补肾益气中药抗皮肤光老化作用研究进展

李伟　陈丽娟　王加志

皮肤光老化属于光感性皮肤病范畴，本病的发生除与光线、光感物有关外，个体敏感性在发病过程中占重要地位。其临床主要表现为皮肤纹理改变（干燥粗糙、皱纹加深）和皮肤色素异常（点状色素沉着或色素减退斑点），严重者可诱发癌变。发病机制为表皮细胞萎缩，黑素细胞数量减少或分布局限，胶原纤维、弹力纤维组织结构缺失，无定形弹力蛋白样物质沉积，毛细血管扩张等病理组织学改变等特点[1]。现代研究认为皮肤光老化的发生机理，主要集中在基质异常降解、自由基、免疫抑制三方面[2-4]，其中自由基损伤一直是研究热点，而随着研究的深入，研究重点也由防护UV损伤到抗胶原降解和调节细胞信号通路上。

早在《素问·上古天真论》就有：“天寿过度，气脉常通，肾气有余也”的认识，明确提出肾气盛衰是机体生长壮老已之根本，也是判断生长发育状况及衰老程度的客观标志。《普济方·诸虚门·补虚驻颜色》有云：“夫血气者人之神，又心者生之本，神之变，其华在面，其充在血脉，服药以驻颜色，当以益气血为先”，指明了中医药抗衰美容的治疗方向。近年来，我国学者运用补益中药在防治光老化方面进行了各种尝试，肯定了中医药对皮肤光老化的防治作用，现分类综述如下。

1 补肾药

1.1杜仲：目前对杜仲的研究主要是其乙醇提取物对抗紫外线致皮肤成纤维细胞（ESF-1）皮肤角质形成细胞（HaCaT细胞）光老化的作用上，以UVA、UVB梯度剂量照射细胞建立光老化模型，用不同浓度的杜仲乙醇提取物干预，测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量，采用ELISA法检测细胞培养液中Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）的含量。发现杜仲50%乙醇提取物能明显提高细胞活性，提高SOD活性，降低细胞中的MDA含量及LDH活力，并且能抑制UVA引起的MMP-1及MMP-3的异常分泌，降低ColⅠ的降解，在体实验与细胞实验中均证实杜仲通过提高细胞抗氧自由基的能力，对UVA和UVB致ESF-1 细胞及HaCaT细胞的光老化具有良好的防护作用[5-7]。

1.2冬虫夏草：通过在体和细胞实验两种方式，研究其主要活性成分虫草多糖（CordycepsPolysac charides，CP）对光老化的保护作用，以8-甲氧补骨脂素联合UVA（8-MOP/UVA）诱导皮肤成纤维细胞和小鼠皮肤致光老化，用HE染色、MTT、羟脯氨酸、丙二醛（MDA）含量检测及SOD活力分析等方法观察虫草多糖对成纤维细胞光老化过程中的形态、活力、胶原合成及抗氧化能力的影响。结果光老化组细胞发生形态改变，增殖能力明显下降，羟脯氨酸含量下降，MDA含量升高，SOD活力下降，虫草保护组明显改善[8-9]。

2 补气药

2.1黄芪：王诗晗[10]以无毛小鼠UV照射建立光老化模型，以黄芪醇提物不同浓度（4g/Kg，8g /Kg，16g /Kg）混悬液灌胃给药进行干预，通过观察不同组别的小鼠皮肤光老化模型皮肤组织中HYP含量、MDA含量及SOD活性的变化，来评价皮肤受损程度和药物的防治作用。发现各浓度的黄芪醇提物均可提高无毛小鼠皮肤组织SOD活性和增加HYP含量，减少MDA生成，呈剂量依赖。李燃等[11]探讨黄芪甲苷水包油乳膏外用对皮肤光老化的保护作用机制。以BALB/c小鼠为实验对象，分为模型组、模型+基质组、模型+黄芪甲苷组和正常对照组。RT-PCR测定转化生长因子受体II（TGF-βRII）、Smad 7的mRNA表达水平，免疫组化观察TGF-βRII、Smad 7在小鼠皮肤组织中的蛋白表达情况。结果黄芪甲苷可以通过上调TGF-βRⅡ表达和下调Smad 7表达而改变TGF-B通路的信号传导参与抗光老化。刘昕等[12]观察黄芪甲苷对长波紫外线（UVA）辐射导致的人成纤维细胞衰老的抑制以及对基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和金属蛋白酶组织抑制因子l（TIMP-1）等老化相关基因表达的影响。分离培养人原代成纤维细胞，分为空白对照组、黄芪甲苷组、UVA 组和UVA+黄芪甲苷组，以10J/cm2 UVA进行照射，并加入20g/ml黄芪甲苷干预处理。采用免疫组织化学染色法检测衰老相关β半乳糖苷酶表达，以酶联免疫吸附法检测上清液中转化生长因子-βl（TGF-β1）的含量，实时聚合酶链反应法检测MMP-l和TIMP-l的mRNA表达水平变化。结果： UVA组β半乳糖苷酶阳性细胞数则显著升高，其它各组β半乳糖苷酶阳性细胞比率明显降低；UVA照射则明显减少成纤维细胞TGF-β1分泌量，UVA 照射前加入黄芪甲苷可增加TGF-β1分泌量；UVA 能够诱导MMP-l和TIMP-1的mRNA表达水平升高，而黄芪甲苷可在一定程度上对两种基因表达起抑制作用。黄芪甲苷可有效延缓UVA所致的人成纤维细胞光老化进程，其机制可能与促进TGF分泌和抑制胶原降解有关。

2.2红景天：沈干等[13] 研究红景天苷对UVB辐射诱发的人角质形成细胞光老化的防护机制，发现红景天苷能促进角质形成细胞增殖，提高SOD、GSH、CAT等抗氧化酶的活性，减少脂质过氧化产物MDA的产生。结果证实红景天对UVB辐射所造成的皮肤光老化的防护作用机理，可能是通过促进角质细胞的增殖、提高抗氧化酶的活性以减少自由基损害来实现的。

2.3人参：邓茂等[14]通过紫外线诱导经8-甲氧补骨脂素处理过的体外培养真皮成纤维细胞建立光老化模型，用人参皂苷Rb与芳维A酸乙酯分别对其进行干预，免疫组织化学法检测细胞内基质金属蛋白酶（MMP-1和MMP-3）表达的改变。结果人参皂甙Rb与阳性对照芳维A酸乙酯均能明显抑制成纤维细胞的MMP-1和MMP-3表达。人参皂甙Rb对光老化成纤维细胞有一定的防治作用，其强度与芳维A酸乙酯大致相当。程基焱等[15]为阐明人参皂苷Rb1对光老化的防治机理，探索中药对光老化的防治手段，建立体外培养成纤维细胞光老化模型，芳维A酸乙酯为阳性对照药，免疫组织化学技术检测基质金属蛋白酶的表达，研究人参皂苷Rb1对光老化皮肤中成纤维细胞胞质内基质金属蛋白酶表达的影响。结果显示，人参皂苷Rb1与芳维甲酸乙酯对培养成纤维细胞胞质基质金属蛋白酶的表达有显著抑制作用；中药组和阳性对照组与其表达的抑制作用相比较，差异无显著性。说明人参皂苷对光老化的防护作用机理可能均通过调节MMPs活性实现的。

2.4绞股蓝：王丽红等[16]用绞股蓝提取液灌胃给药，研究药物对光老化模型小鼠皮肤组织的影响，发现绞股蓝组的小鼠皮肤组织变化与正常小鼠最为接近，不同浓度的绞股蓝均能明显提高SOD活性并使MDA含量明显降低，中高剂量组还使HYP 含量明显提高，绞股蓝对紫外线引起的皮肤光老化的防护机理可能是提高SOD活性，清除自由基和增加HYP含量。陶冶等[17]探讨绞股蓝总皂苷含药血清对光老化人永生化皮肤角质形成细胞株（HaCaT）细胞分泌肿瘤坏死因α（TNF-α）及调节核因子-κβ（NF-κβ）表达的干预作用。采用中波紫外线（UVB）照射建立光老化HaCaT细胞模型，并给予含不同浓度绞股蓝总皂苷的大鼠血清进行干预，采用ELISA、Western blot方法检测各组细胞分泌TNF-α含量及NF-κβ蛋白的表达水平。结果与正常对照组比较，紫外线（UV）模型组细胞培养上清液TNF-α含量及细胞NF-κβ表达水平显著上调；低、中、高剂量含药血清组中TNF-α含量及NF-κβ蛋白表达水平显著下调。绞股蓝总皂苷皮肤光老化的保护作用与NF-κβ信号通路可能相关。

3 小结与展望

随着环境的破坏、光污染的日益严重，皮肤光感疾病发病越来越高，人们对皮肤光老化的防治日益迫切。中药在中医理论指导下，注重辨证施治的个体化方案，更使得其在皮肤光老化的防治中占有独特的优势。大部分补肾益气药能够提高皮肤抗氧化酶活性，抑制ROS诱导的脂质过氧化反应，清除和减少自由基代谢产物的堆积，提高或维持皮肤胶原蛋白含量、调节基质金属蛋白酶及TGF-β通路的信号转导等，从分子机制上肯定了中药对抗皮肤光老化的作用，使得中药防治皮肤光老化有效可行。但从目前的研究可以看出，人们对中药防治光老化的机制研究大多数集中在抗自由基和调节基质金属蛋白酶活性方面，对于皮肤光老化免疫机制和相关信号转导深入研究较少。在中药抗皮肤光老化药效物质基础研究中，以提取物研究居多，单体成分较少，这也显示了中医药在光老化的预防及治疗方面具有巨大潜力可供发掘。怎样合理运用现代医药学的研究手段，结合中医理论，进一步探讨中医药防治光老化的作用机理、效量关系，使中医药为皮肤光老化防治方面做出更大贡献，是我们今后努力的方向。

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[17]陶冶，张小卿，马贤德，等.绞股蓝总皂苷含药血清对光老化HaCaT细胞NF-κβ通路的影响[J].安徽医科大学学报，2012，47（10）：1178-1181.

[收稿日期]2014-05-07 [修回日期]2014-06-10

编辑/李阳利