小柴胡汤加减方对慢性胰腺炎大鼠胰腺外分泌功能的影响*

卓玉珍，张淑坤，张艳敏，徐新生，崔乃强

（天津市中西医结合急腹症研究所，天津市南开医院，天津 300100）

·实验研究·

小柴胡汤加减方对慢性胰腺炎大鼠胰腺外分泌功能的影响*

卓玉珍，张淑坤，张艳敏，徐新生，崔乃强

（天津市中西医结合急腹症研究所，天津市南开医院，天津 300100）

[目的]观察小柴胡汤加减方对慢性胰腺炎大鼠胰腺外分泌的影响。[方法]体质量180～200 g健康雄性Wistar大鼠30只，随机分为3组：对照组、模型组及中药组。模型组及中药组大鼠尾静脉注射二氯二丁基酯（DBTC）溶液（7 mg/kg），对照组仅尾静脉注射相同体积的溶剂。自造模第2天起中药组给予小柴胡汤加减方灌胃（10 mL/kg），每日1次。常规饲28 d，3组大鼠行苯洛肽（BT-PABA）实验，收集6 h总尿量，计算6 h大鼠尿PABA排出率；同时留取粪便，用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测大鼠粪弹力蛋白酶1（FE-1）含量。之后，麻醉大鼠，下腔静脉取血，用于血清淀粉酶、脂肪酶检测；取胰腺组织，用于组织病理学观察。[结果]组织病理学可见模型组腺泡萎缩，纤维组织增生明显，中药组病理损伤程度减轻。与对照组比较，模型组大鼠尿PABA排出率下降（P＜0.05），模型组粪FE-1含量降低（P＜0.05）。与模型组比较，中药组尿PABA排出率升高（P＜0.05），粪FE-1含量明显增加（P＜0.05）。中药组血清淀粉酶及脂肪酶活性均较模型组降低（P＜0.05）。[结论]小柴胡加减方能够改善大鼠慢性胰腺炎胰腺外分泌功能。

小柴胡汤加减方；慢性胰腺炎；胰腺外分泌

慢性胰腺炎（CP）是各种原因引起胰腺持续性、弥漫性或局限性炎症，导致胰腺细胞被逐渐破坏，胰腺不可逆转纤维化，胰管变窄或闭塞。临床表现主要为胰腺外分泌功能不全导致的食欲减退、饭后饱胀、脂肪泻等症状。目前，对胰腺外分泌功能不全的诊断主要依赖临床表现和实验室辅助检查。检测粪弹力蛋白酶（FE-1）含量和苯洛肽（BT-PABA）实验都能间接反映胰腺外分泌功能的变化。中医认为CP属于腹痛、胃脘痛、胁痛等范畴，病位在胰腺，但与肝胆、脾胃关系密切。近年来中医药在治疗本病方面积累了丰富的经验，小柴胡汤为《伤寒论》中治疗少阳病的主方，已有研究发现它对CP的治疗确有疗效。本研究采用大鼠尾静脉注射二氯二丁基酯（DBTC）溶液制备CP模型，观察小柴胡加减方对CP大鼠胰腺外分泌功能的影响。

1 材料及方法

1.1 实验动物 体质量170～200g的健康雄性Wistar大鼠30只，购自天津市民乐养殖场，动物合格证号SCXK（津）2009-001。

1.2 主要试剂及仪器 DBTC和BT-PABA购自美国Sigma公司，氨基苯甲酸（PABA），分析纯，为北京化工厂试剂；脂肪酶、淀粉酶试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；FE-1酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒购自武汉华美生物工程有限公司。其他试剂均为国产分析纯。中药柴胡、黄芩等饮片购自南开医院中药房。722型分光光度计为上海精密科学仪器有限公司产品；酶标仪为上海科华有限公司产品；全自动洗板机为Rayto公司产品。

1.3 实验方法

1.3.1 动物分组及模型制备 30只健康雄性Wistar大鼠采用随机数字表法随机分成3组：对照组、模型组和中药组，每组10只。模型组及中药组大鼠尾静脉注射DBTC溶液（7 mg/kg，将DBTC先溶于1份无水乙醇，然后再与2份甘油和2份二甲基亚砜混合配制成DBTC溶液），对照组尾静脉注射相同体积的DBTC溶解剂。中药组自第2天起给予小柴胡汤加减方灌胃（10 mL/kg），每日1次。第28天，行BT-PABA，同时留取粪便测FE-1含量。之后，各组用10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，常规消毒，开腹，取下腔静脉血，用于检测血清淀粉酶及脂肪酶活性；取胰腺组织，用于组织病理学观察。

1.3.2 中药汤剂制备 将中药饮片加8倍量水浸泡30 min，煎煮两次，两次均在沸腾后煎煮30 min，将两次药液合并过滤，浓缩为1 g/mL的水煎剂。

1.3.3BT-PABA实验 大鼠禁食水8 h，刺激排尿后，25 mg BT-PABA（含8.5 mg PABA）溶于8 mL水中灌胃，编号入代谢笼，笼下方放一容器收集尿量。之后每小时4 mL水灌胃，共5次。收集并准确称量首次灌胃后6 h大鼠总尿量，取2 mL尿液至有刻度、密闭良好的试管中，加10%盐酸0.25 mL，100℃水解1 h，自然冷却后备用。制备PABA标准曲线，与其比较根据公式即可算得尿中PABA的含量及排出率。

1.3.4 粪FE-1检测 称量粪便50 mg，按ELISA试剂盒操作步骤操作检测粪中FE-1含量。

1.3.5 组织病理学观察 取出的胰腺组织固定于10%福尔马林溶液中，逐级脱水，常规石蜡包埋切片，HE染色，镜下观察组织病理学变化。

1.3.6 血清淀粉酶、脂肪酶活性测定 在天津市南开医院检验科用全自动生化仪检测。

1.4 统计方法 采用SPSS18.0软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，正态分布计量资料的组间比较采用单因素方差分析，偏态分布计量资料的组间比较采用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠一般情况 造模第2天大鼠逐渐出现蜷卧少动、竖毛无光泽，饮食饮水量减少，体质量增加缓慢，部分大鼠粪质稀软不成形，肛周污染明显。中药组在灌胃1周左右，以上症状逐渐减轻，而对照组一般情况始终良好，体质量增加明显。

2.2 6 h尿PABA排出率 模型组大鼠6 h尿PABA排出率较对照组降低，有统计学意义（P< 0.05），中药组与模型组比较排出率升高（P<0.05）。见表1。

表1 3组大鼠6 h尿中PABA排出率（±s）Tab.1 ThePABAexcretionratein6hurineof3groups（±s）

表1 3组大鼠6 h尿中PABA排出率（±s）Tab.1 ThePABAexcretionratein6hurineof3groups（±s）

注：与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05。

组别 n 6 h尿中PABA排出率（%）对照组 10 72.17±12.96模型组 10 40.32±5.00*中药组 10 57.79±7.64#

2.3 粪FE-1检测 3组中，模型组与对照组比较FE-1含量明显降低（P<0.01）；中药组FE-1含量比模型组明显升高（P<0.05）。见表2。

2.4 组织病理学观察 肉眼下可见模型组胰腺颜色变浅呈灰白色，部分大鼠出现胰管明显扩张，胰腺表面粗糙不规则，伴有周围组织粘连。中药组胰腺变化不明显，表面光滑饱满，与周围组织无粘连，胰管未见明显扩张。对照组胰腺正常，未见明显变化。HE染色镜下可见：模型组腺泡萎缩变形、坏死，炎细胞浸润，纤维组织增生明显，小叶结构不清甚则消失。对照组小叶结构清晰可见，无明显的纤维组织增生及炎细胞浸润。中药组炎细胞浸润明显减少，纤维组织增生轻微。

表2 3组大鼠粪FE-1含量Tab.2 The levels of FE-1 in feces of 3 groups

2.5 血清淀粉酶、脂肪酶测定 与模型组比较，中药组能明显降低血清淀粉酶及脂肪酶的活性（P＜0.05）。见表3。

表3 3组大鼠血清淀粉酶、脂肪酶水平（±s）Tab.3 The level of serum amylase and lipase in 3 groups（±s）

表3 3组大鼠血清淀粉酶、脂肪酶水平（±s）Tab.3 The level of serum amylase and lipase in 3 groups（±s）

注：与模型组比较，*P<0.05。

组别 n 淀粉酶（U/L） 脂肪酶（U/L）对照组 10 1931.6±18.8 28.6±7.4模型组 10 2198.8±102.3 39.7±13.2中药组 10 1789.4±124.2* 21.6±7.2*

3 讨论

胰腺外分泌功能检查是评后胰腺功能的主要方法[2-3]。而中医古书籍中对胰腺之名及其生理功能均没有明确的论述，但在古代有“脺脏”、“散膏”、“肾脂”之称。现代医学认为[1]胰腺是人体的的第二大消化腺，主要由外分泌部和内分泌部混合组成。食物中的糖、脂肪、蛋白质等营养物质，都需经过胰腺分泌的各种酶消化后，才能被机体吸收利用，这与中医“脾主运化”的生理功能很相符，因此胰腺的生理功能可归属于中医学“脾”的功能范畴。据慢性胰腺炎的临床症状和体征可将其归属于中医学的“腹痛”、“胃脘痛”、“泄泻”等范畴。

胰腺外分泌功能受损导致CP患者消化不良目前仍然是临床治疗该病的难点，现代医学主要应用胰酶制剂、制酸剂、促消化道动力药等进行综合治疗，效果常不稳定，有时还需进行外科手术治疗[4]。因此，越来越多的专家学者将目光投向了中医药对CP的防治，并且也取得了较满意的疗效[5-9]。本研究是以《伤寒论》经典方小柴胡汤加减为研究对象，观察其对CP大鼠的防治作用。胰腺位于中焦，CP病在胰腺，但与肝胆、脾胃关系密切，胰腺受损常导致三焦枢机不利，气化失常，日久则使肝失调达，脾胃失和，最终导致肝气郁结，脾不运化，气血脉络运行不畅，甚则瘀血凝滞，百症丛生。小柴胡汤是治疗少阳证的主方，是和法的代表方剂之一。方中柴胡质轻味苦，能疏少阳郁滞为君；黄芩味苦，味重，能清胸腹蕴热为臣，君臣合用能和解少阳之邪；参、枣、草合用可和中益气，扶正祛邪为佐使药。具有外可和解少阳，舒解少阳之枢机，内可疏利三焦，舒解肝胆之气郁。全方配伍有攻补兼施、寒温并用、升降协调的特点。随着近代医家对小柴胡汤认识的不断深入，其使用已不仅仅局限于少阳证。笔者以小柴胡汤为基础方，根据CP虚实夹杂的临床特点加减化裁用以治疗CP取得了较好的疗效。

BT-PABA实验是一项具有历史传统的胰腺外分泌功能检测实验。BT-PABA仅能被糜蛋白酶分解，生成PABA，在小肠吸收，经过肝脏乙酰化后，由肾脏排出。胰腺外分泌功能低下时，糜蛋白酶分泌量减少，BT-PABA不能充分裂解生成PABA，导致从尿中排出的PABA下降，所以用尿中排出PABA的量可间接反应胰腺的外分泌功能。FE-1是由外分泌腺分泌的一种胰腺内切蛋白酶，经十二指肠乳头排入十二指肠，其浓度降低特异性地提示胰腺外分泌功能不全[10]。FE-1存在于人类胰腺分泌物和粪便中，稳定性好，且结果不受胰酶替代疗法的影响，能较好地反映胰腺外分泌功能。本实验结果发现：模型组的FE-1水平及尿中PABA的排出率均较对照组明显降低，表明了CP大鼠存在外分泌功能下降；中药组较模型组均有明显升高，说明小柴胡加减方对CP大鼠胰腺外分泌功能有良好的改善作用。

粪FE-1和BT-PABA实验都能间接反映胰腺外分泌功能，均可以作为临床诊断CP的辅组检查手段，但两者也有一定的区别[11]。有研究显示[12]：BTPABA的敏感性较高，但服药前需排尿且3 d停用磺胺、芳香族及噻嗪类药物，同时需要收集6 h总尿量，耗时长；粪FE-1的特异性较高，但对重度胰腺炎患者其敏感性也较高，且无需进食停药，同便常规一起留检即可，省时。但粪FE-1需用ELISA试剂检测，费用较高，BT-PABA实验用国产的苯洛肽能降低费用且不降低敏感性[10]。CP时，胰腺组织炎性损伤导致胰酶释放增加，胰管阻塞导致逆流入血的胰酶增加，这些都使血清胰酶活性增加。本实验中小柴胡加减方可以明显降低血清中淀粉酶及脂肪酶的活性，但未能发现CP大鼠血清淀粉酶、脂肪酶活性增加，可能由于CP后期淀粉酶、脂肪酶活性增加已不明显有关。

结合BT-PABA实验和粪FE-1检测结果提示小柴胡加减方对胰腺外分泌功能有保护作用，为小柴胡汤用于临床治疗CP提供了理论依据，但其具体机制还有待进一步研究。

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Effect of modified minor Radix Bupleuri decoction on pancreatic exocrine function in rats with chronic pancreatitis

ZHUO Yu-zhen,ZHANG Shu-kun,ZHANG Yan-ming,XU Xin-sheng,CUI Nai-qiang
（Tianjin Institute of Acute Abdominal Disease of Integtated Traditional Chinese and Western Medicine，Tianjin Nankai Hospital，Tianjin 300100，China）

[Objective]To investigate the effects of minor Radix Bupleuri decoction on exocrine pancreatic function in rats with chronic pancreatitis.[Methods]Thirty male Wistar rats,weighing 180～200 g were randomly divided into three groups:control group，medicinal herbal group，model group.The model group and the medicinal group were injected with Dibutyltin dichloride(DBTC)solution into the caudal vein at a dose of 7 mg/kg body weight.The control group was treated with vehicle at the same volume.The medicinal herbal group lavaged with modified minor Radix Bupleuri decoction for 28 days.The n-benzoyl-tyrosyl para-aminobenzoic acid (BT-PABA)test was carried out to evaluate the exocrine pancreatic function.Feces was collected to detect the FE-1.Then rats were sacrificed and the pancreas tissue was harvested for histological examination.The activity of amylase and lipase was detected at same time.[Results]Compared with the control group,the levels of FE-1and and the excretion rate of PABA were reduced in rat with chronic pancreatitis.Compared with the model group,treatment of the modified Minor Radix Bupleuri decoction could significantly reduce the activity of amylase and lipase（P＜0.05）.It could increase the levels of FE-1（P＜0.05）and the excretion rate of PABA.[Conclusion]The modified Minor Radix Bupleuri decoction can improve the exocrine pancreatic function in rat with chronic pancreatitis.

modified minor radix bupleuri decoction；chronic pancreatitis；exocrine pancreas

R285.5

：A

：1672-1519（2014）05-0292-04

2013-12-06）

（本文编辑：马 英，张震之）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.05.15

国家自然科学基金青年科学基金项目（81102686）；天津市卫生行业重点攻关项目（12KG110）。

卓玉珍（1979-），女，硕士，助理研究员，从事慢性胰腺炎中西医结合基础研究。