羊血清防脱片在BENCHMARK?XT自动免疫组化仪上的应用

沈洪武 沈静华

【摘要】在BENCHMARK?XT自动免疫组化仪上，切片在脱蜡后的检测过程中，覆盖着轻脂油，用于防止试剂蒸发和确保试剂整片覆盖[1]。使用国产防脱片，轻脂油会粘连在切片上，不能确保试剂整片覆盖，而产生假阴性结果。罗氏诊断产品有限公司推荐切片烤片后浸泡10%雀巢牛奶水溶液10min，再上机检测，仍有2.3%的假阴性结果。作者使用正常非免疫山羊血清涂抹整片防脱片，烤片，裱贴切片，再烤片，上机检测，没有假阴性结果。

【关键词】羊血清；防脱片；BENCHMARK?XT

【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2014）10-0014-01

免疫组化使用全自动免疫组化仪检测与使用手工检测比较，具有染色结果稳定，显色定位准确，背景清楚，重复性好，解放劳动力等优势。罗氏诊断产品有限公司的BENCHMARK?XT自动免疫组化仪具有上述特点的优势。但是，BENCHMARK?XT自动免疫组化仪对粘附载玻片的要求特别高，目前国产防脱片达不到它的要求。在BENCHMARK?XT自动免疫组化仪上，切片在脱蜡后的检测过程中，覆盖着轻脂油，用于防止试剂蒸发和确保试剂整片覆盖[1]。使用国产防脱片，轻脂油会粘连在切片上，不能确保试剂整片覆盖，而产生假阴性结果。罗氏诊断产品有限公司推荐切片烤片后浸泡10%雀巢牛奶水溶液10min，再上机检测，仍有2.3%的假阴性结果。作者使用正常非免疫山羊血清涂抹整片防脱片，烤片，裱贴切片，再烤片，上机检测，没有假阴性结果。

1 材料与方法

1.1 材料

BENCHMARK?XT自动免疫组化仪（罗氏诊断产品有限公司），20种第一抗体（ER，PR，C-erbB-2，EMA，CEA，CKp，CKh，CK7，Vimentin，S100，SMA，Desmin，CD20，CD79a，CD3，CD43，CD34，Ki67，p53，LCA，福州迈新公司），第二抗体及其它试剂（罗氏诊断产品有限公司），正电荷防脱片（上海太阳公司，T-005-2），正常非免疫山羊血清（福州迈新公司，SP KIT-B3），10%雀巢全脂奶粉水溶液，20种第一抗体的阳性质控蜡块（本实验室）。

1.2 对照组

待检测蜡块和对应阳性质控蜡块切片，裱贴于同一张正电荷防脱片上，65℃烤片2h，室温浸泡10%雀巢全脂奶粉水溶液10min，擦干切片背面，上机检测。

1.3 实验组 羊血清防脱片的制作：正常非免疫山羊血清涂抹整片正电荷防脱片，65℃烤片2h。待检测蜡块和对应阳性质控蜡块切片，裱贴于同一张羊血清张防脱片上，65℃烤片2h，上机检测。

2 结果

对照组检测826片，有19个假阴性片，假阴性率为2.3%。实验组检测1488片，没有假阴性片，假阴性率为0。对照组和实验组阳性定位准确，背景清晰，没有脱片。

3 讨论

3.1 在BENCHMARK?XT自动免疫组化仪上，切片在脱蜡后的检测过程中，覆盖着轻脂油，用于防止试剂蒸发和确保试剂整片覆盖。其前提是切片在脱蜡后必须形成整片的水膜，使轻脂油浮于水膜上，不与切片粘连。因此，该仪器对防脱片的质量要求较高。

3.2 事实证明，使用国产防脱片，切片在脱蜡后，组织周围的烤蜡区常常会形成疏水区，引起轻脂油粘连在疏水区上，不能形成整片的水膜，不能确保试剂整片覆盖，而产生假阴性结果。罗氏诊断产品有限公司推荐切片烤片后浸泡10%雀巢牛奶水溶液10min，再上机检测，仍有2.3%的假阴性结果。其原因是牛奶不能浸及烤蜡覆盖的玻璃，烤蜡区同样会形成疏水区，同样不能形成整片的水膜，不能确保试剂整片覆盖，而产生假阴性结果。

3.3 正常非免疫山羊血清含有羊血清蛋白，与牛奶蛋白的作用相同，能使防脱片变成亲水性，形成水膜。因为防脱片整片涂抹羊血清，所以能形成整片的水膜，确保试剂整片覆盖，而不会产生假阴性结果。同时，正常非免疫山羊血清具有封閉非特异性吸附的作用，能消除因非特异性吸附而引起的非特异性染色，因而，防脱片整片涂抹羊血清不会产生额外的背景。另外，实验证明，涂抹羊血清不影响防脱片的防脱功能。因此，羊血清防脱片适合在BENCHMARK?XT自动免疫组化仪上应用。

参考文献：

[1]BENCHMARK?XT使用手册。