一起孔雀新城疫的诊断与防治

马 龙，李 莉，王 磊，彭丽娟，杨佳冰，赵 燕，赵 原

（1.宁夏动物疾病预防控制中心，宁夏 银川 750001；2.灵武市动物疾病预防控制中心，宁夏 灵武 750400）

1 流行概况

2012年3月16日至4月23日，宁夏某动物园先后从山东某市调入290只孔雀。4月21日1只孔雀首先发病，对病死孔雀进行详细记录，眼观病理变化主要表现为呼吸困难、眼肿胀、采食减少，卧地不起，嘴流[1]黏液，拉白绿色稀粪便。至4月26日先后又8只发病，经药物治疗，每只按（3～4羽份/只）肌注新城疫疫苗，进行紧急免疫接种，无明显好转，没有配合其他药物进行辅助治疗。到6月18日共死亡54只，随后出现零星死亡。8月5日突然死亡79只， 8月6日上午又死亡13只，截至8月6日园内共死亡146只孔雀。发病孔雀的主要临床症状为呼吸困难，下痢、精神紊乱。动物防疫部门对发病孔雀采用新城疫疫苗大剂量（3～5羽份／只）肌注，并用0.1%菌毒净带孔雀消毒，饮用含适量多维、10%葡萄糖水治疗之后这批孔雀发病率急剧下降再无死亡报告。

2 临床症状

患病孔雀精神沉郁，头肿，鼻塞，不愿走动，厌食，下痢，体温高达44℃，羽毛松乱，呼吸困难而呈张口呼吸，口中流有白色[2]黏液。部分表现神经症状，双翅麻痹下垂，双腿不能站立，头颈扭转呈现转圈动作。

3 剖检变化

剖检病死孔雀发现气管黏膜出血，肺组织有鱼肉样变，腺胃乳头出血、溃疡，肌胃肌层有出血点，十二指肠肿、弥漫性出血，盲肠扁桃体肿胀、黏膜出血，肾肿大、花斑样出血，胸腔积水，心脏呈绒毛心、形成白色纤维覆盖，肝脏表面呈白色纤维且脆。

4 实验室诊断

采集孔雀血液和病死孔雀咽喉、气管、肠管、心、肝、脾、肺、肾和脑等组织采用RT—PCR方法进行检测。

4.1 样品的采集

采集疑似发病孔雀病料5份，利用RT—PCR方法检测新城疫病毒（NDV）。同群发病静脉采血5份，周边未接触病变10份。

4.2 材料与试剂

4.2.1 TransScriptTM One-Step RT—PCR SuperMix kit购自北京全式金生物技术有限公司，Marker DL2000购自大连宝生物工程有限公司。

4.3 样品的处理

4.3.1 采集病死孔雀的组织样品按照常规方法用pH7.2的PBS溶液进行研磨，反复冻融3次，10000r/min离心3min，取上清液作为RT—PCR试验材料。

4.4 RNA的提取

4.4.1 病毒RNA按公司High pure Viral RNA Kit试剂盒说明书提取

4.4.2 对疑似患病孔雀组织和同群进行新城疫RT—PCR检测

4.4.3 目的基因的扩增分析

4.4.3.1 新城疫RT—PCR全预混通用反应液中含有模板以外的所有RT—PCR所需酶、引物及各种离子。在各设定的PCR管中分别加入24uL反应液、3uLCI类阳性对照及3uLCII类阳性对照，使总体积达30uL。

4.4.3.2 反应条件为：42℃作用35min，90℃作用3min。反应参数：94℃ 30s，55℃ 40s，72℃40s，35个循环，72℃延伸7min。扩增产物以1.5%琼脂糖凝胶电泳检测4.4.3.3用1×TAE缓冲液配制1.5%的琼脂糖凝胶，100V电泳30min后取5uL RT—PCR扩增产物进行电泳，于紫外凝胶紫外灯下进行观察。

4.5 实验结果

对疑似患病孔雀组织和同群进行新城疫病毒RT—PCR检测，得到目的条带，经1.5%的琼脂糖凝胶电泳分析，扩增出了特异的条带，与预期结果一致。综合临床表现和病理特征以及RT—PCR检测结果，本病确定为新城疫病毒感染。

图2 实验结果

5 防治

5.1 对新引进的孔雀必须严格隔离和消毒，并注意人员、包装物品、车辆等一切与孔雀有接触的物品的兽医卫生。

5.2 坚持经常、定期地对鸟舍和周围环境的清扫与消毒。

5.3 紧急接种新城疫活疫苗可提高鸟体对新城疫的紧急免疫力。

5.4 对可疑病例应尽快利用实验室等诊断手段，做到早确诊并果断采取一系列有效措施，包括将病鸟及时隔离，鸟舍和饲养用具及时消毒并对该场地进行封锁，对个别病鸟进行淘汰，以防病原扩散和蔓延。

5.5 病死孔雀应采取无害化处理，将其深埋或焚烧，并做好接触封锁的一切善后工作。

[1]贾松涛，刘星，宋庆华.孔雀新城疫继发大肠杆菌病的诊治[J].中国畜牧兽医，2011，38（12）：205-206.

[2]张媛，王丹，葛晨霞，等.孔雀组织滴虫病的病理学诊断[J].中国兽医杂志，2011，47（8）：49-50.