顺铂对Hela细胞辐射增敏的体外实验探讨分析

韩丽

【摘 要】 目的：分析顺铂对宫颈癌细胞系Hela的细胞毒性和辐射增敏作用，以及射线与顺铂联合应用时的效应关系。方法：采用MTT法检测Hela细胞在不同浓度和辐射剂量下的细胞抑制作用；当辐射和顺铂联合应用时，检测细胞抑制率，分析顺铂与辐射联合应用时协同效应的条件。结果：细胞抑制率随药物浓度增加而增大；单纯辐射组细胞抑制率随着剂量增加而增加；单纯顺铂组细胞抑制率随着浓度增加而增加；辐射+顺铂组细胞抑制率随着辐射剂量增加而升高；结论：顺铂和辐射联合应用对宫颈癌Hela细胞增殖有明显的抑制效果，建议应尽早的应用顺铂增敏化疗。

【中图分类号】 R965.1 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-8801（2014）03-0302-01

顺铂是临床中最常用的化疗增敏药物之一，目前国内外的众多临床治疗之中普遍采用同步放化疗的综合治疗模式，通过应用小剂量的化疗药物，增加放射线对肿瘤细胞的杀伤作用。但是，化疗药物和放射线都对细胞有着严重的毒副作用，使临床中的多数患者难以接受。此次研究实验，只要针对辐射剂量与顺铂浓度之间的影响效应。

1 资料与方法

1.1 Hela细胞对顺铂敏感性的测定

将Hela细胞悬液接种于96孔培养板中，每孔100μL。参考研究报道[1]将顺铂确定从低到高8个浓度。培养箱中培养24h，实验孔中加入适量药物培养24h。终止培养后每孔加入20μLMTT试剂，混均后继续培养4h。弃上清、加入150μL二甲基亚砜，震荡仪震荡20min，酶标仪上490nm波长检测各孔吸光度值，每组取5个复孔的平均值，通过公式计算细胞抑制率[2]。细胞移植率=1-（实验组吸光度值/对照组吸光度值）×100%，计算半数致死浓度（IC50）值。

1.2 照射方法

所有照射均匀室温下照射，采用6MV-X线，剂量率4Gy/min，分别一次性给予各实验组6、8、10、12、14、15Gy和0、4、8、12Gy辐射剂量，源板距100cm。

1.3 MTT法测定顺铂的辐射增敏性

将细胞分为4组，空白对照组、单纯辐射组、单纯顺铂组、辐射+顺铂组。空白对照组只加细胞与培养；单纯辐射组按辐射剂量为6、8、10、12、14、15Gy共6个组；单纯顺铂组药物浓度根据顺铂IC50值，确定顺铂浓度分别为1、2、5、8、10μg/mL；辐射+顺铂组辐射剂量和药物浓度分别如单纯辐射组剂量和单纯铂组浓度，共30组，每组设5个平行样本。测定各组吸光度值后通过公式计算细胞抑制率。

1.4 集落形成法观察顺铂对Hela细胞的辐射增敏作用

按辐射剂量0、4、8、12Gy分为4个组，于25mL培养瓶中分别接种一定数量的细胞，每组分别设单纯辐射组、辐射+2μg/mL顺铂（待细胞贴壁后加入顺铂，使其终浓度为20%IC50[3]），每组设3个平行样本。存活分数的计算方法为：实验组克隆形成率/对照组克隆形成率，采用“多靶单击模型”拟合细胞存活曲线，计算辐射增敏比。

1.5 统计方法

采用SPSS17.0软件处理，数据符合正态性和方差齐性，且是多组比较，故进行方差分析，Graphad prism拟合细胞存活曲线，MATLAB绘制抑制率曲线图，协同效应分析时将实验所得值与理论值进行t检验分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Hela细胞对药物的敏感性

细胞抑制率随药物浓度增加而增大，通过Graph-ad prism软件求得顺铂的IC50值为10μg/mL。

2.2 MTT法测定不同干预条件下的细胞抑制率

单纯辐射组细胞抑制率随着剂量增加而增加；单纯顺铂组细胞抑制率随着浓度增加而增加。辐射+顺铂组细胞抑制率随着辐射剂量增加而升高；且在辐射后12、24、48h细胞抑制率随着剂量增加而升高。根据此结果，选取辐射剂量为12Gy加药物进行分析，给予不同浓度的顺铂，显示细胞抑制率随着浓度增加而升高，当浓度大于5μg/mL，曲线趋于平坦。组间总体比较有统计学差异。

2.3 药物对Hela细胞曾敏作用的比较

将单纯顺铂组与单纯辐射组细胞抑制率相加的值与辐射+顺铂组试验所得值相比较，进一步确定同步辐射与药物是否有协同效应。经统计学分析得当辐射剂量小于10Gy时，辐射+顺铂实验所得值较理论差异有统计学意义。

3 讨论

正常组织对于放射线的耐受力有限，辐射超过一定剂量，不仅难以提高肿瘤局部控制率，还会使正常组织发生放射性损伤的几率增加。大量基础研究和临床实验验证，同步放化疗能够提高晚期宫颈癌患者的缓解率，延长无进展生存期和总生存率，改善晚期宫颈癌患者预后，已成为晚期宫颈癌患者的常规治疗方法。

研究认为顺铂与放疗起増敏作用的可能机制如下：顺铂是一种广谱抗癌药，具有直接破坏DNA复制的细胞毒作用，灭杀局部或全身部位可能存在的癌细胞，从而提高局部控制率和减少远处转移；顺铂能抑制肿瘤细胞在放化疗后产生的加速再增殖，可能使一些肿瘤细胞从放疗不敏感的细胞周期进入敏感期；含铂类化疗药物可影响放射量-反应曲线，抑制亚致死性损伤的修复具有明显的放疗増敏作用。但是，有关顺铂与辐射并用时所产生的生物学效应有何不同及不同药物剂量和不同辐射剂量之间存在怎样的关系等很多相关问题目前少见文献报道。

在本次研究中，辐射剂量小于10Gy时，随着药物浓度增加，辐射+顺铂组曲线与单纯辐射组和单纯药物组相加曲线越来越靠近直到相交，且单纯辐射组与单纯顺铂组之和小于辐射+顺铂组的细胞抑制率，差异有统计学意义。因此，在宫颈癌治疗中，辐射和化疗药物同步使用比单纯辐射疗效好，而且在保证同样疗效时降低了辐射剂量，可减小放射副作用。放疗初期可同步实施増敏化疗以保证协同效应；但超过一定限度的辐射剂量和药物浓度是不可取的。本研究结果是以体外培养Hela细胞为实验对象获得的，但未考虑机体内环境、药物体内代谢、药物作用时间差等因素，与临床尚有一定差异，所以相关的临床最佳方案还有待进一步探讨。

参考文献

[1]张文璎，薛月珍，陶敏芳.顺铂和泰素对宫颈癌Hela细胞的抑制及放射增幅作用[J].上海交通大学学报，2010，30（2）：158-161.

[2]常萍，劉孜，王娟等.顺铂对Hela细胞辐射增敏的体外实验观察[J].西安交通大学学报，2011，32（4）：463-465.

[3]颜伟，丁国富，李斌等.CPG ODN 107增强人脑胶质瘤细胞放射敏感性的研究[J].中华肿瘤防治杂志，2007，14（7）；481-484.