妇血康颗粒的促排卵作用Δ

付书婕，李迪，黄增琼，巫玲玲，蒋伟哲（广西医科大学药学院，南宁 530021）

妇血康颗粒是根据民间临床经验，采用广西地区独有的天然名贵草药滇桂艾纳香（Blumea riparia（Bl.）DC.）作为主药，经现代科学工艺浓缩精炼而成的纯中药制剂，是一种疗效确切，安全无毒副作用的妇科、产科血症止血药。临床研究表明，妇血康颗粒对流产后子宫出血不净（血瘀证）疗效确切。其中，君药滇桂艾纳香具有补血活血、祛瘀生新、敛血止血之功效，能促进子宫平滑肌收缩，使血管闭合，加快子宫内膜脱落，具有很好的止血作用[1]。中药复方治疗月经失调、功能性不孕等下丘脑-垂体-卵巢（HPO）轴功能失调性疾病由来已久，而对其药效学研究始于20世纪80年代[2]。目前，有关妇血康颗粒的促排卵作用研究尚未见报道，本课题组首次采用未成年大鼠自然条件下HPO轴功能不健全模型，观察妇血康颗粒对大鼠排卵的影响，并探讨其相关机制，为充分利用广西特色药材资源提供实验依据。

1 材料

1.1 仪器

FMA-87型全自动放免γ计数器（上海技术监督局实验工厂）；SZX10型显微镜（日本Olympus公司）；BS110 S型电子天平（德国Sartorius公司）；HP8453型分光光度计（美国Agilent公司）；Fj-200型高速分散均质机（上海标本模型厂）。

1.2 药品与试剂

妇血康干膏粉（广西桂西制药有限公司，批号:110510，0.7 g干膏粉相当于10 g妇血康颗粒）；己烯雌酚（合肥久联制药有限公司，批号:20110102，规格:0.5mg/片）；ERα（MC-20）兔抗大鼠多克隆抗体（一抗，批号:SC-542）、兔二步法检测试剂盒（二抗，批号:SC-658）均购自美图Santa Cruz公司；DAB显色试剂盒（批号:110820）、孕激素（P）放射免疫试剂盒（批号:110912）、雌二醇（E2）放射免疫试剂盒（批号:111015）、黄体生成素（LH）放射免疫试剂盒（批号:111020）、促卵泡激素（FSH）放射免疫试剂盒（批号:110723）均购自北方生物技术研究所。

1.3 动物

SPF级Wistar未成年大鼠40只，♀，6～7周龄，体质量95～110 g，购自广西医科大学实验动物中心[实验动物使用许可证号:SCXK（桂）2009-0002]。

2 方法

2.1 分组、给药与标本取材

40只大鼠随机均分为4组，即正常对照（等容生理盐水）组、己烯雌酚（1mg/kg）组与妇血康高、低剂量（400、100mg/kg）组。ig给药，每天1次，连续14 d。于末次给药1 h后，拔眼球采血3ml，置于未加抗凝的试管中，静置20min，以离心半径为8 cm、3000 r/min离心20min，取血清，－80Ⅸ贮藏，备用。

2.2 性激素指标测定

通过放射免疫分析法常规测定大鼠血清FSH、LH、E2和P的水平，按照相应试剂盒的方法步骤分别测定。

2.3 卵泡成熟总数计算与卵巢、子宫的组织形态观察

处死大鼠，剖取卵巢、子宫，分别称定质量后固定于10%甲醛内，常规脱水，包埋，6 μm切片，苏木精-伊红（HE）染色，光镜观察卵巢、子宫的组织形态变化。卵泡成熟总数以每只大鼠双侧卵巢切片中黄体数与成熟卵泡数相加之和计。通过显微镜观察大鼠卵巢、子宫的组织形态学。

2.4 统计学方法

3 结果

3.1 妇血康颗粒对大鼠血清FSH、LH、E2和P水平的影响

与正常对照组比较，妇血康高剂量组大鼠血清LH活性增强，E2、P含量减少，差异有统计学意义（P＜0.05）；妇血康低剂量组大鼠血清LH活性增强，FSH活性减弱，P含量减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。妇血康颗粒对大鼠血清FSH、LH、E2和P水平的影响见表1。

表1 妇血康颗粒对大鼠血清FSH、LH、E2和P水平的影响（，n＝10）Tab 1 Comparison of the leves of FSH，LH，E2and P in serum of model rats among those groups（，n＝10）

表1 妇血康颗粒对大鼠血清FSH、LH、E2和P水平的影响（，n＝10）Tab 1 Comparison of the leves of FSH，LH，E2and P in serum of model rats among those groups（，n＝10）

与正常对照组比较:＊P＜0.05vs.normal control group:＊P＜0.05

组别正常对照组己烯雌酚组妇血康低剂量组妇血康高剂量组P，n g/ml 27.00±8.9519.25±7.95＊15.33±10.50＊11.56±9.70＊剂量，mg/k g 1100400 FSH，mu/ml 0.76±0.340.60±0.330.46±0.24＊0.77±0.33 LH，mu/ml 0.38±0.470.83±0.81＊1.31±0.58＊2.15±0.82＊E2，p g/ml 1284±3221275±3291062±263987±371＊

3.2 妇血康颗粒对大鼠成熟卵泡总数的影响

与正常对照组比较，妇血康高、低剂量组大鼠成熟卵泡总数增加，差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。妇血康颗粒对大鼠成熟卵泡总数的影响见表2。

3.3 妇血康颗粒对大鼠卵巢组织形态学的影响

大体观察到己烯雌酚组大鼠卵巢略大，颜色较深；妇血康高、低剂量组与正常对照组无明显差异。镜下观察到正常对照组可见较多原始、初级、次级卵泡，成熟卵泡较少见，偶见黄体；妇血康高、低剂量组可见各级卵泡，成熟卵泡略增，黄体增多，颗粒细胞层变厚；己烯雌酚组可见各级卵泡，较多的成熟卵泡，黄体增多，卵细胞清晰可见，颗粒细胞层明显增厚。大鼠卵巢组织形态学变化见图1、图2。

表2 妇血康颗粒对大鼠成熟卵泡总数的影响（，n＝10）Tab 2 Comparison of the amount of mature follicle of rats among those groups（，n＝10）

表2 妇血康颗粒对大鼠成熟卵泡总数的影响（，n＝10）Tab 2 Comparison of the amount of mature follicle of rats among those groups（，n＝10）

与正常对照组比较:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.normal control group:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

剂量，mg/k g组别正常对照组己烯雌酚组妇血康低剂量组妇血康高剂量组1100400卵泡成熟总数/个5.12±1.649.37±2.87＊＊7.50±1.31＊8.25±2.76＊＊

图1 大鼠卵巢组织形态学变化（HE，100×）A.正常对照组；B.妇血康低剂量组；C.妇血康高剂量组；D.己烯雌酚组Fig 1 Morphology change of ovarian tissue of rats among those groups（HE，100×）A.normal control group；B.Fuxuekang low-dose group；C.Fuxuekang high-dose group；D.diethylstilbestrol group

3.4 妇血康对大鼠子宫组织形态学的影响

大体观察到己烯雌酚组大鼠子宫轻度充血，明显增粗、子宫长度没有明显变化；妇血康高、低剂量组与正常对照组无明显差异，大鼠子宫外观色白，直径较细。镜下观察到正常对照组大鼠子宫管壁较薄，黏膜较薄，固有层结缔组织较致密，腺体较少，腺腔小，上皮细胞呈柱状，排列紧密；妇血康高、低剂量组大鼠子宫内腺体数目略增多，略大，其他不太明显；己烯雌酚组大鼠子宫内膜增厚明显，组织疏松，子宫腺体增多、变大，上皮细胞高柱状排列，间质内有水肿。大鼠子宫组织形态学变化见图3。

4 讨论

图2 大鼠卵巢组织形态学变化（HE，200×）A.正常对照组；B.妇血康低剂量组；C.妇血康高剂量组；D.己烯雌酚组Fig 2 Morphology change of ovarian tissue of rats among those groups（HE，200×）A.normal control group；B.Fuxuekang low-dose group；C.Fuxuekang high-dose group；D.diethylstilbestrol group

图3 大鼠子宫组织形态学变化（HE，400×）A.正常对照组；B.妇血康低剂量组；C.妇血康高剂量组；D.己烯雌酚组Fig 3 Morphology change of uterus of rats among those groups（HE，400×）A.normal control group；B.Fuxuekang low-dose group；C.Fuxuekang high-dose group；D.diethylstilbestrol group

在卵泡发育过程中，卵泡细胞表达的功能性促性腺激素受体是卵泡获得对促性腺激素发生反应能力的前提[3]。由于卵泡发育成熟及成熟卵泡排出是连续过程，正常排卵需要完整的HPO轴之间的正常功能，其中任何一个环节失调，或器质性病变，都可造成暂时或长期的卵泡发育障碍、无排卵[4]。卵泡能否发育成熟直接关系到妇女生殖及内分泌功能是否正常。在下丘脑促性腺激素释放激素的作用下，垂体分泌的FSH和LH直接参与卵巢功能的调节[5]。FSH主要促进卵泡的各种细胞的生长发育，以利生殖细胞的成熟，并刺激卵巢颗粒细胞的增生，使卵泡激素分泌及芳香化酶活化[6]。LH主要作用是促排卵，在卵巢周期中期出现高峰，促使卵泡成熟，排出卵子，使排卵后的卵泡变成黄体，黄体的形成与维持都需要有LH，并能使黄体合成分泌P。FSH是刺激卵泡发育最重要的激素，可促使窦前卵泡及窦状卵泡的颗粒细胞增殖与分化，缝隙连接形成、分泌卵泡液，使卵泡生长发育[7]。FSH和LH在卵巢功能调节中具有协同作用[3]。

本研究结果表明，高、低剂量妇血康颗粒均能明显增强未成年♀大鼠血清LH活性及增加卵泡成熟总数。妇血康低剂量组可减弱FSH的活性，但显微镜下观察仍表现为促进卵巢的成熟，增加卵泡成熟总数，可能妇血颗粒康本身就有类似FSH的作用；妇血康高剂量组大鼠血清FSH分泌量无明显变化（本研究中接近正常值），提示妇血康颗粒在一定剂量范围内对FSH活性有减弱作用，具体机制有待进一步探讨。

妇血康颗粒能促进卵巢的成熟和排卵，促进黄体的形成与合成，使单一雌激素作用转为雌、孕激素的共同作用。显微镜下观察可见妇血康对正常未成年大鼠的子宫组织未有明显影响，但稍有促进子宫向分泌期转化的趋势。妇血康颗粒可降低健康大鼠E2、P的含量，其抑制作用不是通过FSH及LH而引起的。因此可以推测妇血康颗粒抑制E2及P的作用机制是妇血康颗粒与雌激素受体结合，直接或间接抑制芳香化酶或孕激素合成的关键酶。

妇女进入更年期，卵巢功能逐渐减退，分泌的雌激素水平降低，对下丘脑、垂体的负反馈作用减弱，使下丘脑促性腺激素释放激素分泌增加，继而FSH分泌增加，升高的FSH会加快卵泡成熟的速度，促使雌激素的分泌又增加，因而雌激素水平呈现或高或低的波动状态[8]。在此变化过程中。人体不断地进行自身调节，使HPO轴达到一种新的相对平衡状态。E2下降的过程并非呈线性，而是波动性下降，直至最终稳定在较低水平，这种雌激素的撤退比雌激素低下本身更为重要[9]。妇女更年期这种HPO轴功能的失调，不仅影响了其有关激素的效应器官功能，而且直接或间接地影响了植物神经系统，引起全身一系列复杂的病理改变，导致更年期综合征的发生[10]。

笔者选择未成年大鼠作为HPO轴及靶器官结构功能调节模型，是因为其HPO轴调节功能不健全，没有正常卵巢周期。而未成年大鼠是自然条件下HPO轴功能不健全的模型，未成年大鼠HPO轴及靶器官反应灵敏，便于观察效果；未成年大鼠来源充足，周龄、体质量等生理状况容易控制在同一水平，可减少实验的系统误差。

本研究发现，妇血康颗粒能够使大鼠血清E2含量减少，下丘脑弓状核雌激素受体升高，使局部下丘脑神经肽Y水平降低，促性腺激素释放激素分泌升高，从而使FSH活性减弱，LH活性增强，促进排卵。综上所述，妇血康颗粒能通过多环节、多靶点发挥促排卵作用，其调节HPO轴功能的作用是妇血康颗粒的重要药理作用之一，为临床防治生殖内分泌平衡失调性疾病提供了药理学基础。本研究对药效学深入研究，为拓展企业优势产品妇血康颗粒的新用途——促进卵泡成熟及排卵作用提示了一个研究方向。但是，妇血康颗粒促进排卵的作用机制可能是多方面的，有待进一步系统、细致的研究。

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