塞来昔布联合长效兰瑞肽抑制人胃癌转移体内研究

田丰，张艳，卢磊

（自贡市第四人民医院消化内科，四川自贡 643000）

塞来昔布联合长效兰瑞肽抑制人胃癌转移体内研究

田丰，张艳，卢磊

（自贡市第四人民医院消化内科，四川自贡 643000）

目的对胃癌患者予以术前口服塞来昔布联合肌注长效兰瑞肽，探讨该方案是否有助于抑制胃癌转移。方法将2011年3月至2012年3月期间在自贡市第四人民医院对经组织学确诊的40例胃癌拟行手术患者，根据患者自己的选择，分为对照组和试验组。对照组20例，术前不使用塞来昔布及长效兰瑞肽，接受胃大部切除术或胃癌D2根治术；试验组20例，术前1周口服塞来昔布200 mg，qd 7 d，长效兰瑞肽40 mg，im，1次，接受胃大部切除术或胃癌D2根治术。通过检测术后肿瘤组织中E-Cad和MMP-2量的变化及病理组织学变化进行分析。结果对照组65%(13/20)的胃癌细胞E-Cad呈异常染色，试验组胃癌细胞E-Cad异常染色率为25%(5/20)，两组比较差异具有统计学意义(P=0.025)；对照组MMP-2阳性染色率为80%，试验组MMP-2阳性染色率为40%，试验组较对照组明显降低，其差异也具有统计学意义(P=0.022)。结论塞来昔布联合长效兰瑞肽方案可在改善E-Cad表达、降低MMP-2方面具有抑制胃癌转移的效果。

塞来昔布；兰瑞肽；胃癌

手术是目前胃癌最主要的治疗手段，但临床资料表明，单纯胃癌根治术后复发转移率高达50%～70%，大多数患者最终死于肿瘤复发和远处转移。化疗是目前围手术期处理的主要治疗方案，但副反应大，部分患者难以耐受，且会抑制机体抗肿瘤免疫。近年研究[1-2]显示，非细胞毒性药物环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)抑制剂塞来昔布联合生长抑素类似物奥曲肽可以协同抑制胃癌生长转移，且几乎无毒副作用，但奥曲肽半衰期短，需每日频繁注射用药，不便于临床长期应用。本研究对胃癌患者予以术前口服塞来昔布联合肌注长效兰瑞肽，通过检测术后肿瘤组织中上皮性钙黏附蛋白(Epithelial cadherin，E-Cad)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2，MMP-2)量的变化，探讨该方案是否有助于抑制胃癌转移。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2011年3月至2012年3月期间在自贡市第四人民医院经组织学确诊的40例胃癌拟行手术患者。纳入标准：无浅表淋巴结转移及影像学转移证据、术前未接受过放化疗，近一个月未服用非甾体类抗炎药，无消化道明显梗阻及活动性大出血，患者无消化系统及其他系统严重疾病。排除标准：对磺胺、塞来昔布及长效兰瑞肽过敏者，妊娠及哺乳期妇女。40例患者知情同意，以自愿原则自己选择分为对照组和试验组。对照组20例，术前不使用塞来昔布及长效兰瑞肽，接受胃大部切除术或胃癌D2根治术；试验组20例，术前1周口服塞来昔布(Celecoxib，商品名：西乐葆，辉瑞制药有限公司，美国)200 mg，qd 7 d，长效兰瑞肽(Lanreotide，商品名：索马杜林，博福-益普生公司，法国)40 mg，im，1次，接受胃大部切除术或胃癌D2根治术。两组在年龄、性别、肿瘤部位等方面具有可比性，见表1。

表1 两组患者基本情况比较

1.2 标本采集及检测方法术中采集手术标本，切除的胃癌组织经10%福尔马林液固定，石蜡包埋备用。用免疫组化法检测胃癌组织E-Cad及MMP-2的表达，主要试剂包括：PV-9000免疫组化二步法试剂盒(北京中杉生物技术有限公司，北京，中国)、E-Cad鼠抗人单抗浓缩液(Zymed公司，旧金山，美国)，MMP-2兔抗人单抗浓缩液(Zymed公司，旧金山，美国)，二氨基联苯胺(DAB)显色剂。二甲苯，梯度乙醇，苏木精，中性树胶等。

1.3 结果判断

1.3.1 E-Cad结果判断E-Cad免疫染色阳性呈棕褐色，正常胃黏膜染色阳性，呈连续的细胞膜染色；染色阴性或弱阳性，不连续细胞膜染色，称E-Cad异常染色。染色记分参照文献[3]，0分：细胞膜、细胞质均未染色；1分：细胞质染色为主；2分：异质性染色(细胞膜不连续染色、混有细胞质染色)；3分：连续的细胞膜染色。同一切片，以主导染色为主，将不连续的细胞膜染色视为异常，即0～2分为异常染色，3分为正常染色。

1.3.2 MMP-2结果判断免疫阳性染色主要位于胃癌细胞质内，为棕黄色颗粒。根据Kim等[4]及Kabashima等[5]的方法，在低倍镜下选择主要染色区域，再在高倍镜下(×400)对免疫组化染色阳性反应分级：(-)阳性细胞＜10%；(+)10%～40%阳性细胞、染色程度轻-中度；(++)40%以上阳性细胞、染色程度中-重度。

1.4 统计学方法两组E-Cad异常染色率以及MMP-2阳性染色评分比较均采用四格表χ2检验，使用SPSS15.0统计软件进行分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的E-Cad表达和染色评分比较对照组65%(13/20)的胃癌细胞E-Cad呈异常染色，试验组胃癌细胞E-Cad异常染色率为25%(5/20)，较对照组明显降低，差异具有统计学意义(χ2=6.645，P= 0.025)。两组E-Cad染色及评分见图1和表2。

图1 对照组和试验组E-Cad表达比较（免疫组化染色）

表2 两组E-Cad染色评分(例)

2.2 两组患者的MMP-2免疫组化法染色比较对照组MMP-2阳性染色率为80%，试验组MMP-2阳性染色率为40%，试验组较对照组明显降低，差异具有统计学意义(χ2=6.667，P=0.022)。两组MMP-2表达见图2，免疫组化染色阳性反应分级变化见表3。

图2 对照和试验组MMP-2免疫组化法染色比较

表3 两组MMP-2染色评分比较(例)

3 讨论

临床资料表明，单纯胃癌根治术后复发转移率高达50%～70%[6]，大多数患者最终死于肿瘤复发和远处转移。癌细胞的脱落、冲破细胞外基质和基底膜的屏障是胃癌细胞的侵袭转移的重要环节。研究表明，手术本身可促进癌细胞转移[7]。因此，在胃癌确诊后至手术前给予药物，抑制胃癌细胞的迁袭能力，对改善患者的预后具有重要意义。

钙粘附蛋白是一类主要介导细胞间同质粘附的钙依赖性跨膜糖蛋白。其中E-Cad是维持正常上皮完整性和极性的重要跨膜糖蛋白。当E-Cad表达降低或表达异常时，细胞间粘附力降低，上皮组织完整性受到破坏，肿瘤细胞就易于脱离原发灶发生侵袭转移。研究发现E-Cad的异常表达与肿瘤的侵袭和转移有显著的相关性[8-9]。本研究发现多数胃癌细胞浆内E-Cad染色阳性，细胞膜呈不连续染色，当体内应用塞来昔布联合长效兰瑞肽，明显改善了胃癌细胞浆内E-Cad的异常染色，胃癌细胞E-Cad阳性染色呈连续细胞膜分布。提示本方案能显著改善胃癌细胞E-Cad的表达，有助于防止癌细胞从原发灶脱落，降低其侵袭转移能力。

MMPs是一组含有Zn2+、且能降解绝大多数细胞外基质的肽链内切酶，研究显示肿瘤细胞可通过分泌大量IV型胶原酶MMP-2降解基质[10-11]，突破基底膜，从而促进侵袭转移，MMP-2的高表达与肿瘤细胞的侵袭转移具有显著相关性。本研究发现塞来昔布联合长效兰瑞肽显著降低了胃癌细胞MMP-2表达阳性率，提示本方案能抑制胃癌细胞MMP-2的合成，降低其降解基质，突破基底膜能力，有助于抑制胃癌细胞侵袭转移。

有研究对进展期胃癌患者术前应用塞来昔布联合奥曲肽，发现其能明显抑制人胃癌生长及转移[12]。本研究在此基础上将短效生长抑素类似物奥曲肽换为长效生长抑素类似物兰瑞肽，在改善E-Cad表达、降低MMP-2等方面获得同样明显的抗胃癌转移的结果，但改用本方案可避免频繁注射，减轻患者痛苦，降低治疗费用，提高患者依从性，便于临床应用。此外，胃癌术前化疗方案如LFEP方案(顺铂，5-FU，表阿霉素，甲酰四氢乙酸)等均因毒副作用较大，患者不易耐受。相比之下，本方案无明显不良反应，患者依从性均良好。

尽管胃癌术前采用非细胞毒性药物治疗的远期效果还有待长期的临床观察，优化术前治疗方案，有利于这一思路的临床实施。

[1]黄茂涛,陈志新,魏兵,等.塞来昔布联合奥曲肽抑制胃癌转移的体内试验研究[J].中华医学杂志,2006,86(46):3255-3259.

[2]黄茂涛,陈志新,魏兵,等.塞来昔布联合奥曲肽抑制人胃癌生长的临床研究[J].中华消化杂志,2005,9(25):534-538.

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[4]Kim TS,Kim YB.Correlation between expression of matrix metalloproteinase-2(MMP-2),and matrix metalloproteinase-9(MMP-9) and angiogenesis in colorectal adenocarcinoma[J].J Korean Med Sci,1999,14(3):263-270.

[5]Kabashima A,Maehara Y,Kakeji Y.Clinicopathological features and overexpression of matrix metalloproteinases in intramucosal gastric carcinoma with lymph node metastasis[J].Clin Cancer Res, 2000,6(9):3581-3584.

[6]Marrelli D,Rovieelo F,De Stefano A,et al.Risk factors for livermetastases after curative surgical procedures for gastric cancer:a prospective study of 208 patients treated with surgical resection[J].J Am Coll Surg,2004,198(1):51-58.

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[12]Huang M,Chen Z,Wei B,et al.Preoperative growth inhibition of human gastric adenocarcinoma treated with a combination of celecoxib and octreotide[J].Acta Pharmacologica Sinica,2007,28(11): 1842-1850.

Effect of celecoxib combined with long-acting lanreotide for inhibiting the metastasis of gastric caner.

TIAN Feng,ZHANG Yan,LU Lei.Department of Gastroenterology,the Forth People's Hospital of Zigong City,Zigong 643000, Sichuan,CHINA

ObjectiveTo investigate the effect of celecoxib combined with long-acting lanreotide for inhibiting the metastasis of gastric caner.MethodsForty gastric cancer patients diagnosed by biopsies from March 2011 to March 2012 in the Forth People's Hospital of Zigong City were divided into two groups,according to their choice.The control group(n=20)was treated with surgery only,while the study group(n=20)was treated with celecoxib(200 mg, qd 7 d)combined with long-acting lanreotide(40 mg,im)one week before surgery.The expression of E-Cad and MMP-2 in gastric cancer cells were evaluated by immunohistochemical methods.ResultsThe abnormal staining rate of E-Cad and the expression of MMP-2 in gastric cancer cells decreased significantly in the study group compared with those in control group[25%(5/20)vs 65%(13/20),P=0.025;40%vs 80%,P=0.022],with statistically significant difference between the two groups.ConclusionCelecoxib combined with long-acting lanreotide could reduce the abnormal expression rate of E-Cad and the synthesization of MMP-2 in gastric cancer cells,reducing the mobility of gastric cancer cells.

Celecoxib;Lanreotide;Gastric cancer

R735.2

A

1003—6350(2014)05—0636—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.05.0249

2013-08-25)

田丰。E-mail：lcw261@163.com