猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测

张漫 李娜 高木珍 张宁 刘晓辉 王辉

摘要：随机选取本实验室内的8名化验员，分别测定猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留量，通过对结果数据的分析，得出本实验室测定结果的准确程度。通过磷酸盐缓冲溶液提取猪肉组织中的氟喹诺酮类药物残留，经C18柱净化后，用高效液相色谱法测定含量。环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星的平均回收率（%）分别为：95.6、86.9、89.3和95.6，批内变异系数均≤14%，批间变异系数均≤6%。结果数据满足标准要求，证明本实验室能准确开展此项检测活动。

关键词：氟喹诺酮类药物；达氟沙星；恩诺沙星；环丙沙星；沙拉沙星；残留检测

Determination of Fluoroquinolones Residues in Pork Tissue

Abstract: We selecting 8 technicians in our laboratory randomly, letting they determine fluoroquinolones residues in pork tissues separately. Based on the analysis of the experimental data, we concluded the accuracy of my determination results. The Fluoroquinolones residues are extracted with phosphate buffer solution, cleaned by C18 SPE cartridge, then content was determined by HPLC. The average recoveries of four components were 95.6%, 86.9%, 89.3%, 95.6%.The variation coefficient of inter-assay were below 14%, intra-assay were below 6%. The results meet requirements , so we can carry out the test.

Key word: fluoroquinolones;danofloxacin; enrofloxacin; ciprofloxacin; sarafloxacin; residues determination

氟喹诺酮类药物属第3代喹诺酮类抗菌药，适应于敏感病原菌所致的呼吸道、胃肠道等感染，具有吸收好、组织浓度高、半衰期长、抗菌谱广等优点，已成为兽医临床的常用药。但随着临床用量的不断增长，因不合理用药或滥用药而导致的畜产品质量安全问题时有发生，并越来越引起社会的广泛关注。本文在运用“农业部1025号公告-14-2008”标准[1]的基础上，结合本实验室的工作实际，随机选取8名本实验室的化验员，同时并独立完成猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测工作，得出检测回收率，分析和判断测定结果的准确性。

1 仪器与试药

1.1 仪器

天平，感应0.01 g；分析天平，感应0.000 01 g；Aglient 1 200高效液相色谱仪-配荧光检测器；振荡器；组织匀浆机；离心机；Varian BondElut?誖C18柱（100 mg/mL）固相萃取柱；0.45 μm微孔滤膜。

1.2 药品与试剂

达氟沙星，批号10301，含量93.5%, Dr.Ehrenstorfer Gmbh公司；恩诺沙星，批号H0081206，含量99.9%,中国兽医药品监察所；环丙沙星，批号130451-201203，含量84.2%,中国食品药品检定研究所；沙拉沙星，批号20629，含量95.0%,Dr.Ehrenstorfer Gmbh公司。磷酸、氢氧化钠、甲醇、三乙胺、磷酸二氢钾均为分析纯；乙腈为色谱纯；超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：C18Analytical，5 μm， 4.6×250 mm；流动相：0.05 mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（82+18）V/V，使用前经0.45 μm微孔滤膜过滤；柱温：25℃；流速：0.8 mL/min；进样量：20μL；检测波长：激发波长280 nm，发射波长450 nm。

2.2 样品制备

2.2.1 空白样品的制备 取猪肌肉组织200 g绞碎，作为空白样品。

2.2.2 标准储备液的制备精密称取达氟沙星对照品10 mg，置于50 mL容量瓶中，用0.03 mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度为0.2 mg/mL的标准储备液；分别精密称取恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星对照品各50 mg，依次置于50 mL容量瓶中，用0.03 mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度为1 mg/mL的标准储备液，置于4℃冰箱中保存[2]。

2.2.3 标准工作液的制备分别精密量取1 mL达氟沙星标准贮备液、0.2 mL恩诺沙星标准贮备液、环丙沙标准贮备液星和沙拉沙星标准贮备液于同一100 mL容量瓶中，用乙腈稀释定容，制成浓度依次为2 μg/mL的达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星标准工作液，备用。

2.2.4 阳性添加样品的制备8批（人）分别各自称取空白样品4个，每个样品称取2（±0.05）g，其中一个作为空白样品，其余三个样品分别依次添加浓度为2 μg/mL的达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星混合标准工作液0.2 mL，制成200μg/kg的阳性样品，用于测定回收率[3]。

2.3 提取净化方法

将称取的2（±0.05）g猪肌肉组织样品置于30 mL匀浆杯中，加磷酸盐冲溶液10.0 mL，10 000 r/min匀浆1 min。匀浆液转入离心管中，中速振荡5 min，以10 000r/min离心5 min，取上清液待用。用磷酸盐缓冲溶液10.0 mL清洗刀头及匀浆杯，转入离心管中，洗残渣，混匀，中速振荡5 min，以10 000r/min离心5 min。合并两次上清液，混匀，备用。固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2 mL预洗。取上清液5.0mL过柱，用水1 mL淋洗，挤干。用流动相1.0 mL洗脱，挤干，收集洗脱液。经滤膜过滤后作为试样溶液，供高效液相色谱测定[4]。

2.4 试验结果

2.4.1 标准曲线 在选定的色谱条件下，0.005～0.5 μg/mL的范围内标准曲线及相关系数如下，线性良好。配制浓度见表1。

环丙沙星：y=603.580 19x-0.229 998, r=0.999 39

达氟沙星：y=5 406.704 01x+0.941 808, r=0.999 75

恩诺沙星：y=1 303.249 25x+2.133 35, r=0.999 78

沙拉沙星：y=484.622 58x+0.153 636, r=0.999 93

2.4.2 测定结果 环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星分离良好，无干扰，定量限为20μg/kg，添加浓度为200 μg/kg，批内变异系数均小于14%，批间变异系数均小于6%。环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星平均回收率（%）分别为：95.6、86.9、89.3和95.6，总体回收率（%）范围为77～113。达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星回收率见表2，色谱图见图1～3。

3讨论

环丙沙星和沙拉沙星平均回收率为95%以上；达氟沙星和恩诺沙星平均回收率在85%～90%区间，总体回收率较好。

批内变异系数的大小和化验员工作熟练程度及工作经验有直接关系，熟练的化验员所测得的回收率批内变异系数较低，工作时间较短的化验员所测得的回收率批内变异系数较高。

环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星检测残留量的批间变异系数（%）均小于6%，误差较低。

以上为本实验室的检测数据，为其它实验室开展同类检测提供数据支持。■（编辑：狄慧)

参考文献：

[1] 农业部1025号公告-14-2008. 动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测-高效液相色谱法 [S]．

[2] 郭黎明，朱奎，丁双阳，等．鸡肌肉组织中四环素类和氟喹诺酮类药物多残留检测[J].中国农业大学学报，2009,05:98-102．

[3] 朱莉萍，朱涛，武娜，等．高效液相色谱法测定猪肉中氟喹诺酮类药物[J].肉类研究，2011,10:29-31．

[4] 丑亚琴； 唐巍； 卢艳芬，等．高效液相色谱法同时测定水产品中四种氟喹诺酮类药物残留前处理条件的优化[J].水产养殖，2013,1:25-31．