高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定人参健脾丸中黄芪甲苷含量

陈 健,胡 幸,吕紫璇,张传平

（重庆市涪陵食品药品检验所,重庆 408000）

人参健脾丸主要由人参、白术、茯苓、山药、陈皮、木香、炙黄芪等11味中药组方,具有健脾益气、和胃止泻的功效。方中黄芪是补气的主药,而黄芪甲苷是其主要成分,原标准无黄芪甲苷的含量测定,不能有效控制产品质量。笔者采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ESLD）法对人参健脾丸中黄芪甲苷的含量进行了测定[1-3],方法简单、准确、重复性好,可用于产品的质量控制。

1 仪器与试药

岛津LC-20A型高效液相色谱仪；岛津ELSD-LTⅡ型蒸发光散射检测器；Sartorius-ME235S型电子天平。黄芪甲苷对照品（中国食品药品检定研究院,批号为 110781-200613,含量100.00%）；人参健脾丸（云南腾冲制药股份有限公司,批号分别为 20130403,20130503,20130401）；甲醇为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:AgilentEclipse XDBC18柱（250mm ×4.6mm,5μm）；流动相:甲醇-水（75∶25）；流速:1.0mL/min；柱温:30 ℃；ELSD 检测条件:漂移管温度40℃,增益4；进样量:20μL。

2.2 溶液制备

称取黄芪甲苷对照品14.65 mg,精密称定,置50 mL容量瓶中,加甲醇适量,振摇使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。取本品研细的内容物约10 g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇100 mL,冷浸过夜,加热回流4 h,提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水10 mL,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次30 mL,合并提取液,用氨试液充分洗涤2次,每次30 mL,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液。按人参健脾丸制备工艺,制备缺黄芪的阴性样品,照供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:取2.2项下3种溶液,按拟订色谱条件进样测定。结果供试品溶液色谱中,黄芪甲苷与其他成分色谱峰能完全分离,阴性样品对测定无干扰,见图1。

线性关系考察:精密吸取对照品溶液 5,10,15,20,25 μL,按拟订色谱条件分别注入液相色谱仪,以黄芪甲苷对照品进样量的自然对数值为横坐标（X）、黄芪甲苷峰面积的自然对数值为纵坐标（Y）进行线性回归,得回归方程 Y=0.4430X＋2.5944,r=0.9995（n=5）。结果表明,黄芪甲苷进样量在 1.465～7.325 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液,分别取10,20μL,按拟订色谱条件重复进样6次。结果的 RSD为0.48%（n=6）,表明仪器精密度良好。

重复性试验:精密取同一批（批号为20130403）样品,依法制备6份供试品溶液并进样测定。结果黄芪甲苷峰面积的 RSD为0.22% （n=6）,表明方法重复性良好。

图1 高效液相色谱图

稳定性试验:取同一供试品溶液,分别于 0,2,4,8,12,24 h时进样10μL,依法测定。结果黄芪甲苷峰面积的 RSD为0.29%（n=6）,表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验:取已知含量的样品（批号为20130403）6份,精密加入黄芪甲苷对照品适量,按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定,计算回收率。结果见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取样品3批,按拟订色谱条件操作,测定含量。结果批号为20130401,20130403,20130503的3批样品中黄芪甲苷的含量分别为 0.0428,0.0434,0.0432mg/g。

3 讨论

蒸发光散射检测器适用于检测黄芪甲苷类等无紫外吸收或微弱紫外末端吸收的物质,具有较高的检测灵敏度,且稳定性和重复性良好。由于本品成分复杂,经过水饱和正丁醇提取分离,避免了杂质污染色谱柱和检测器,峰形及结果均理想。方法学考察结果表明,该方法简单、准确、重复性好,可用于人参腱脾丸的质量控制。

参考文献:

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京:中国医药科技出版社,2010:212.

[2]袁云刚,刘 锐,刘 成,等.HPLC-ELSD法测定参芪升阳补血胶囊中黄芪甲苷的含量[J].西北药学杂志,2012,26（6）:417-418.

[3]杨晓腾,李井涛,郭美琳.HPLC-ELSD法测定止痛化瘀胶囊中黄芪甲苷的含量[J].中国药事,2012,26（7）:751-752.