高效液相色谱法测定肾石消胶囊中延胡索乙素含量

郭迎霞 ,何栋梁,宋静莉,栗 娟

（1.河北省邯郸市食品药品检验中心,河北 邯郸 056001； 2.河北省大名县人民医院,河北 邯郸 056900）

肾石消胶囊是邯郸市中医院的自制制剂,临床应用疗效显著,由延胡索、石苇、金钱草等九味中药组方,具化石排石、利湿止痛的功效,主治泌尿系结石及泌尿系感染。此制剂现有质量标准简单,尚无定量内容。为此,参考文献[1-3],建立了测定其主要成分延胡索乙素含量的高效液相色谱法。该方法简便、准确、灵敏度高,为控制该制剂的质量奠定了基础。

1 仪器与试药

岛津 LC-2010AHT型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；UV-VIS,Lcsolution型色谱工作站；AUW 120D型电子天平（日本岛津公司,十万分之一）。延胡索乙素对照品（中国食品药品检定研究院,批号为 10726-201213,含量为 99.8%）；肾石消胶囊（邯郸市中医院,批号分别为 120101,120201,120301,120302,120303,120401,规格为每粒 0.5 g）；甲醇为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Shimadzu VP-ODS柱（250mm ×4.6mm,5μm,日本岛津公司）；流动相:0.1%磷酸（用三乙胺调节pH至6.0）-甲醇（40∶60）；流速:1 mL/min；检测波长:280 nm；进样量:20 μL；理论板数按延胡索乙素峰计算不低于5000。

2.2 溶液制备

精密称取延胡索乙素对照品0.01044 g,置100 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为对照品贮备液；吸取对照品贮备液5 mL,置 50 mL容量瓶中,制成每1 mL含10.44μg的溶液,作为对照品溶液。精密称取本品1.5 g,置具塞锥形瓶中,精密加入浓氨-甲醇（1∶20）混合溶液 50 mL,称定质量,冷浸 1 h后加热回流1 h,放冷,再称定质量,用浓氨-甲醇（1∶20）混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过；精密量取续滤液25 mL,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5mL容量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液。按处方比例依据该制剂制备工艺制备不含延胡索的阴性样品,依据供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各20μL,按拟订色谱条件进样测定。结果阴性对照品溶液色谱在与延胡索乙素对照品主峰的相同保留时间处无色谱峰,见图 1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取对照品贮备液 2,4,5,8,10 mL,分别置50mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,分别取20μL进样,测定峰面积,以对照品进样量（X,μg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归,得回归方程 Y=1.292×106X＋6.932×103,r=0.9997（n=5）。结果表明,延胡索乙素进样量在 0.0833～0.4168μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液（质量浓度为10.44 μg/mL）20μL,重复进样 5次,计算延胡索乙素色谱峰面积。结果的 RSD为0.42%（n=5）,表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批（批号为120101）样品5份,依法制备供试品溶液,按拟订色谱条件进样测定。结果延胡索乙素平均含量为 69μg/g,RSD 为 0.33%（n=5）,表明方法重复性良好。

稳定性试验:取同一（批号为120101）供试品溶液,分别于0,2,4,8,12,24 h 时进样测定。结果的 RSD 为 0.65% （n =6）,表明供试品溶液在室温下放置24 h稳定。

回收率试验:取已知含量的同一批（批号为120101,含量为69μg/g）样品共 6份,每份约 0.75 g,精密称定。精密吸取对照品贮备液5 mL,置500mL容量瓶中,加浓氨-甲醇（1∶20）混合溶液溶解,并稀释至刻度,配制成质量浓度为 1.044μg/mL的溶液。每份样品精密加入50 mL此溶液,依法制备供试品溶液,进样测定。结果见表1。

表1 延胡索乙素加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

按2.2项下方法制备供试品溶液,按拟订色谱条件进样测定4 次。结果 6 批样品中延胡索乙素含量分别为 69,54,71,68,72,52μg/g,其 RSD 分别为 0.24%,0.18%,0.11%,0.32%,0.29%,0.40%。

3 讨论

延胡索乙素为延胡索的主要成分,参照2010年版《中国药典（一部）》延胡索项下的含量测定方法,采用高效液相色谱法对该制剂中延胡索乙素的含量进行测定。

用紫外分光光度法对对照品溶液在200～400 nm波长范围扫描,延胡索乙素在281 nm波长处有最大吸收峰。与文献记载其最大吸收峰在280 nm波长处相近[4],为使检测波长在使用时达到统一,而又不影响测定结果,且又便于记忆,故将测定波长定为280nm波长。

2010年版《中国药典（一部）》延胡索含量测定项下规定,按干燥品计算,含延胡索乙素不得少于0.050%。本研究结果表明,该制剂中延胡索乙素的含量符合2010年版《中国药典(一部)》的规定,且与原药材含量基本一致。因此,确定的肾石消胶囊中延胡索乙素的含量测定方法结果准确、重复性好,可用于肾石消胶囊中延胡索乙素的质量控制。

参考文献:

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京:中国医药科技出版社,2010:130.

[2]朱庆才,吴 迪,李 艳,等.高效液相色谱法测定复方元胡止痛胶囊中延胡索乙素的含量[J].时珍国医国药 ,2000,1（11）:1727.

[3]黄立明,黄东萍,蒋贵发,等.RP-HPLC法测定复方金蒲片中延胡索乙素的含量[J].中国中医药信息杂志,2010,17（8）:45.

[4]赵建英,包玮鸳.高效液相色谱法测定妇乐颗粒中延胡索乙素的含量[J].中国药业,2005,14（8）:420.