新疆奎屯部分地区奶牛球虫感染现状调查

蒋业慧，王正荣，张艳艳，薄新文

（1.石河子大学动物科技学院，石河子 832000；2.新疆农垦科学院 新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室，石河子 832000）

新疆奎屯部分地区奶牛球虫感染现状调查

蒋业慧1,2，王正荣2，张艳艳2，薄新文2

（1.石河子大学动物科技学院，石河子 832000；2.新疆农垦科学院 新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室，石河子 832000）

为调查奎屯地区奶牛球虫感染与流行现状，试验选取奎屯不同地区的5个规模化奶牛养殖场，对2～3月龄、6月龄、1～2岁、5～6岁的牛直肠采集粪便共290份进行球虫检测。结果发现被检5个规模化奶牛场均存在球虫感染，感染率最高为58.14%；共检出8种艾美耳属球虫，分别是牛艾美耳球虫(Eimeria bovis)（8.62%）、邱氏艾美耳球虫(Eimeria zuernii)（9.31%）、椭圆艾美耳球虫(Eimeria ellipsoidalli)（11.03%）、柱状艾美耳球虫(Eimeria cylindrce)（5.86%）、阿拉巴艾美耳球虫(Eimeria alabamensis)（4.13%）、亚球艾美耳球虫(Eimeria subspherica)（9.31%）、奥博艾美耳球虫(Eimeria auburnensis)（5.17%）、加拿大艾美耳球虫(Eimeria canadensis)（3.44%），且优势虫种为椭圆艾美耳球虫(Eimeria ellipsoidalli)、邱氏艾美耳球虫(Eimeria zuernii)、亚球艾美耳球虫(Eimeria subspherica)、牛艾美耳球虫(Eimeria bovis)。

奎屯；奶牛；球虫；感染率；感染强度

牛球虫病是由艾美耳属（Eimeria）的多种球虫寄生于牛的肠道粘膜上皮细胞内引起的以出血性肠炎为主要特征的寄生性原虫病，主要危害犊牛，引起犊牛腹泻、贫血、消瘦、发育缓慢、免疫力低下，甚至死亡。成年牛多为带虫者，为主要的传染源。牛球虫病给养牛业造成严重的经济损失[1]。新疆奶牛养殖业蓬勃发展，为了解与探究奎屯地区奶牛球虫感染与流行现状，并根据调查结果设计驱虫方案，为奶牛球虫病的防治提供理论依据，2013年5～6月我们对奎屯地区5个规模化奶牛场的牛球虫种类和感染现状进行了相关的调查。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源 分别采自奎屯不同地区的5个规模化奶牛养殖场，采样奶牛的年龄为2～3月龄、6月龄、1～2岁、5～6岁4个阶段。直肠采集粪便50 g，置于一次性塑料手套中，并标记地区、场名、奶牛标号、年龄、体况，置于4 ℃冰箱中待检。

1.2 方法

1.2.1 样品的处理方法 每份粪样取2 g，加自来水40 mL，搅拌混匀；60目铜筛过滤于50 mL的离心管中，以1200×g离心5 min；去上清，沉淀物中加30 mL的饱和蔗糖水，以1200×g离心5 min，用6 mm的铁丝吊环蘸取表面液膜并抖落于载玻片中央，覆盖盖玻片，以低倍显微镜观察球虫卵囊[2,3]，记录结果。

1.2.2 球虫卵囊的孢子化培养及虫种鉴定 取5 g粪便于40 mL的自来水中，搅拌混匀；经60目铜筛过滤于50 mL的离心管中，以1200×g离心5 min；去上清，沉淀物中加30 mL的饱和蔗糖水，以1200×g离心5 min；用一直径为1 cm的纱窗漏网，蘸取表面水膜，抖于另一个装有适量40 mL自来水的50 mL的离心管中，重复5次；以1400×g离心10 min，去上清，在离心管沉淀物中加入2.5%重铬酸钾溶液1 mL，也可以将搜集物置于平皿中，加入适量2.5%重铬酸钾，溶液高度不超过2 mm，放置于室温下培养，培养24 h之后，每6 h观察镜检观察1次。根据孢子化所用的时间，卵囊的大小、形态、颜色等，参照图谱进行虫种鉴定[4-6]。

1.2.3 感染强度的确定 采用麦克马斯特氏法进行感染强度的检测[7]，取1 g粪便于50 mL的离心管中，加入29 mL的饱和盐水；在麦氏计数板上加满液体，静置10 min，显微镜下观察，记10×10的方格内所有的卵囊数，记两次，取平均值，此值乘200，即为每克粪便中的卵囊数（OPG值）。

2 结果

2.1 不同奶牛场的球虫感染率与感染强度5个牛场均存在球虫感染，分别为20.97%、37.10%、36.92%、24.14%和58.14%，平均感染率为34.14%（见表1），由此可见奎屯地区存在奶牛球虫感染，广大养殖户应给予足够的重视。

表1 不同奶牛场的球虫感染率与感染强度Table 1 Infection rate and infection intensity in different farms

2.2 不同年龄奶牛球虫感染率与感染强度各个年龄段奶牛的球虫感染率均达到30%以上，但平均感染强度偏差幅度较大，其中2～3月龄的犊牛感染强度最高，OPG值达到14 456，与其他年龄段奶牛球虫的感染强度相比差异性均极显著；5～6岁经产奶牛的感染强度比较低，但感染率并不低，与6月龄、1～2岁奶牛球虫的感染率、感染强度相比，差异性均不具有显著性差异（见表2）。各个年龄段的奶牛对球虫均易感，但2～3月龄的犊牛易感性最高，感染强度最大，临床症状最明显，成年奶牛多为隐性感染阶段，临床症状不明显，但不断向外界排出卵囊，为主要的传染源。

表2 不同年龄奶牛球虫感染率与感染强度Table 2 Infection rate and infection intensity in different ages of dairy cow

2.3 奶牛感染球虫的种类及形态描述共观察到8种牛艾美耳球虫，分别为牛艾美耳球虫（Eimeria bovis）、邱氏艾美耳球虫（Eimeria zuernii）、椭圆艾美耳球虫（Eimeria ellipsoidalli）、柱状艾美耳球虫（Eimeria cylindrce）、阿拉巴艾美耳球虫（Eimeria alabamensis）、亚球艾美耳球虫（Eimeria subspherica）、奥博艾美耳球虫（Eimeria auburnensis）、加拿大艾美耳球虫（Eimeria canadensis），各种艾美耳球虫所观察到的孢子化卵囊数分别为175、135、192、51、24、216、90和30，共913个孢子化球虫卵囊。

2.3.1 亚球艾美耳球虫（Eimeria subspherica） 卵囊为椭圆形或亚球形，大小为（9～11）μm×（8～12）μm，平均：8.5μm×11.5μm。四个孢子囊呈椭圆形，无外残体，斯氏体明显，每个孢子囊内含有两个子孢子。卵囊壁均匀的薄，光滑、透明，无卵膜孔。孢子化时间为4～5 d（见图1A）。

2.3.2 椭圆艾美耳球虫（Eimeria ellipsoidalli） 卵囊为椭圆形或卵圆形，卵囊大小为：（12～27）μm×（11～21）μm，平均大小：16.9 μm×13 μm。四个孢子囊呈长卵圆形，有内残体和明显的斯氏体，无外残体和极粒，每个孢子囊内含有两个子孢子。卵囊壁薄、均匀、透明，无卵膜孔。孢子化时间为48～72 h（见图1B）。

2.3.3 邱氏艾美耳球虫（Eimeria zuernii） 卵囊为球形、亚球形或椭圆形。大小为：（15～22）μm×（13～18）μm，平均为：17.8 μm×15.6 μm。卵囊壁薄、均匀、透明、无色、无卵膜孔。四个孢子囊呈长卵圆形或椭圆形，无内残体，有斯氏体，无外残体和极粒，每个孢子囊内含两个子孢子。孢子化时间为24～48 h（见图1C）。

2.3.4 加拿大艾美耳球虫（Eimeria canadensis） 卵囊为椭圆形，大小为（28～37）μm×（20～26.5）μm，平均：32.5 μm×23.4 μm。四个孢子囊呈长卵圆形，有内残体，有明显的斯氏体，无外残体和极粒，每个孢子囊内含有两个子孢子，卵囊壁光滑、透明，棕黄色。有卵囊孔。孢子化时间为96～120 h（见图1D)。

2.3.5 阿拉巴艾美耳球虫（Eimeria alabamensis） 卵囊为梨形、椭圆形或不对称形，大小为：（13～24）μm×（11～16）μm，平均大小：18.9 μm×13.4 μm，四个孢子囊呈长卵圆形或椭圆形，无内残体，斯氏体不明显，无外残体和极粒，每个孢子囊内含有两个子孢子。卵囊壁薄，均匀、透明、几乎无色，没有卵膜孔，孢子化时间为96～120 h（见图1E）。

2.3.6 柱状艾美耳球虫（Eimeria cylindrce） 卵囊为圆柱状、柱状，或狭窄的柱状。大小为：（16～27）μm×（12～15）μm，平均：23.3 μm×13.3 μm。四个孢子囊呈长卵圆形，有内残体，斯氏体明显，无外残体和极粒，每个孢子囊内含有两个子孢子。卵囊壁薄、无色、光滑、无卵膜孔。孢子化时间为48～72 h（见图1F）。

2.3.7 牛艾美耳球虫（Eimeria bovis） 卵囊为卵形的，卵囊大小为：（23～34）μm×（17～23）μm，平均：27.7 μm×20.3 μm。四个孢子囊呈长卵圆形，有内残体，斯氏体明显，无外残体和极粒，每个孢子囊内含有两个子孢子。卵囊壁光滑、均匀、透明，颜色呈褐绿色。有卵膜孔。在室温条件下孢子化时间：48～72 h（见图1G）。

2.3.8 奥博艾美耳球虫（Eimeria auburnensis） 卵囊为卵形，大小为（32～46）μm×（20～25）μm，平均大小：38.4 μm×23.1 μm，卵囊壁光滑、均匀、透明，浅灰棕色；有时它可能有粗糙的、成颗粒的表面，甚至有乳头状突起。四个孢子囊呈长卵圆形，无外残体，斯氏体不明显，每个孢子囊内含有两个子孢子，在显微镜下在卵囊的窄端可见一个苍白区。孢子化时间为48～72 h（见图1H）。

图1 奶牛感染的各类球虫卵囊Fig.1 Sporulated oocyst of Eimeria from dairy cow

2.4 各种球虫在整个奶牛场及各个奶牛场的感染情况就整个牛场而言，牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫、椭圆艾美耳球虫、亚球艾美耳球虫为优势虫种，并且这4种优势虫种中存在两种致病性强的牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫（见表3）。各个奶牛场均存在艾美耳球虫的感染，且各个奶牛场各种奶牛球虫的感染率不尽相同，各个奶牛场的优势虫种也有所差异：牧场1的优势虫种为邱氏艾美耳球虫，牧场2、牧场3、牧场4的优势虫种均为椭圆艾美耳球虫，牧场5的优势虫种为耳球虫牛艾美（见表4）。

2.5 各个年龄段各种球虫的感染率在此次调查中发现牛艾美耳球虫的8个种，且各个年龄段的优势虫种略有差别，其中，在2～3月龄的犊牛中，牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫、椭圆艾美耳球虫、柱状艾美耳球虫感染率比其余虫种都偏高，为犊牛球虫的优势虫种；在6月龄的犊牛中椭圆艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫、亚球艾美耳球虫的感染率比其余球虫的感染率较高；在1～2岁的青年牛中，致病性强的牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫的感染率与其感染低月龄犊牛的感染率相比有所下降，而椭圆艾美耳球虫、亚球艾美耳球虫的感染比例有所偏高；5～6岁的经产牛感染球虫种类有所减少，仅检出6种球虫，在这六种球虫当中，感染率相对比较高的为邱氏、椭圆、亚球艾美耳球虫。由此数据可知，各个年龄段所感染的球虫种类及各个年龄段易感的球虫种类均有所差异，且幼龄牛对致病性较强的牛艾美耳球虫和邱氏艾美耳球虫较为敏感（见表5）。

表3 各种球虫在整个奶牛场的感染率Table 3 The infection rate of every dairy cow coccidiosis in the total farm

表4 各个球虫在各个奶牛场的感染率Table 4 The infection rate of every coccidiosis in every farm

表5 各个年龄段各种球虫的感染率Table 5 Infection rate of different coccidiosis in different ages

3 讨论

奶牛球虫感染在世界范围内十分普遍，且牛球虫种类丰富，Levine[8]报道有22种。1992年，黄兵等[9]报道我国存在16种可以感染牛的艾美耳球虫。在国外，Chibunda等[10]1997年报道在坦桑尼亚奶牛球虫的感染率为35%，共发现7个虫种。Koutny等[11]调查结果显示，在澳大利亚被调查的牛场中有97.97%的牛场中存在球虫的感染，样品的阳性率高达83.67%，共检出11种球虫。Cicek等[12]报道，在土耳其所调查的504个牛粪便排泄物中有20.04%的样品中检出11种牛球虫卵囊。本次调查共涉及奎屯6个规模化奶牛场，各个奶牛场均存在奶牛球虫感染，且各个年龄段的奶牛球虫感染率均在30%以上，OPG值均在2000以上，且共检出8种艾美耳球虫。新疆北部地区王开胜等[13]报道石河子某牛场曾爆发过牛球虫病，阳性率为54.84%，且存在6种球虫的感染，与本次调查结果共同证明新疆北部存在奶牛球虫的感染，但各个地区流行的奶牛球虫种类及感染率有所差异，这可能与不同牛场的饲养管理条件差异有很大的关系。金兰梅等[14]对江苏省部分地区的9个奶牛场进行了球虫感染调查，结果表明9个场都有球虫感染，感率最高的为1～6月龄和6～12月龄的奶牛，大部分牛场的OPG低于1000。石冬梅等[15]报道河南省奶牛球虫的感染率为37.57%，共检出11种奶牛球虫。对比各地区调查结果显示虽然新疆气候干燥，昼夜温差大，但依然存在较为严重的奶牛球虫感染。为了降低奶牛球虫对奶牛业的危害，各个奶牛场应加强奶牛球虫病的防控，做好疾病监测，采用药物预防，提高整体畜群的抵抗力。当然本次调查只是对新疆奎屯地区5～6月奶牛球虫的感染情况进行了调查，并未对奶牛球虫全年的感染情况进行监测，同时调查的数量不是很多，故这一结果并不能反应整个奎屯地区全年奶牛球虫感染情况。鉴于此，本课题组将进一步扩大样品数量，并进行全年的感染情况调查，全面掌握奎屯地区奶牛球虫流行规律，为制定合理的驱虫方案提供理论依据。

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INVESTIGATION INTO THE INFECTION STATUS OF DAIRY COW COCCIDIOSIS IN KUITUN AREA OF XINJIANG PROVINCE

JIANG Ye-hui1,2, WANG Zheng-rong2, ZHANG Yan-yan2, BO Xin-wen2
(1.College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi 832000,China; 2. The Breed and Biotechnology Key Laboratory of Sheep, Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science, Shihezi 832000, China)

To investigate into the infection status of dairy cow coccidiosis in Kuitun area of Xinjiang province, 290 fecal samples were randomly collected from cattle on f ve large scale farms, ranging from 2-3 months, 6 months, 1-2 years old to 5-6 years old. Examination of these samples revealed that all f ve dairy farms were infected with coccidiosis with the highest infection rate at 58.14%. Eight species of parasites were identif ed, including Eimeria bovis (25.25%), Eimeria zuernii (27.27%), Eimeria ellipsoidalli (32.32%), Eimeria cylindrce (17.17%), Eimeria alabamensis (12.12%),Eimeria subspherica(27.27%), Eimeria auburnensis (15.15%) and Eimeria Canadensis (10.10%).

Kuitun; dairy cow; coccidiosis; infection rate; infection intensity

S858.232.723

A

1674-6422（2014）01-0057-06

2013-10-04

国家科技支撑计划(2012BAD43B02)

蒋业慧，女，预防兽医学专业

薄新文，E-mail：851661263@qq.com