复方犬肠宁胶囊的质量标准研究

王妲妲 陈晓兰 王莹 崔潇婷

摘要 [目的]研究复方犬肠宁胶囊的质量标准。[方法]采用薄层色谱（TLC）法对复方犬肠宁胶囊中的黄连、黄柏、白头翁、黄芪进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，研究复方犬肠宁胶囊的质量标准。[结果]薄层色谱鉴别表明，样品分离度好，斑点清晰，且阴性对照无干扰；盐酸小檗碱进样量在10.92～163.74 μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为Y=39 611X-2387.9（R2=0.999 8），平均加样回收率为97.60%，相对标准偏差RSD=1.64%（n=6）。[结论]该标准操作简便，专属性、稳定性、重复性良好，可用于犬肠宁胶囊的质量检测方法。

关键词 复方犬肠宁胶囊；薄层色谱法；高效液相色谱法；盐酸小檗碱；质量标准

中图分类号 S853.7 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）16-05039-03

复方犬肠宁胶囊由黄连、黄柏、白头翁、黄芪等十味中药通过制颗粒填充法制备而成的胶囊制剂。处方中白头翁性苦寒，归脾胃大肠经，具有清热解毒、凉血止痢的作用，黄连和黄柏性苦寒，分别归脾胃大肠和肾膀胱经，具有清热燥湿、泻火解毒的功效。通过临床调查研究结果显示，复方大肠宁胶囊主治犬湿热泻痢型腹泻或病毒感染引起的胃肠炎等。为有效控制犬肠宁胶囊的质量，笔者对其质量标准进行研究，以建立有效的质量控制方法，为复方白头翁胶囊的安全用药奠定理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器 Waters2695/2996/Empower高效液相色谱系统、METTLER TOLEDO XS105电子天平；白头翁皂苷B4（批号111766-200601）、黄芪甲苷对照品（批号110781 -200512）、盐酸小檗碱对照品（批号110713-200609、含量98.1%）和黄连（批号111430）、黄柏（批号111520）对照药材，均由中国药品生物制品检定所提供；复方白头翁胶囊样品（江苏农牧科技职业学院制药厂，批号091102、091110、091121）、乙腈（HPLC）、硅胶G薄层板（国药集团化学试剂有限公司）；水，为超纯水；其余试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 薄层色谱（TLC）鉴别。

1.2.1.1 白头翁的薄层鉴别。取本品内容物2 g，加甲醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取白头翁皂苷B4对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验[1]，吸取上述2种溶液各3 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（65∶ 35∶ 10）下层液为展开剂、展开、取出、晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃烘至斑点清晰。

1.2.1.2 黄连、黄柏的薄层鉴别。取本品内容物0.5 g，加甲醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验[1]，吸取上述2种溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7∶ 1∶ 2）为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。

1.2.1.3 黄芪的薄层鉴别。取本品内容物10 g，加乙酸乙酯30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液弃去，滤渣挥干，加甲醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，加水30 ml使溶解，滤过，滤液用水饱和正丁醇提取2次，每次20 ml，合并正丁醇提取液，先用等体积的氨试液振摇洗涤，再用等体积的水振摇洗涤，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為对照品溶液。照薄层色谱法试验[1]，吸取供试品溶液5 μl、对照品溶液2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（65∶ 35∶ 10）下层溶液为展开剂，展开、取出、晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃烘约10 min，日光下检视。

1.2.2 盐酸小檗碱的含量检测[1-4]。

1.2.2.1 色谱条件与系统适应性试验。色谱柱为AQ.C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液（25∶ 75），检测波长265 nm，流速1.0 ml/min，柱温30 ℃，进样量均为10 μl。在此色谱条件下，供试品溶液、对照品溶液、阴性样品溶液各10 μl进样测定。

1.2.2.2 供试品溶液及阴性样品溶液的制备。取本品粉末约0.4 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇约20 ml，超声处理30 min，冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按处方，同法制成不含黄连、黄柏的阴性样品溶液。

1.2.2.3 线性关系考察。精密称取在105 ℃干燥5 h的盐酸小檗碱对照品5.26 mg置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取1.0、2.5、5.0、10.0、15.0 ml置25 ml量瓶中，各加甲醇至刻度，摇匀，制得每1 ml含盐酸小檗碱10.92、21.83、54.58、109.16、163.74 μg的溶液，在“1.2.2.1”色谱条件下，进样10 μl测定，以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线，进行回归分析。

1.2.2.4 精密度试验。取上述同一对照品溶液10 μl，连续进样5次，按照“1.2.2.1”色谱条件测定峰面积，考察其日内精密度；取上述同一对照品溶液10 μl连续3 d，测定峰面积，考察其日间精密度。

1.2.2.5 加样回收率试验。分别取已知含量的样品5份，各精密加入一定量的盐酸小檗碱对照品，按“1.2.2.2”供试品溶液制备方法制备并测定，计算回收率。

1.2.3 样品测定。精密称取复方大肠宁胶囊不同批号的样品各6份，按供试品溶液制备方法制备，在“1.2.2.1” 色谱条件下，进行含量测定。

2 结果与分析

2.1 薄层色谱法鉴定结果

2.1.1 白头翁的鉴别。由图1可知，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照溶液则无此相应斑点。

2.1.2 黄连、黄柏的鉴别。由图2可知，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照溶液则无此相应斑点。

2.1.3 黄芪的鉴别。由图3可知，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照溶液则无此相应斑点。

2.2 高效液相色谱法测定结果

2.2.1 盐酸小檗碱的专属性。从供试品色谱中（图4）可以看出，盐酸小檗碱色谱峰可达到基线分离与相邻峰分离度>2，理论板数应不低于9 598，且阴性样品溶液不干扰测定。

2.2.2 盐酸小檗碱的线性范围。经线性回归分析（图5），盐酸小檗碱的回归方程为Y=39 611X-2 387.9（R2=0.999 8），说明盐酸小檗碱在10.92～163.74 μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.3 精密度试验。精密度试验结果（表1）显示，同一对照品溶液，连续进样5次，连续测定3 d，测定峰面积的相对标准偏差（RSD）分别为0.86%、0.74%、0.84%，表明样品的精密度、稳定性、重现性良好。

2.2.4 回收率试验。在已知含量的5份样品中各精密加入一定量的盐酸小檗碱对照品，按“1.2.2.2”供试品溶液制备方法制备，通过测定的峰面积，计算出处理后样品含量，并计算回收率，结果发现5份样品的平均回收率为97.60%，相对标准偏差（RSD）为1.64%（表2），该结果符合要求。

2.3 样品测定 通过抽取复方犬肠宁胶囊3个批号（091102、091110、091121）的样品各6份进行含量测定，结果（表3）发现，3个批号样品盐酸小檗碱含量分别为3.94、4.26、3.81，相对标准偏差（RSD）分别为1.12%、1.35%、0.83%，根据以上样品的测定结果，结合不同产地黄连、黄柏盐酸小檗碱含量的差异及临床研究结果的分析，暂定本品每粒含黄连、黄柏以盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）计，不得少于1.2 mg。

3 讨论

此处方中白头翁、黄连和黄柏为君药，发挥清热解毒、凉血止痢的功效，经前期研究白头翁的有效成分白头翁皂苷B4峰面积太小，达不到定量限的要求，不适于作为本品有效含量的检测指标，因此选择以白头翁皂苷的薄层作为定性指标，黄连和黄柏的有效成分盐酸小檗碱作为含量指标，能够比较客观地评价药物的可控性、有效性和安全性。

盐酸小檗碱的含量检测，笔者曾考察提取方法（超声、回流、浸渍）、提取时间（30、40、50 min），以回流、声提取方法提取的盐酸小檗碱含量较高，但两者含量相差不大，从操作简便角度考虑，确定提取方法为超声提取，提取时间为30 min；另比较提取溶剂盐酸-甲醇（1∶ 100）和甲醇，两者含量相差不大，考虑到卤素离子对色谱柱的伤害，确定提取溶剂为甲醇；曾采用乙腈-0.033 mol/L磷酸二氢钾溶液（35∶ 65）为流动相，但盐酸小檗碱峰与相邻杂质峰未达到基线分离，并有拖尾现象。使用文中流动相，结果达到基线分离，峰形较好。经过精密度考察、稳定性考察等试验，该方法的准确度和重现性良好，列入本品质量标准正文。

根据以上样品的测定，以及不同产地黄连、黄柏盐酸小檗碱含量的差异暂定本品每粒含黄连、黄柏以盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）计，不得少于1.2 mg。

参考文献

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[4] 黃海卫. 川黄柏中盐酸小檗碱的含量测定研究[J].湖南中医药导报，2003，9（4）：86-87.安徽农业科学，Journal of Anhui Agri. Sci.2014，42（16）：5168-5170，5174

责任编辑 黄小燕 责任校对 况玲玲