±2.8 10.7±2.7 T4（nmol／L） 71.8±22.2 162.3±39.6 300±65 70.7±25.2 165.5±34.6 305±67 FT3（pmol／L） 3.8±1.4 8.4±4.2 20.6±6.8 4.2±1.7 8.1±4.6 23.0±7.8 FT4（pmol／L） 10.5±3.5 36.0±10.3 60.1±20.1 10.5±3.5 36.9±11.1 60.5±15.1 TSH（mIU／L） 0.77±0.18 5.6±1.8 30.1±9.7 0.90±0.13 6.0±2.4 28.4±10.9

表4 “反扫描法”回收实验结果

通过批CV分析，本文在两组试剂各项目的批内和批间精密度CV均小于10%，且两组试剂检测结果差异无统计学意义（P＞0.05），实验结果显示，“反扫描法”利用剩余试剂具有很好的重复性和精密度［4］。两组试剂做质控血清分析，低、中、高三个水平的质控样品测定结果差异无统计学意义（P＞0.05），各项目测定值均在范围内，说明“反扫描法”利用的剩余试剂在低、中、高水平的样品检测均和原装试剂差异无统计学意义，各项目的回收率均能控制在90%～110%之间，实测值与理论值呈高度相关。因此，“反扫描法”利用剩余试剂的实验结果显示其重复性、精密度、回收率和线性范围均能达到临床应用的要求。

有部分文献报道FT3、FT4结果差异有统计学意义，试剂不可回收利用［5］。而本文的实验中，却不存在类似现象，经分析推测，可能的原因是：剩余试剂回收的方法不同，本文采用的是“反扫描法”，试剂保持与原装高度的一致性，而文献报道［5］中采用的是不同试剂盒中剩余试剂的混合液，其中的微粒子可能因不能充分摇匀导致试验结果的较大差异。

经多次实验的观察，本人认为，在运用“反扫描法”利用的剩余试剂操作中，为避免因失误而导致检测结果出错，需注意以下几点：①剩余试剂需保证在有效期内使用；②反扫描后的试剂盒要作好明确标注，以区别于新的原装试剂盒；③反扫描后切记把试剂盒反转至正常位置后才能进行常规检测。

综上所述，罗氏Cobas e411分析仪“反扫描法”充分利用剩余试剂不仅极大地削减医学资源的费用，节约检测成本，而且操作简便，保持与原装试剂有高度一致性，检测结果稳定准确，值得在临床医学检验领域推广应用。

［1］ 谭浩.电化学发光免疫分析系统E170的应用评价［J］.实用预防医学，2011，18（3）：527－528.

［2］ 马红霞，曹伟娟，张雪梅，等.罗氏E170全自动电化学发光免疫分析仪剩余试剂再利用结果分析［J］.检验医学，2012，27（3）：206－209.

［3］ 张葵.定量检测系统方法学性能验证实验的基本方法［J］.检验杂志，2009，27（5）：321－323.

［4］ 徐立根.ELISA、MAIA、CLIA和TRFIA试剂盒质量标准探讨［J］.放射免疫学杂志，2006，19（3）：230－233.

［5］ 樊锦秀，李伯利，沈树标，等.ACCESS全自动微粒子化学发光仪回收试剂的利用与评价［J］.实用医学杂志，2001，17（11）：1113－1114.