HPLC法测定康肾口服液中人参皂苷的含量*

郝少君，李文俊，范莉莉，张正臣

（中国人民解放军第371中心医院，新乡 453000）

HPLC法测定康肾口服液中人参皂苷的含量*

郝少君，李文俊，范莉莉，张正臣

（中国人民解放军第371中心医院，新乡 453000）

[目的]研究康肾口服液用高效液相色谱法（HPLC）测定其人参皂苷的含量。[方法]以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水（18∶82）为流动相，检测波长为203 nm。理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6 000。[结果]人参皂苷Rg1浓度在0.053～0.265 g/L范围内，人参皂苷Re浓度在0.037～0.185 g/L范围内，峰面积与浓度线性关系良好，平均回收率为99.12%。[结论]HPLC法测定康肾口服液中人参皂苷的含量，操作简单、重复性好，可有效控制康肾口服液的质量标准。

HPLC；康肾口服液；人参皂苷；含量测定

康肾口服液由人参、生黄芪、白术、茯苓、淫羊藿、山药、地龙、红花、金樱子、芡实、甘草等组成，具有益气温阳，固本涩精，活血通络之功[1-5]，用于慢性肾炎、肾病综合症、阳痿早泄等作用[6-8]。为更好的控制药品的质量，对康肾口服液用高效液相色谱法测定其人参皂苷的含量进行了研究[9-12]。

1 仪器和试药

仪器：岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，N2000色谱工作站，试剂：乙腈为色谱纯，水为二次重蒸水。药品：康肾口服液由解放军371医院制剂室提供，批号：20110425。人参皂苷Rg1对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：110703-200322。人参皂苷Re对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：110754-200320。

2 方法与结果

2.1 测定波长的选择 取人参皂苷Rg1以乙腈-水（18∶82）流动相为溶剂在200～400 nm范围内对人参皂苷Rg1标准品进行扫描，结果在203 nm处有最大吸收，故检测波长选定为203 nm。见图1。

2.2 流动相的选择 根据文献报道及《中国药典》中采用的流动相，比较了3种流动相，1）乙腈-水（18: 82），2）乙腈-0.05%磷酸溶液（19∶81），3）乙腈-0.1%磷酸溶液（19∶81），并设定柱温为30℃。实验结果认为流动相1）较理想，分离效果较好，保留时间适中。

图1 人参皂苷Rg1以乙腈-水（18∶82）的流动相为溶剂的紫外全波长扫描图Fig.1 The whole ultraviolet wavelength scanning figure of ginsenoside Rg1 with acetonitrile-water(18:82）mobile phase as the solvent

经调整，将色谱条件和系统适用性试验确定为：色谱柱C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相：乙腈-水（18∶82），流速：1.0 mL/min，检测波长：203 nm，柱温：30℃，进样量：10 μL，理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6 000。色谱图见图2～4。

图2 人参皂苷Rg1、人参皂苷Re混合对照品色谱图Fig.2 Chromatography of mixture reference substance of ginsenoside Rg1 and ginsenoside Re

图3 康肾口服液样品色谱图Fig.3 Chromatogram of Kangshen oral liquid

图4 缺人参的阴性样品色谱图Fig.4 Chromatogram of negative sample without ginseng

2.3 线性范围、最小检出量 将人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品制成不同浓度的溶液，分别进样10 μL，以峰面积（Y）对进样浓度（X，g/L）进行线性回归，人参皂苷Rg1回归方程为Y^=2E+07X-31862，相关系数r=0.999 6；人参皂苷Re回归方程为Y^= 79 249X-3 259.3，相关系数r=0.999 7。结果表明，人参皂苷Rg1浓度在0.053～0.265 g/L范围内，人参皂苷Re浓度在0.037～0.185 g/L范围内，峰面积与浓度线性关系良好。

取线性关系试验项下的1号溶液，精密量取2mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20 μL，分别注入液相色谱仪，测定，色谱图中，信噪比>10∶1，所以最小检出量<0.2 μg/mL。

2.4 溶液的制备

2.4.1 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，摇匀，即得。

2.4.2 供试品溶液的制备 取本品10 mL，用水饱和正丁醇振摇提取3次（30、20、10 mL），合并正丁醇液，依次用氨试液20 mL、水20 mL洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 mL量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.5 精密度实验 取线性关系实验项下的3号溶液，精密量取10 μL，连续测定6次，表明本法精密度良好。实验结果表明：峰面积的相对标准差RSD< 2%，说明仪器精密度良好。

2.6 重复性实验 取同一批样品6份，分别按含量测定项下方法测定，计算含量。结果表明，样品平均含量为0.195 g/L，RSD=0.95%，所考察方法重复性良好。

2.7 稳定性实验 取同一批样品，按含量测定项下方法制备样品，得样品供试品溶液，取供试品溶液与对照品溶液，于0、1、2、4、8及24 h分别进样，每次进样量10 μL，记录峰面积值。结果对照品及样品供试液在24 h内稳定性良好。

2.8 回收率实验 取已知含量的样品（批号：20110806），研细，取1 g，精密称定，加人参皂苷Rg1对照品溶液（0.53 g/L）2.5 mL和人参皂苷Re对照品溶液（0.37 g/L）2 mL，按供试品溶液制备方法制备，测定峰面积，计算测得量，结果平均回收率为99.12%，RSD为1.02%。结果见表1。

表1 加样回收率实验结果Tab.1 Results of sample recovery rate

2.9 样品含量测定 取批号为20110806、20111011、20111208的3批康肾口服液样品，分别进行含量测定，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n=2）Tab.2 Results of the sample content determination（n=2）

由以上结果可知，此含量测定方法可运用于康肾口服液的含量测定。

3 讨论

康肾口服液以人参、黄芪为君药，两药为辛、温之品，入脾肾二经，补肾健脾，固本涩精。山药、白术等健脾生精化源为臣药，重在补后天之本，以助先天之本。淫羊藿、芡实、金樱子温阳固本升精，涩精，以不致精微外泄。地龙、红花化瘀血通经络，共为佐药，使脾肾之络气通畅，又能升轻而降浊。甘草调和诸药，又能缓和诸药阳热过甚，兼有气血双补之功。以上诸药密切配合，重点旨在补肾健脾，兼而活血，使正气自复，瘀血自除，肾病得愈[6-8]。为确保制剂质量，笔者探究了其主要成分含量标准，经多次试验结果证明，氨试液、水洗涤正丁醇液可除去杂质，避免杂质峰干扰主峰。本实验建立了HPLC法测定康肾口服液中人参皂苷的含量，处理方法简单，测定结果准确可靠，重复性好，不受其他成分干扰，因此可用于康肾口服液的质量控制。

[1]王同聚，杨红亚，陈维亮，等.舒脉宁注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究[J].天津中医药，2012,29（1）：72-74.

[2]赵京生,易伟国,张正臣.康肾口服液对血清尿素氮及肌酐水平的影响[J].中国现代应用药学,2013,30(11):1187-1189.

[3]赵京生，杨 君，胡 波，等.康肾口服液对大鼠heymann肾病模型肾脏组织形态的影响[J].中医学报，2013，28(2):217-218.

[4]赵京生，易伟国.自拟康肾口服液对大鼠庆大霉素急性肾损伤模型的影响[J].实用医药杂志,2013,30(8):54-56.

[5]易伟国，赵京生，张正臣.自拟康肾口服液对氺负荷的影响[J].实用医药杂，2013,30（8）:432-435.

[6]杨 君，赵京生，林新伟，等.康肾口服液治疗慢性肾衰竭疗效观察[J].河北医药，2013,35(18)：2855-2856.

[7]赵京生，杨 君，林新伟，等.自制康肾口服液治疗慢性肾小球炎150例[J].实用医药杂志，2013,30（2）:128-129.

[8]赵京生.自制康肾口服液治疗慢性肾炎的对比观察[J].实用医药杂志，2013，30(4):336-337.

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[10]李 越,杜 嵘,张艳军，等.高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1与黄芩苷在细胞培养基中的含量变化[J].天津中医药，2006,23 (2):160-162.

[11]周思思,马增春,梁乾德，等.人参附子不同比例配伍对小鼠急性毒性的影响[J].天津中医药，2013,30(1):43-46.

[12]国家药典委员会.中华人民共和国2010年版药典Ⅰ部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

HPLC method for determining ginsenoside content in Kangshen oral liquid

HAO Shao-jun,LI Wen-jun,FAN Li-li,ZHANG Zheng-chen
（The 371st Hospital Center of Chinese People’s Liberation Army,Xinxiang 453000,China）

[Objective]To study the content of the ginsenoside in Kangshen oral liquid by HPLC method.[Methods]Take eighteen alkyl silane bonded silica as filler,water solution with acetonitrile(82∶18)as mobile phase;the detection wavelength was 203 nm.Number of theoretical plates by ginsenoside Rg1 peak calculation should not be less than 6000.[Results]The ginsenoside Rg1 concentration in the range of 0.053～0.265 g/L,ginseng saponin Re concentration in the range of 0.037～0.185 g/L,the peak area and the concentration had good linear relationship.The average recovery rate was 99.12%.[Conclusion]The HPLC method for the determination of ginsenoside content in Kangshen oral liquid has a feature of simple operation,good reproducibility.It can effectively control the quality standard of Kangshen oral liquid.

HPLC;Kangshen oral liquid;ginsenoside;content determination

R285.5

：A

：1672-1519（2014）03-0181-03

2013-10-12）

（本文编辑：高 杉，马晓辉）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.03.17

河南省科学技术厅2009年科技发展计划（092102 310202）。

郝少君（1965-），男，主任药师，从事中药制剂及药理研究。

张正臣，E-meil:xxzzc2010@126.com。