β－微管蛋白及M2型丙酮酸激酶在卵巢浆液性囊腺癌诊断中的意义

丁匀浚毓，邹颖刚，田 园，闫淑芬，王淑丽，张立会＊

β－微管蛋白及M2型丙酮酸激酶在卵巢浆液性囊腺癌诊断中的意义

丁匀浚毓1，邹颖刚2，田 园1，闫淑芬1，王淑丽1，张立会1＊

（1．吉林大学第二医院妇科，吉林长春130041；2．吉林大学第二医院生殖中心）

微管是组成细胞骨架的主要部分，具有聚合和解聚的动力学特性［1］。由α－微管蛋白和β－微管蛋白异二聚体组成［2］。γ微管蛋白参与微管的组装，但并非微管的组分。微管的动力学特性使其在细胞有丝分裂起重要作用，其中β－微管蛋白的过表达是恶性肿瘤早期形成的关键［3］。Warburg效应指肿瘤细胞在氧气即使充足时亦经糖酵解途径代谢，消耗大量葡萄糖产生乳酸，这种现象被也称为肿瘤的有氧糖酵解［4］。M2型丙酮酸激酶（PKM2）即是这一过程的限速酶。它在肿瘤细胞中过表达，并以二聚体形式存在［5］。本文通过对比β－微管蛋白及M2型丙酮酸激酶在卵巢浆液性囊腺瘤与卵巢浆液性囊腺癌组织中表达的差别，进一步探索这两种蛋白与卵巢浆液性囊腺癌分期的关系，寻求卵巢浆液性囊腺癌早期诊断新指标。

1 资料和方法

1．1 一般资料

取吉林大学第二医院2009年8月—2012年11月临床病理资料完整的石蜡切片，经双盲病理诊断，随机抽取卵巢浆液性囊腺癌、卵巢浆液性囊腺瘤各40例。

1．2 试剂与仪器

C－FOS抗体购于北京博奥森生物技术有限公司；SP－9710试剂盒和DAB试剂盒购于福州迈新生物技术开发有限公司。

免疫组织化学检测：取得临床标本组织立即泡于10%福尔马林固定液中固定24h，予以常规石蜡包埋、切片，制成4微米切片；先行HE染色，再切片贴附于涂有多聚赖氨酸的玻片上备用待行下一步的免疫组化染色，相应抗体检测采用免疫组化S－P法（链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶），按试剂盒说明书进行。

1．3 免疫组织化学结果评价标准

染色阳性：细胞质内呈均匀着色的棕黄色颗粒，背景清晰，无非特异性着色。依据Tanaka的定量计分法计算染色结果［6］：选取5个代表性区域，400倍镜下评定显色强度：棕褐色、棕黄色、浅黄色、未着色分别得3、2、1、0分；计数阳性细胞百分率：＞75%、50%～≤75%、25%～≤50%、5%～≤25%、≤5%分别得4、3、2、1、0分；两项得分相乘，取各视野得分的平均值。按照分数分为4个等级：（＋＋＋）：≥9分，（＋＋）：5～8分，（＋）：2～4分，（－）：0～1分。

1．4 统计学处理

本实验免疫组化检测所得结果为等级资料，采用SPSS 17．0统计分析软件，以χ2检验为统计学方法。P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 β－微管蛋白、PKM2表达和定位

镜下可见棕黄色颗粒均匀着色于细胞质中（图1，2），各组β－微管蛋白、PKM2免疫组织化学染色评分情况（表1），卵巢浆液性囊腺瘤组阳性率低于卵巢浆液性囊腺癌组。

表1 β－微管蛋白及PKM2在不同组织中的表达情况

图1 β－微管蛋白在卵巢浆液性囊腺瘤及浆液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中的表达

图2 PKM2在卵巢浆液性囊腺瘤及浆液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中的表达

2．2 β－微管蛋白、PKM2表达的组间相关性

β－微管蛋白、PKM2在卵巢浆液性囊腺癌及卵巢浆液性囊腺瘤病例中的表达差异均有统计学意义（β－微管蛋白：χ2＝39．596，P＝0．000；PKM2：χ2＝17．802，P＝0．000），但阳性率在卵巢浆液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期组间差异均无统计学意义（P＞0．05），且阳性级别与肿瘤分期无明显相关性。

3 讨论

目前卵巢癌的主要标志物为CA－125，但其早期其敏感性及特异性都不高。如在结核性胸膜炎、结核性腹膜炎、肾病综合征并发腹水者，其CA－125均可升高［7］。有实验证明β－微管蛋白、PKM2在卵巢癌组织中高表达［8］。本实验进一步探究了卵巢浆液性囊腺癌及浆液性囊腺瘤组织中β－微管蛋白、PKM2表达情况：两者在卵巢浆液性囊腺瘤组织中低表达，在浆液性囊腺癌组织中高表达。这种表达差异有统计学意义。说明这两种蛋白在肿瘤的发生发展中有重要作用。但是这两种蛋白在腺癌组中，染色的阳性级别及阳性率与肿瘤分期无明显相关性，并未出现相关杂志上报道的与肿瘤分期呈正相关的现象。由于样本例数尚不够大，卵巢浆液性囊腺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的分布不均匀，且缺少IV样本，所以仍需加大样本量进行进一步研究。有文献报道在血清及粪便中均可检测到PKM2。在粪便中检测PKM2，结直肠癌的敏感性可达73%。但在血清中如何检测β－微管蛋白，国内外鲜有报道，这为β－微管蛋白应用于临床设置了一道难题。但是，随着科学的不断发展，相信将来必定会找到β－微管蛋白简易方便的检测方法。这必定为卵巢癌的患者带来福音。

［1］Li JN，Jiang JD．Biological characteristics of microtubule and related drug research［J］．Acta Pharm Sin，2003，38：311．

［2］Jordan MA，Wilson L．Microtubules as a target for anticancer drugs［J］．Nat Rev Cancer，2004，4：253．

［3］尚 海，潘 莉，杨 澍等．微管蛋白抑制剂的研究进展［J］．药学学报，2010，45（9）：1078．

［4］Warburg O．On the origin of cancer cells［J］．Science，1956，123：309．

［5］孙 倩．M2型丙酮酸激酶（PKM2）在肿瘤代谢和发生中的作用［J］．基础医学与临床，2012，32（5）：462．

［6］Tanaka K，Iwamoto S，Gon G，et al．Expression of survivin and its relationship to loss of apoptosis in breast carcinomas［J］．Clin Cancer Res，2000，6（1）：127．

［7］彭 涛，夏 青，郭 玲，等．CA125检测在肾病综合征中的临床意义［J］．临床检验杂志，2010，28（3）：203．

［8］刘彦红．卵巢桨液性囊腺癌及囊腺瘤的差异蛋白质组学分析［D］．吉林：吉林大学，2010．

2013－01－29）

1007－4287（2014）02－0281－02