马来酸氯苯那敏原料药细菌内毒素检查方法的建立

王相忍

（河南省濮阳市食品药品检验所，河南 濮阳 457000）

马来酸氯苯那敏是抗组胺类药，通过对H1受体的拮抗发挥抗过敏作用，收载于2010年版《中国药典（二部）》，其注射剂采用细菌内毒素检查法控制质量，但原料药尚未将细菌内毒素检查或热原检查项目列入标准中。为了加强药品质量控制，笔者对马来酸氯苯那敏原料药细菌内毒素检查法的可行性进行了研究。现报道如下。

1 仪器与试药

TAL－40D型试管恒温仪(湛江安度斯生物有限公司)；ZH－2型自动漩涡混合器（天津药典标准仪器厂）；CPA225D型电子天平(德国赛多利斯公司)。马来酸氯苯那敏(河南九势制药股份有限公司，批号为120910，121012，121118；上海新华联制药有限公司，批号为120802，121101，规格均为原料药)；鲎试剂(湛江安度斯生物有限公司，批号为1210081，规格为每支0.1 mL，灵敏度为0.25 EU/mL；湛江博康海洋生物有限公司，批号为 1201122，规格为每支 0.1 mL，灵敏度为 0.25 EU/mL)；细菌内毒素工作标准品(中国药品生物制品检定所，批号为150601－201175，效价为120 EU/支)；细菌内毒素检查用水(简称BET用水，湛江安度斯生物有限公司，批号为1205300，规格为每支50 mL)。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂标示灵敏度( )的复核[1]

照2010年版《中国药典（二部）》细菌内毒素检查法规定进行鲎试剂灵敏度复核试验。结果2批鲎试剂灵敏度测试值 (λc)均在 0.5 λ ～ 2.0 λ，表明鲎试剂灵敏度符合规定，可用于试验。

2.2 样品内毒素限值(L)的确定[1]

照2010年版《中国药典（二部）》相关方法，根据公式 L＝K/M 计算，K为每人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂 K＝5 EU/(kg·h)，M为每人每千克体重每小时的最大供试品剂量。本品为原料药，参照该药品制剂马来酸氯苯那敏注射液说明书及《临床用药须知》，最大使用剂量为20mg/h，成人体重按60 kg、滴注时间按 1 h 计算，则 M ＝20/60 ＝0.333mg(kg·h)，则L＝5/0.333＝15.0 EU/mg，高于马来酸氯苯那敏注射液细菌内毒素限制5.0 EU/mg。根据同品种的原料药与不同制剂间的细菌内毒素限值一致性原则，为保证安全用药，将本品安全系数（f）定为 3，则 L＝15/3＝5.0 EU/mg。因此马来酸氯苯那敏原料药的 L确定为 5.0 EU/mg。

2.3 样品预干扰试验

由于干扰试验是在供试品存在的情况下验证内毒素与鲎试剂的反应是否正常，与所使用鲎试剂的灵敏度无关，因此在干扰试验中原则上可使用任意灵敏度的鲎试剂，建议使用较低灵敏度（如0.5 EU/mL或 0.25 EU/mL）的鲎试剂，可尽量避免供试品所含内毒素对干扰试验造成的阳性影响[2]。本试验将 λ为0.25 EU/mL的鲎试剂作为最高灵敏度，本品为原料药，样品最大有效稀释倍数（MVD）取 1，L＝5.0 EU/mg，根据公式 C ＝ λ /L计算出供试品的最低有效稀释质量浓度为0.05 g/L。精密称取供试品64mg，精密加 BET用水，制成质量浓度为6.4 g/L的溶液，再用 BET用水稀释成含马来酸氯苯那敏 3.2，1.6，0.8，0.4，0.2，0.1，0.05 g/L 的溶液，记为 NPC；另制备同一系列质量浓度并含有 2 λ（0.5 EU/mL）细菌内毒素的样品阳性溶液，记为 PPC；用 λ：0.25 EU/mL的2个厂家的鲎试剂，分别与上述NPC和PPC系列溶液进行反应，每1个质量浓度重复2管，并设阴性对照（NC）和阳性对照（PC）各2管。结果见表1。可见，当样品稀释至0.8 g/L质量浓度时对2个厂家鲎试剂均不存在干扰作用。

2.4 供试品正式干扰试验

根据干扰预试验结果，取2个厂家的样品，以BET用水稀释成最终质量浓度为0.8 g/L的溶液。以该溶液和BET用水分别将内毒素工作标准品稀释成 0.5 EU/mL（2 λ），0.25 EU/mL（1 λ），0.125 EU/mL（0.5 λ），0.062 5 EU/mL（0.25 λ）的系列溶液，然后分别用 λ为0.25 EU/mL的2个厂家鲎试剂，按2010年版《中国药典（二部）》细菌内毒素检查法项下规定进行正式干扰试验。结果见表2。内毒素标准品水溶液反应终点浓度的几何平均值(Es)为 0.5 ～ 2.0 λ(包括 0.5 λ 和 2.0 λ)，内毒素供试品溶液反应终点浓度的几何平均值(Et)为 0.5 ～2.0 Es(包括 0.5 Es和2.0 Es)， Es均在 0.5 λ ～ 2.0 λ 之间， Et均在 0.5 Es～ 2.0 Es范围内。结果表明，在此试验条件下，样品对鲎试剂与细菌内素素的反应无干扰。

表2 干扰试验结果

2.5 样品细菌内毒素检查

取5批样品，用BET用水分别溶解稀释制成质量浓度为0.8g/L的溶液，用 λ为0.25 EU/mL的2个厂家的不同鲎试剂，以 L为5.0 EU/mg作为评定标准，按细菌内毒素检查法进行操作和结果判断。结果见表3，表明5批样品经不同厂家的鲎试剂检验，均符合规定。

表3 样品细菌内毒素检查结果

3 讨论

为提高药品质量标准，更有效地控制药品质量，依据2010年版《中国药典（二部）》凡例二十二条“同一原料药用于不同制剂时，需根据临床用药要求制订相应的质量控制项目”的要求，制订该原料药的安全性检查项目非常必要。将马来酸氯苯那敏原料药细菌内毒素限值定为5.0 EU/mg，与其注射剂限值相同，能保障临床用药安全。

采用2批不同厂家的鲎试剂对3批样品进行干扰试验，以及用不同厂家的鲎试剂对5批样品进行方法学验证试验，结果表明，当样品稀释至0.8 g/L质量浓度时对鲎试剂与细菌内毒素的反应无干扰作用，方法学验证结果也符合细菌内毒素检查法有效性的规定。因此，马来酸氯苯那敏原料药采用内毒素检查法（凝胶法）是可行的，建议注射剂生产厂家可用此方法控制采购原料药质量。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：附录88－附录91.

[2] 中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[M].北京：中国医药科技出版社，2010：322.