HPLC-ELSD法测定不同产地小茴香中亚油酸含量

钱生勇，顾湘

南通市肿瘤医院药剂科，江苏南通　226000

HPLC-ELSD法测定不同产地小茴香中亚油酸含量

钱生勇，顾湘

南通市肿瘤医院药剂科，江苏南通226000

摘要目的：建立小茴香中亚油酸含量的HPLC-ELSD测定方法并测定不同产地小茴香的亚油酸含量。方法：采用Cosmosil 5 C18-MS-Ⅱ柱，甲醇-水-冰醋酸（95∶5∶0.1%），流速1.0 mL· min-1，柱温35℃，漂移管温度40℃，雾化气N2，载气流速3.0 L·min-1。结果与结论：本法测定小茴香中亚油酸含量简便可靠。测得4个产地小茴香中亚油酸含量最高为8.73 mg·g-1，最低为1.70 mg·g-1。不同产地小茴香中亚油酸含量差异明显。

关键词亚油酸；小茴香；HPLC-ELSD；含量测定

小茴香始载于《唐本草》，为伞形科植物茴香（Foeniculu vulgareMill.）的干燥成熟果实。味辛，性温，具有散寒止痛、理气和胃的功能。小茴香被国家卫生部正式确定为“既是药品，又是食品”的极具开发潜力的资源之一，受到人们的广泛关注[1]。

小茴香主要成分为脂肪油（约18%）、挥发油（3%～6%）、甾醇及糖苷、氨基酸等[2]。亚油酸是人营养中必须的脂肪酸，具有降低血脂、血压，软化血管，促进微循环的作用。然而，目前国内关于小茴香化学成分的研究中仅对其挥发油进行了分析，历版《中国药典》[3]未对小茴香脂肪油含量测定提出要求。本文建立了HPLC-ELSD色谱测定法，对不同产地小茴香脂肪油中的亚油酸含量进行测定，为其质量控制提供参考。

1　仪器与试药

日本岛津LC-20AB高效液相色谱仪，ELSD-Ⅱ低温型检测器。

小茴香药材购自不同产地，安徽、山西、河南、广西各1批；为伞形科植物茴香Foeniculu vulgareMill.的干燥成熟果实。亚油酸对照品购自中国食品药品检定研究院，纯度高于99.1%；甲醇为色谱纯；冰醋酸为分析纯；水为纯化水。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱NACALAI公司，Cosmosil 5 C18-MS-Ⅱ柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（95∶5∶0.1%）；柱温：35℃；流速1.0 mL·min-1；进样量10 μL。漂移管温度40℃，雾化气N2，载气流速3.0 L·min-1。对照品和样品色谱分离见图1。

图1　亚油酸对照品（A）和样品（B）蒸发光散射图

2.2对照品溶液的制备

精密称取亚油酸25.20 mg，用甲醇溶于10 mL量瓶中定容至刻度，摇匀，作为亚油酸标准储备液，浓度为2.52 mg·mL-1。分别精密量取储备液5.0、2.5、0.75、0.25、0.125 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀作为亚油酸的对照品溶液，浓度分别为1260.0、630.0、189.0、63.0、31.5μg·mL-1。

2.3供试品溶液的制备

精密称定本品粉末（过24目筛）2.0 g，置50 mL具塞三角锥形瓶中，加入石油醚（60～90℃）30 mL，密塞，摇匀，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）2次，每次30 min，滤过，减压回收石油醚得总脂肪油，用甲醇复溶，转移至10 mL量瓶内，甲醇定容，0.45 μm滤膜过滤，取滤液，即得。

2.4线性关系考察

分别精密吸取亚油酸对照品系列溶液10 μL，在上述色谱条件下，直接注入色谱仪进行分析，分析并记录结果（色谱峰面积）。以峰面积积分值A的对数值对对照品进样浓度C（μg·mL-1）的对数值进行回归分析，得回归方程Y=1.548X+1.979，r= 0.9995。结果表明，亚油酸在31.5～1260.0 μL范围内具有良好的线性关系。

2.5精密度试验

精密吸取亚油酸对照品溶液（31.5 μg·mL-1）10 μL，在上述色谱条件下连续进样5次，分别测定亚油酸的峰面积，结果RSD为1.27%。

2.6重复性试验

取同一批小茴香6份（过24目筛），各约2.0g，精密称定，按“2.3”项下操作，按上述色谱条件测定各样品的峰面积，计算得亚油酸含量的RSD为1.25%。

2.7稳定性试验

取小茴香供试品溶液，分别于0、1、2、3、4 h在上述色谱条件下进样分析。计算亚油酸峰面积的RSD为0.74%，结果表明供试品在4 h内稳定。

2.8加样回收率试验

称取已知含量的小茴香（编号1）药材粉末约1.0 g，分别精密按相当于药材中亚油酸的80%、100%、120%的量加入对照品溶液，配制成高、中、低3个水平的加样供试品溶液（各水平平行操作3份），在上述色谱条件下进样分析，计算得亚油酸的平均回收率为98.02%，RSD为1.37%。

2.9样品含量测定

按上述方法对各产地小茴香进行测定，进样量为10 μL，以外标法计算亚油酸的含量。结果见表1。

3　讨论

3.1检测器的选择

文献中关于亚油酸或其他中药材中脂肪酸的化学成分研究多采用GC[4]或GC-MS，由于分析过程中柱温过高，易使亚油酸双键断裂或产生双键的异构化现象。也有报道[5]，使用HPLC法测定火麻仁中α-亚麻酸、亚油酸和油酸含量，由于亚油酸分子结构中仅含有非共轭双键，选择203 nm为检测波长，存在着末端吸收的问题。本文选择了更具通用性的蒸发光散射检测器。该方法具有简便快速、结果准确、重现性好的特点。

表1　不同产地小茴香中亚油酸的检测结果（n=3）

3.2含量差异的原因

本文的检测结果表明不同产地小茴香中亚油酸含量有明显差异，广西产小茴香亚油酸含量较高，安徽次之，再次是河南和山西，可能与土壤、采收时间等有关，其原因有待进一步探讨。

参考文献

[1] 付起凤，张艳丽，许树军，等.小茴香化学成分及药理作用的研究进展[J].中医药信息，2008，25（5）：24-6.

[2] 聂凌云，吴玫涵.小茴香的质量分析研究进展[J].解放军药学学报，2001，17（4）：198-200.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：44.

[4] 韩娜，赵建邦，宋平顺.气相色谱法测定火麻仁中亚油酸及α-亚麻酸的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（3）：83-5.

[5] 秦建平，陆艳芹，罗雪磊，等.HPLC同时测定火麻仁中α-亚麻酸、亚油酸和油酸含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（7）：71-3.

中图分类号R927.2

文献标志码A

文章编号1673-7806（2014）05-422-02

作者简介钱生勇，男，副主任药师E-mail:qianshengyong@126.com

收稿日期2014-04-10修回日期2014-05-15

Determination of Linoleic Acid in Foeniculum vulgare Mill.from Different Habitats by HPLC-ELSD

QIAN Sheng-yong,GU Xiang
Pharmacy Department of Nantong Tumor Hospital,Jiangsu Province,Nantong,226000,China

ABSTRACTObjective：To establish a quantitative HPLC-ELSD method for the determination of linoleic acid inFoeniculumvulgare Mill.fromdifferent habitats.Methods：A column of Cosmosil 5C18-MS-Ⅱwas used with the mobile phase of methanol and water and acetic acid(95∶5∶0.1%),the fIow rate was 1.0 mL· min-1,and the column temperature was set at 35℃.The temperature of drift tube was set at 40℃with an air fIow rate of 3.0 L·min-1for ELSD.Results and Conclusion：The established HPLC-ELSD method is simple and suitable for the quality control of Foeniculumvulgare Mill.The maximumcontent of linoleic acid inFoeniculumvulgareMill.fromfour habitats was 8.73 mg·g-1and the minimumcontent was 1.70 mg· g-1.Great difference of linoleic acid content is shown in Foeniculumvulgare Mill.fromdifferent habitats.

KEY WORDSLinoleic acid;FoeniculumvulgareMill.;HPLC-ELSD;Content determination