大黄炮制前后物质基础变化研究

胡永淑（成都市第六人民医院药剂科，成都 610051）

中药炮制是在中医药理论指导下，按照中药药理及药物配伍需求，将药材或饮片进一步加工，使其在炮制后药性发生一定改变，降低或消除毒性及副作用，或者增加某方面疗效，达到增效减毒的目的，使其更适应临床用药需求。而炮制前后药材或饮片自身化学组分及生物活性变化规律，可以丰富药性理论，阐明炮制原理，为制订不同炮制品的质量标准提供可靠依据[1]。

大黄，始载于《神农本草经》，为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄等的干燥根和根茎，味苦，性寒，归脾、胃、大肠、心、肝经[2]。它既能攻击导滞、通肠泄热，又可以导湿热之邪自大便而出，促进黄疸消退；同时入心肝血分，可以泄血中实热火毒、凉血止血而解毒，还可以通利血脉、活血化瘀。目前，有关大黄的炮制品记载较多，常用的有生大黄、酒大黄、熟大黄、大黄炭等4种炮制品。生大黄擅长攻击导滞；酒大黄善解上焦热毒，用于治疗齿龈肿痛、目赤咽痛；熟大黄能泻火解毒，用于治疗疮疡火毒；大黄炭能化瘀、凉血、止血，用于治疗血热积滞的出血诸证。笔者主要以生大黄、酒大黄、熟大黄、大黄炭4种大黄炮制品为对象，研究炮制前后化学组分及物质基础变化，为大黄不同炮制品的质量标准制订提供科学依据。

1 材料

1.1 仪器

722分光光度计（上海第三分析仪器厂）。

1.2 饮片

大黄饮片（四川新荷花医药饮片公司，批号:111002）。

1.3 试剂

没食子酸、大黄素、1，8-二羟基蒽醌对照品（中国食品药品检定研究院，批号分别为041105、756-9003、847-4001）；碳酸钠（重庆北碚精细化工厂）；干酪素（成都科龙化学试剂厂，批号:041005；杭州天和微生物试剂厂，批号:041028）。

2 方法与结果

2.1 大黄不同炮制品的制备

2.1.1 酒大黄 取生大黄饮片适量，按每100kg饮片用15kg黄酒的比例，将大黄饮片用黄酒拌匀，药材闷润1～2h，用80～120Ⅸ文火炒干，取出晾凉，备用。

2.1.2 熟大黄 取生大黄饮片适量，按照每100kg饮片用50kg黄酒的比例，将大黄饮片用黄酒拌匀，药材闷润1～2 h，待黄酒被药材吸尽后，将药材装入特制蒸制容器，密封蒸制18～24h，待药材表面呈黑褐色，内部呈黄褐色时取出晾干，备用。

2.1.3 大黄炭 取生大黄饮片适量，180～220Ⅸ下在热锅中用武火炒至表面焦黑、内部焦褐色时，在饮片表面喷淋少许清水，待火星熄灭后取出晾凉，备用。

2.2 样品溶液的制备[3]

按文献方法，分别将大黄各炮制品粉碎成粗粉，将粗粉过100目筛，得到大黄各炮制品粉末样品。将制得的大黄各炮制品粉末用10倍量的甲醇提取3次，每次30min，滤过，减压回收滤液，装于棕色玻璃瓶中，置阴凉处贮藏，得大黄不同炮制品的样品溶液，备用。

2.3 检测项目

2.3.1 薄层色谱（TLC）鉴别 取生大黄粉末样品0.1 g，加入20ml甲醇浸渍1 h，滤过后取5ml滤液蒸干，加10ml水溶解后，再加入1ml盐酸，水浴加热30min，冷却后用乙醚提取，每次20ml，提取2次，将提取的乙醚液蒸干，残渣加入氯仿进行溶解，制成1ml的生大黄溶液，作为对照溶液；按上述方法分别制备大黄不同炮制品的溶液。分别吸取生大黄及各炮制品溶液4μl，点于同一加入0.3%羟甲基纤维素钠的硅胶H板上，以正己烷-醋酸乙醋-甲酸（30∶10∶0.5，V/V/V）为展开剂，展开晾干后，置紫外光灯（365nm）下检视[4]。结果，大黄不同炮制品色谱中，在与生大黄色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光斑点；经氨蒸气熏后，置日光下检视，斑点变为红色。大黄不同炮制品的TLC图见图1。

图1 大黄不同炮制品的TLC图1，5.生大黄；2～4.熟大黄；6～7.酒大黄；8.大黄炭Fig 1 TLC of processed R.palmatum products1，5.R.palmatum；2-4.prepared R.palmatum；6-7.prepared R.palmatum with wine；8.charred R.palmatum

2.3.2 鞣质质量分数的测定[5-6]精密称取0.027mg/ml的没食子酸溶液25ml，置50ml棕色量瓶中，加水稀释至50ml，再精密量取5ml，加水稀释至25ml，摇匀，作为对照品溶液。分别量取大黄不同炮制品的样品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，加入1ml磷钼钨酸溶液和10ml水，在760nm波长下分别测定吸光度（A），根据回归方程[A＝5.188c－0.00568（r＝0.9999），c为没食子酸质量浓度]计算溶液中没食子酸含量，作为溶液中总酚量。取大黄不同炮制品的样品溶液12.5ml，加入含有0.3 g干酪素的50ml具塞锥形瓶中，密封后30Ⅸ水浴1 h保温处理，随后取出，待冷却后滤过，精密量取2ml滤液，置25ml棕色量瓶中，在760nm波长下测定A，根据上述回归方程计算溶液中没食子酸的含量，作为不被吸附的多酚量。根据下式计算大黄不同炮制品中鞣质质量分数:鞣质质量分数＝总酚量－不被吸附的多酚量，结果见表1。

表1 大黄不同炮制品炮制前后鞣质、葱醌质量分数测定结果（，‰）Tab 1 Comparison of the contents of tannin and anthraquinone in R.palmatum before and after processing（，‰）

表1 大黄不同炮制品炮制前后鞣质、葱醌质量分数测定结果（，‰）Tab 1 Comparison of the contents of tannin and anthraquinone in R.palmatum before and after processing（，‰）

样品生大黄酒大黄熟大黄大黄炭成分鞣质2.61±0.212.54±0.340.39±0.050.01±0.01结合蒽醌40.02±4.4536.21±5.2417.02±1.362.11±1.18游离蒽醌4.08±1.025.45±3.126.87±1.542.58±0.54总蒽醌44.10±3.0441.66±4.1223.89±1.184.69±1.89

2.3.3 蒽醌质量分数的测定[7]精密称取大黄素对照品1.24mg，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含0.124mg的大黄素对照品溶液。精密吸取大黄不同炮制品的样品溶液10ml，挥去甲醇，作为样品贮备液。加1.0%醋酸镁甲醇溶液，定容至10ml量瓶中，摇匀后在509nm波长处测定A。根据回归方程[A＝3.4624 x+0.0234（r＝0.9992），x为大黄素进样量，大黄素进样量在0.0248～0.248mg范围内与吸收度呈良好线性关系]计算溶液中大黄素质量分数，作为溶液中总蒽醌质量分数；取大黄不同炮制品的样品溶液10ml，加丙酮稀释至25ml量瓶中，加入1，8二羟基蒽醌对照品溶液（精密称取1，8-二羟基蒽醌对照品25mg，置50ml容量瓶中，加丙酮溶解至刻度），以丙酮为空白，在460、540nm波长处测定A（蒽醌的最大激发波长为460nm，固定该激发波长，扫描得发射图谱，得到其发射波长为540nm。选择该最大激发波长和最大发射波长作为测定波长。），根据回归方程[A＝122.81 c+46.224（r＝0.9996），c为1，8二羟基蒽醌质量浓度，1，8二羟基蒽醌质量浓度在0.25～3µg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系]计算溶液中游离蒽醌含量。并按下式计算结合蒽醌的质量分数:结合蒽醌质量分数＝总蒽醌质量分数－游离蒽醌质量分数，结果见表1。

由表1可知，大黄在炮制前、后蒽醌及鞣质含量发生了变化，且变化程度同炮制条件的强烈程度相关。大黄不同炮制品中，熟大黄中游离蒽醌含量最高，生大黄中结合蒽醌含量最高。各成分含量高低排列顺序分别为游离蒽醌:大黄炭＜生大黄＜酒大黄＜熟大黄；结合蒽醌:大黄炭＜熟大黄＜酒大黄＜生大黄；鞣质:大黄炭＜熟大黄＜酒大黄＜生大黄。

2.3.4 其他指标[8]按2010年版《中国药典》（一部）中灰分测定法、干燥失质量测定法和浸出物测定法进行检测，分别记录检测结果，结果见表2。

表2 大黄不同炮制品质量检测结果（，%）Tab 2 Results of quality test of different processed R.palmatum products（，%）

表2 大黄不同炮制品质量检测结果（，%）Tab 2 Results of quality test of different processed R.palmatum products（，%）

样品生大黄酒大黄熟大黄大黄炭检测指标干燥失质量6.52±0.416.40±0.346.12±0.185.41±0.24总灰分质量分数8.56±0.749.24±0.689.08±0.659.79±0.48酸不溶灰分质量分数0.58±0.050.51±0.040.44±0.060.48±006浸出物质量分数47.02±4.3145.56±3.2145.42±2.9813.02±0.71

由表2可知，生大黄、酒大黄、熟大黄、大黄炭总灰分及酸不溶灰分成分含量相差不多；酒大黄、熟大黄干燥失质量及浸出物含量无明显变化，大黄炭干燥失质量及浸出物含量明显降低。

3 讨论

3.1 大黄饮片炮制前后一般项目检测

目前，相关部门沿用《中国药典》中各饮片检测标准对不同中药饮片进行质量检测。规定炮制后干燥失质量应不超过15.0%；总灰分质量分数不得超过10.0%；酸不溶灰分质量分数不得超过0.8%；浸出物质量分数不得少于25.0%。本试验中，生大黄、酒大黄、熟大黄及大黄炭4种大黄炮制品在干燥失质量，总灰分含量、酸不溶灰分含量方面均同国家规定相符合。在浸出物检测上，酒大黄及熟大黄浸出物含量变化不大，高于45%，符合《中国药典》规定，但大黄炭浸出物含量为（13.02±0.71）%，低于《中国药典》标准，这应该同大黄饮片在炒炭过程中因剧烈受热，饮片内成分被大量分解破坏相关。

3.2 大黄饮片炮制前后化学组分含量及药理作用改变

多数学者实验研究证明，大黄的泻下作用同其中含有的鞣质及蒽醌含量多少有密切关系[9]。生大黄饮片中鞣质含量高，并含有多种苷类组分，因此其具有明显的泻下、解热功效；熟大黄、大黄炭中以蒽醌苷元、没食子酸等化分成分为主，而苷类组分的含量下降，因此其泻下、解热作用减弱，活血化瘀功能增强。这些都说明大黄泻下、解热作用与蒽醌含量是密切相关的。同时，泻下解热作用与鞣质含量也呈正相关。传统中医理论中，生大黄苦寒，炮制后苦寒性质得到缓和，且大黄炭苦寒之性基本消失，故大黄苦寒性质强弱同其泻下解热作用呈正相关。因此，大黄中鞣质及蒽醌含量同大黄苦寒之性相关，为大黄苦寒性质的物质基础，且大黄中鞣质及蒽醌含量变化同大黄药性改变关系密切。

在大黄不同炮制品中，熟大黄中游离蒽醌含量最多，生大黄中结合蒽醌含量最多，并且含量变化与炮制条件的强烈程度相关。生大黄中鞣质含量最高，炮制过程中根据受热程度而减少，其中大黄炭中鞣质含量最低，几乎检测不到。现代药理研究证实，鞣质中的没食子酸及d-儿茶素是大黄发挥止血作用的有效成分。但是，在本试验中生大黄中鞣质含量最高，按照药理实验结论，生大黄止血效果应该强于大黄炭及其他炮制品，而临床应用中，大黄炭止血效果最好，两者在理论上相悖，今后还应做进一步研究。大黄炭中总蒽醌含量最低，这应该同炒炭炮制中，条件剧烈，各种化学组分被严重分解破坏有关。熟大黄因为受热时间久，加热温度高，总蒽醌成分也受到显著破坏，而结合蒽醌多分解为游离蒽醌，因此熟大黄中游离蒽醌含量最高。而酒大黄在制备过程中，加热温度低，因此被破坏程度低，蒽醌成分在结合及游离两种类型间相关转化，因此总量变化不大。

总之，从炮制前后鞣质及蒽醌类物质基础含量变化能够显示大黄不同炮制品间药性及毒性差异，反映大黄饮片不同的苦寒性质，从而为不同炮制品临床作用发挥提供科学理论基础，同时也可为制订不同炮制品的质量标准提供参考。

[1]宾驰，颜栋林.高效液相色谱法测定中药退黄外洗液中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量[J].临床合理用药杂志，2011，4（17）:48.

[2]荆晶，陆小丹，周旭美.HPLC法测定大黄相关制剂中大黄素的含量[J].遵义医学院学报，2010，33（4）:83.

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[5]耿家玲，沈勇，康绍建.HPLC法测定栽培亚大黄中3种成分的含量[J].中国药师，2011，14（5）:78.

[6]王坤，鲁静.中药材中鞣质含量测定方法的研究[J].中国药事，2004，18（6），361.

[7]刘素兰.HPLC法测定三黄片中大黄素及大黄酚的含量[J].中国美容医学，2012，21（14）:156

[8]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:附录53、附录51、附录62.

[9]戴晓燕，盛振华，郝云云.不同产地大黄中微量元素含量的主成分分析及聚类分析[J].中华中医药杂志，2012，27（5）:231.