高效液相色谱法测定接骨丹片中人参皂苷R g1含量

陈武军，林永山

(1.福建省漳州市中医院，福建 漳州 363000； 福建省漳州市同溢堂药业有限公司，福建 漳州 363000)

接骨丹片由三七、制马钱子、骨碎补、煅自然铜、红花、当归、丹皮、续断、土鳖虫、白芍、茯苓、木香、儿茶、公丁香、沉香、制大黄、莲子、桔梗等中药组方，是漳州市中医院的特色制剂之一，为骨伤科专科用药，已在临床应用40多年[1]。其具有续筋接骨、通络消肿止痛之功效，用于骨折中、后期治疗和急性软组织挫伤。为控制其质量，笔者参考有关文献[2]，对接骨丹片质量标准进行了研究。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)。人参皂苷Rg1对照品(中国食品药品检定研究院，批号为110703-201108)；接骨丹片(委托方为漳州市中医院，受托方为同溢堂药业有限公司，批号为20120501)；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Hypersil C18柱(250mm×4.6mm，10μm，大连依利特科学仪器公司)；流动相:乙腈-水(19∶81)；流速:1.0mL/min；柱温:室温；检测波长:203nm；进样量:10μL。

2.2 溶液制备

精密称取人参皂苷Rg1对照品10 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为0.4 g/L的人参皂苷Rg1对照品溶液。取接骨丹片20片，研细，取约2.0 g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，置水浴上回流2 h，弃去乙醚液，取出滤纸筒挥尽乙醚，药渣转移至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，精密称定，加热回流2 h，放冷，再精密称定，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取25 mL，置水浴上蒸干，残渣加水30 mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取5次(20，20，10，10，10 mL)，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 mL，弃去水液，正丁醇回收至干，残渣加甲醇适量使溶解，移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:按处方比例称取除三七外的其他药材，按生产工艺制成阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。分别取对照品溶液、阴性对照品溶液、供试品溶液各10 μL，按拟订色谱条件依法进样测定，记录色谱图，见图1。可见，样品中其他成分对人参皂苷Rg1的测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取人参皂苷Rg1对照品溶液(0.4g/L)2，4，8，12，16，20，24 μL，分别注入高效液相色谱仪，依法测定峰面积，得回归方程 Y=360 291X-19 582，r=0.999 6(n=7)。结果表明，人参皂苷Rg1进样量在0.843 2-5.902 4 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液，连续进样6次，每次10 μL，测定峰面积。结果峰面积的 RSD为0.45%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批样品6份(批号为20120501)，分别精密称定，按2.2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定峰面积。结果平均含量为0.982 4 mg/g，RSD为1.4%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，1，2，4，8，24 h 时进样10 μL，测定峰面积。结果的 RSD 为0.82%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

加样回收试验:取已知含量的样品(批号为20120501)6份，每份1.0 g，精密称定，分别精密加入人参皂苷Rg1对照品适量，按2.2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，并按拟订色谱条件进样测定。结果3批样品中人参皂苷Rg1的含量分别为0.986 7，1.001 3，0.981 6 mg/g。

表1 人参皂苷Rg1加样回收试验结果(n=6)

3 讨论

曾采用如下方法提取样品:样品置索氏提取器中，精密加入甲醇30 mL，置80℃水浴上加热回流3 h，残渣挥干，加水10 mL使溶解，加石油醚(30～60℃)提取2 h，每次10 mL，弃去醚液，水液通过D101大孔树脂柱(内径1.5 cm，长15 cm)，以水50 mL洗脱，弃去水液，再用20%乙醇洗脱，弃去洗脱液，用80%乙醇洗脱，收集洗脱液70 mL，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。但由于杂质较多，分离效果不好，故采用文中的样品提取方法。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:11.

[2]张立军.高效液相色谱法测定通脉降脂片中人参皂苷Rg1含量[J].中国药业，2008，17(20):29.