止脱生发丸的质量标准研究

李 梅

（山东省莱阳卫生学校，山东 烟台 264000）

止脱生发丸的质量标准研究

李 梅

（山东省莱阳卫生学校，山东 烟台 264000）

目的建立止脱生发丸的质量标准。方法采用薄层色谱法（TLC）对止脱生发丸中的当归、川芎、苍术、延胡索、陈皮进行定性鉴别；采用HPLC法测定橙皮苷的含量。结果当归、川芎、苍术、延胡索、陈皮的TLC鉴别法专属性强、简便易行；HPLC含量测定，橙皮苷进样量在0.278～1.39 μg范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.99995，n=5），回收率为102.74%，RSD为0.80%。结论该法能有效地控制止脱生发丸的质量。

止脱生发丸；薄层色谱鉴别；高效液相法；质量标准

止脱生发丸是由中药何首乌、当归、川芎、苍术、延胡索、陈皮、茯苓等制成的丸剂，具有益气健脾，化瘀通络，养血生发的功效，用于脾虚湿盛，气滞血瘀所致的脂溢性脱发及斑秃。为了有效控制制剂质量，本研究建立了当归、川芎、苍术、延胡索、陈皮五味药的定性鉴别方法和橙皮苷的含量测定方法；所建立的方法能有效控制止脱生发丸的质量，且含量测定方法准确、简便易行。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-2010A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；METTLER TOLEDO AL204电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KQ-500E型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

薄层硅胶G（青岛海洋化工厂）、聚酰胺薄膜（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；当归对照药材（120927-201014）、川芎对照药材（120918-201110）、苍术对照药材（120932-200405）、延胡索乙素对照品（110726-201112）、橙皮苷对照品（110721-201014），均购自上海源叶生物科技有限公司；乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂为分析纯。

表1 样品中橙皮苷含量测定结果表批号

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 当归、川芎的鉴别[1,2]：取本品5 g，研细，加乙醚30 mL，超声处理15 min，滤过，滤渣备用，滤液用2%氢氧化钠溶液振摇提取2次，每次20 mL，合并氢氧化钠溶液，加盐酸调pH 1～2，在酸水液中加入乙醚，然后进行震荡提取，共需要2次，每次剂量为20 mL，合并乙醚液之后进行水浴蒸干处理，在残渣中加入乙酸乙酯共1 mL，溶解之后就成为供试品溶液。另外取出当归对照药材共1 g，使用与上述同样方法进行当归对照药材溶液制备；川芎对照药材1 g，同法制成川芎对照药材溶液。再取缺当归、川芎样品，使用同样的方法进行阴性对照溶液的制备。进行薄层色谱法试验，根据《中国药典》（2010年版本）当中相关记载进行操作，将上面各种溶液进行吸取，每次吸取剂量为3 μL，放置在同样材料的硅胶G薄层板上面，展开剂主要为比例19∶1的正己烷—乙酸乙酯，将其展开之后取出，晾干并在紫外光灯下面检测。在供试品色谱当中和对照药材色谱相适应的位置上面有同样颜色的荧光斑点显示出现。

2.1.2 苍术的鉴别[3]：取出苍术对照药材1 g，加入剂量为15 mL的正己烷并进行超声处理，时间为20 min，过滤然后将滤液挥发，使用1 mL的甲醇将残渣溶解然后制备成为对照药材溶液。取出缺苍术样品然后通过与上述方法制备对照药材溶液。行薄层色谱法试验，根据《中国药典》（2010年版本）当中相关记载进行操作。将上述2.1.1所得到的供试品溶液与本项目得到的对照药材溶液和阴性对照溶液各取其剂量5 μL并分别放置在同样材料的硅胶G薄层板上面，展开剂选择温度为60～90 ℃的石油醚-比例为19∶1乙酸乙酯，展开后取出并晾干，喷上5%的二甲氨基苯甲醛还有10%的硫酸乙醇溶液，使用热风吹直到出现清晰的显色斑点为止。

2.1.3 延胡索的鉴别[1,4]：取本品10 g，研细，加氨水5 mL，浸渍30 min，加乙醚50 mL，回流提取30 min，滤过，滤液用稀盐酸振摇提取2次，每次15 mL，合并酸水液，加氨水调pH 9～10，使用氯仿振荡提取，次数为3次，每次剂量为20 mL，与氯仿液合并然后使用水浴方法蒸干，使用1 mL甲醇将残渣溶解然后作为供试品溶液。取出延胡索乙所对照品加入甲醇，最终制成每mL含有0.5 mg药物的溶液，制备成为对照品溶液。取缺延胡索样品，同法制备阴性对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷—氯仿—甲醇－三乙胺（10∶6∶1∶1滴）为展开剂，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，在空气中挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。

2.1.4 陈皮的鉴别[5]：取2.1.1项下滤渣，挥干残余乙醚，加2%氢氧化钠溶液30 mL，超声处理30 min，离心，上清液加盐酸调pH 1～2，酸水液加乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，置水浴上浓缩至约1 mL，取出适量的橙皮苷对照品，加入甲醇之后制造成为饱和溶液并将其作为对照品溶液。取出缺陈皮的阴性样品使用上述方法取得阴性对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各2 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以氯仿-丙酮-甲醇（5∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.2 橙皮苷的含量测定[6]

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil ODS-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为乙腈—水（21：79）；检测波长284 nm；流速设置为每分钟1 mL，柱温设置为30 ℃。橙皮苷峰计算在理论搭板数不得少于4000。

2.2.2 溶液的制备

①对照品溶液的制备：取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含橙皮苷80 μg的溶液，即得。②供试品溶液的制备：取本品2袋，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 mL，称定重量，超声（功率250 W，频率40 kHz）处理30 min，取出，放冷，称定重量，用甲醇补足失重，滤过，取续滤液，以微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。③阴性对照溶液：按处方比例不加陈皮药材，按本品制备工艺制得缺陈皮样品，按照供试品溶液制备方法制备阴性对照，即得。

2.2.3 方法学考察

①专属性试验：精密吸取上述橙皮苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，按2.2.1项下色谱条件进行测定。结果表明供试品橙皮苷峰与对照品具有相同保留时间，分离度佳；阴性对照溶液在橙皮苷峰处无吸收，空白无干扰。②线性关系的考察：精密称取橙皮苷对照品13.9 mg置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。再分别精密量取2、4、6、8、10 mL至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度。分别精密进样各浓度溶液10 μL，按2.2.1项下色谱条件进行测定，以进样量（μg）（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，所得橙皮苷线性方程为：Y=1.71×106X-6403.1 r=0.99995，橙皮苷进样量在0.278～1.39 μg范围内与峰面积线性关系良好。③精密度试验：取橙皮苷对照品溶液（83.4 μg/mL），注入液相色谱仪，连续测定5次，橙皮苷峰面积值RSD 0.27%，表明仪器精密度良好。④稳定性试验：取2.2.2.2项下的供试品溶液于配制后的0、2、4、6、8、10 h分别测定峰面积，橙皮苷峰面积RSD0.14%（n=6），表明橙皮苷供试品溶液在配制后10 h内基本稳定。⑤重复性试验：取同一批号样品3袋，研细，取五份，每份0.5 g，精密称定，按2.2.1项下色谱条件进行含量测定，结果供试品溶液中橙皮苷平均含量为38.351毫克/袋，RSD为0.837%（n=5），表明该方法测定样品含量重复性良好。⑥加样回收试验：取已知含量的止脱生发丸（橙皮苷含量为38.351 毫克/袋，相当于7.670 mg/g）研细，取5份，每份0.25 g，精密称定，分别精密加入橙皮苷对照品溶液（0.0408 mg/mL）各50 mL，制备样品并测定回收率，结果平均回收率为102.74%，RSD为0.80%，表明本测定方法可行。⑦样品含量测定：取10批止脱生发丸，按本文供试品制备方法及色谱条件进行测定，每批样品平行测定2份，求得十批止脱生发丸中橙皮苷的含量。

3 结 果

见表1。

4 讨 论

4.1 当归、川芎二味药共有成分较多，故采用同一条件对二味药进行鉴别，参考文献，对其中的内酯类成分进行鉴别。

4.2 参考药典对本品中的延胡索进行薄层鉴别研究，样品采用氨性乙醚回流提取，由于处方中药味较多，有色带干扰，斑点不够明显；由于延胡索乙素为生物碱类成分，采用酸碱处理法对样品进行精制，阳性结果明显。

4.3 本品为一多种中药配制而成的中药复方制剂，成分较复杂，方中陈皮为君药，采用高效液相色谱法测定陈皮中的橙皮苷的含量，结果表明方法简单、灵敏度高，重现性好，可用于本制剂的质量控制。

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[2] 孔菲,丁莹,梁雪,等.川芎、当归的薄层层析鉴别[J].中医药学报, 2013,41(2):56-57.

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[5] 张应辉,蒋帆,吴雪.平安丸的质量标准研究[J].中国药房,2011,22 (35):3323-3325.

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B

1671-8194（2014）17-0085-03