乌鲁木齐地区牛口蹄疫O型Asia—Ⅰ型双价灭活疫苗免疫效果的检测与分析

排合尔丁·穆太力甫 李建玲 马正海

摘要 [目的]研究乌鲁木齐地区牛口蹄疫O型AsiaΙ型双价灭活疫苗的免疫效果。[方法] 应用液相阻断ELISA法检测492份口蹄疫O型AsiaΙ型双价灭活疫苗的免疫效果。[结果] 免疫牛群对牛口蹄疫O型的平均免疫合格率为97.6%，对AsiaΙ型的平均免疫合格率为97.7%。[结论] 牛口蹄疫O型AsiaΙ型双价灭活疫苗可以使免疫牛产生有效的免疫保护。

关键词 口蹄疫病毒；O型；AsiaΙ型；双价灭活疫苗；免疫保护

中图分类号 S857.65 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）27-09400-02

Immune Effect Detection of Bivalent Inactivated Vaccine of Otype AsiaⅠof Cattle Footandmouth Disease in Urumqi Area

Paiheerding Mutailifu¹，LI Jianling2*， MA Zhenghai¹

（1.College of Life Science and Technology， Xinjiang University， Urumqi， Xinjiang 830046； 2.Urumqi Animal Disease Control and Diagnostic Center， Urumqi， Xinjiang 830063）

Abstract [Objective] The research aimed to study the immune effect of bivalent inactivated vaccine of Otype Asia Ι of cattle footandmouth disease in Urumqi region. [Method] The immune effect of 492 bivalent inactivated vaccines of Otype Asia Ι of footandmouth disease was detected by using liquidphase blocking ELISA. [Result] The average immune qualified rate of the immunized cattle to Otype footandmouth disease was 97.6%， and the average immune qualified rate to Asia Ι type was 97.7%. [Conclusion] The effective immune protection of immunized cattle could be obtained by using bivalent inactivated vaccine of Otype AsiaΙ of cattle footandmouth disease.

Key words FMDV；Otype；AsiaI type；Bivalent inactivated vaccine； Immune protection

口蹄疫（Foot and mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的偶蹄类动物感染的一种急性、接触性传染病，主要危害猪、牛、羊等70种家畜和野生动物，人类也易感，对畜牧业造成巨大的危害^[1]。自然感染口蹄疫的潜伏期一般较短，2～8 d，有时可能为1～14 d，这取决于病毒感染量、病毒毒株和传染方式等。牛口蹄疫的早期症状很可能包括牛的产奶量减少，并伴随有厌食、精神沮丧和发热。此后1 d左右口腔及周围、蹄部和乳房（尤其是乳头）可见水泡^[2-3]。FMDV属于小RNA病毒科，病毒粒子外形呈二十面体，由4种结构蛋白（VP1、VP2、VP3、VP4）各60个拷贝组成，其共有7个血清型（O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3、AsiaI型）。据国际口蹄疫参考实验室对疫情通报统计，O型在世界范围流行最广，其次为AsiaI和A型，C型和南非三型非常罕见，通常只在特定区域流行。目前，我国正面临以O型和AsiaI型为主要的口蹄疫病的大流行^[4-6]。

快速诊断FMDV感染的家畜并对非疫区的动物实施疫苗接种是控制口蹄疫暴发的主要策略。FMDV 7个血清型之间无交叉免疫保护，即使同一血清型不同毒株的抗原性也有较大变化，对FMDV主要抗原位点、细胞受体及其引起侵入机体的免疫学反应等的深入研究对研制安全、高效的口蹄疫疫苗至关重要。目前，包括亚单位疫苗、载体疫苗、基因缺失疫苗、合成肽疫苗、核酸疫苗、植物反应器可饲疫苗和多表位疫苗等在内的新型口蹄疫疫苗均见报道^[7-9]，这些新型疫苗的研究取得了一些成果，但在免疫效果和生产成本等方面尚无法与常规疫苗竞争，加上FMDV弱毒活疫苗有返强并使免疫动物发病的危险，已被世界上大多数国家所摒弃，因此目前口蹄疫预防和控制主要依靠口蹄疫灭活疫苗。

口蹄疫灭活疫苗是利用常规技术制造的以灭活病毒为抗原的一类疫苗，灭活疫苗因其安全有效而被广泛应用于易感家畜免疫接种。疫苗的免疫效果直接关系到口蹄疫的防控效果。为了掌握乌鲁木齐市牲畜牛在接种口蹄疫O型AsiaI型双价灭活疫苗后产生的免疫效果，笔者用口蹄疫液相阻断ELISA 抗体检测试剂盒对乌鲁木齐市不同地区该疫苗免疫牛血清中粒子抗原抗体水平及免疫保护力进行研究，以期为口蹄疫的预防与控制提供参考。

1 材料与方法

1.1 疫苗效果检测的样品来源及数量

样品来自于新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市7个区（天山区、米东区、头区、水区、乌县、大阪城、新市区）向乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心送检免疫牛血清492份。采血牛是按照国家强制性免疫接种要求（牲畜口蹄疫疫苗的免疫注射密度应达到99%以上）给犊牛（奶牛）90日龄进行初免，间隔1个月进行1次强化免疫，以后每隔4个月免疫1次的免疫程序免疫的，牛、羊O型AsiaI型双价口蹄疫灭活疫苗均为金宇保灵生物药品有限公司产品。

1.2 检测诊断试剂

口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测试剂盒购于中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.3 检测方法

应用口蹄疫O型、亚Ⅰ型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒对免疫牛血进行O型、AsaiI型口蹄疫免疫抗体水平检测，检测方法参照试剂盒说明书。

1.4 结果判定

每块板设置4孔病毒抗原对照，直接用PBST稀释至工作浓度，与血清/病毒抗原复合物同步加入酶标板孔，50 μl/孔。以病毒抗原对照平均OD492 nm值的50%为临界值，被检血清OD492 nm值大于临界值的孔为阴性孔，小于等于临界值的孔为阳性孔。某份血清系列稀释中，阳性孔的最高稀释倍数为被检血清是抗体效价。定性检测中，2个重复孔只要有1孔为阳性孔，则抗体滴度判定为1∶64，2孔均为阳性孔，则判定为抗体滴度>1∶64；当血清抗体滴度≥1∶64时，判定抗口蹄疫抗体效价合格；存栏家畜免疫抗体合格率达70%时，判定为疫苗免疫合格。

2 结果与分析

采用ELISA法检测了492份口蹄疫O型AsiaΙ型双价灭活疫苗免疫牛血清的免疫抗体水平、O型和AsiaΙ型口蹄疫抗体检测的合格率。由表1可知，492份免疫牛血样中，口蹄疫O型测定值抗体滴度达到1∶64以上的共有480份，平均免疫合格率为97.6%；口蹄疫AsiaΙ型共有482份，平均合格率为97.7%，完全符合国家疫苗免疫要求（存栏家畜免疫抗体合格率达70%时判定合格）。

3 讨论

梁宏志等^[10]报道哈尔滨地区牛、羊进行O型和Asia Ι 型双价口蹄疫灭活疫苗合格率检测免疫合格率均为72.3%。郑庆维等^[11]报道云南省龙陵县牛O型AsiaI型双价灭活疫苗免疫合格率分别为74%和76%。该试验检测出的牛口蹄疫O型和AsiaΙ型双价灭活疫苗的免疫合格率较高，说明口蹄疫O型AsiaΙ型双价灭活疫苗可以使免疫牛产生有效的免疫保护。

参考文献

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[11] 郑庆维，匡继才，蒋照彩，等.牛口蹄疫O型AsiaI型双价（浓缩）灭活疫苗免疫效果观察[J].中国兽医杂志，2009，45（8）：51.