穿心莲总内酯骨架缓释片的制备及释放度测定

李小芳， 舒 予， 刘 玲， 文怡静， 吴 珊， 尹帮龙

（1.成都中医药大学， 四川 成都 611137； 2.中药材标准化教育部重点实验室， 四川 成都 611137； 3.中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地， 四川 成都 611137）

穿心莲总内酯骨架缓释片的制备及释放度测定

李小芳1，2，3， 舒 予1，2，3， 刘 玲1，2，3， 文怡静1，2，3， 吴 珊1，2，3， 尹帮龙1，2，3

（1.成都中医药大学， 四川 成都 611137； 2.中药材标准化教育部重点实验室， 四川 成都 611137； 3.中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地， 四川 成都 611137）

目的 制备穿心莲总内酯缓释片， 并考察其体外释放度及机制。 方法 采用亲水性高分子材料 HPMC为骨架材料，制备穿心莲总内酯缓释片，采用正交试验设计，以药物体外释药百分率为指标优选制剂处方。结果 最终优化处方为20%HPMC K15M作为骨架材料， 乳糖和淀粉比例为3 ∶1， 3%PVP作为致孔剂。 结论 所制备缓释片的工艺简单合理，药物体外释放符合零级模型，制得的缓释骨架片具有较理想的缓释作用。

穿心莲总内酯；缓释片；释放度

穿心莲 Andrographis paniculata （ Burm.f.） Ness为爵床 科穿心莲属植物穿心莲的干燥地上部 分， 又名一见喜、 斩蛇剑、印度草等。其主要有效成分为黄酮类和穿心莲内酯（ andrographolide） 、 新 穿 心 莲 内 酯 （ neoandrographolide）、脱水穿心莲内酯 （ dehydroan drographolid） 、 14-去氧穿心莲内酯 （DA） 和 14-脱氧-11，12-二去氢穿心莲内酯 （DDA）等， 内酯类统称穿心莲总内酯［1］。 近年来研究发现穿心莲总内酯在治疗心脑血管疾病方面具有显著作用［2-3］， 选择优良、高效的剂型也变得尤为重要。为减少心血管疾病患者服药次数，增强患者的顺应性，降低血药浓度波动，提高血药浓度的谷峰比值 （T/P）， 提高用药有效性和安全性，缓释制剂成为较好的选择［4］。 而且主要有效成分穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯在小肠中均有较好的吸收，且在不同肠段中的吸收存在的差异性，吸收窗较长，也适于制成缓释给药系统［5］。 因此本实验拟将穿心莲总内酯制成 HPMC亲水凝胶缓释片。

1 材料与仪器

DP-I型单冲压片机 （上海中药机械厂）； ZRS-8G智能溶出试验仪 （天大天发科技有限公司）； UV1100 紫外分光光度仪 （上海天美科技仪器有限公司）； 穿心莲总内酯（含 有 量 90%， 西 安 小 草 植 物 科 技 有 限 公 司， 批 号xc110215）； 穿心莲内酯对照品 （中国药品生物制品检定所， 批号 110797-200307）； 羟丙基甲基纤维素 （ 上海卡乐康包衣技术有限公司）； 可溶性淀粉 （AR） （成都市科龙化工试剂厂， 批号 20101117）； 乳糖 （AR） （成都市科龙化工试剂厂）； 聚乙烯吡咯烷酮 k30 （AR） （成都市科龙化工试剂厂），其他试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 分析方法［6-7］

2.1.1 对照品溶液的配制 精密称取穿心莲内酯对照品10.2 mg至 50 mL量瓶中， 用 60%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀， 配制成质量浓度为 0.204 mg/m L的标准溶液。

2.1.2 供试品溶液的配制 精密称取穿心莲总内酯供试品适量至 50 mL量瓶中， 用 60%乙醇溶解并稀释至刻度， 摇匀，配制成供试品溶液。

2.1.3 辅料溶液的配制 按处方配比， 称取各种辅料适量， 用 60%乙醇溶液配制成不含穿心莲内酯的空白辅料溶液。

2.1.4 测定波长的选择 精密移取穿心莲内酯对照品溶液、 供试品溶液各 2.0 mL至 10 mL量瓶中， 分别加入 2 m L 60%乙醇溶液溶解， 分别依次加入 2%3， 5-二硝基苯甲酸甲醇溶液和 2%KOH溶液各1 mL作为显色剂， 摇匀后放置， 用 60%乙醇溶液定容至刻度。 分别置紫外分光光度计中在 400 ～800 nm间进行扫描， 扫描结果对照品液、供试品液吸收光谱基本相似， 且都在 549 nm处有最大吸收峰， 因此选择 549 nm的波长处测定穿心莲总内酯的吸收度。

2.1.5 空白辅料溶液吸光度的测定 精密移取 2.0 mL空白辅料溶液于 10 mL量瓶中， 加入 2 mL 60%乙醇溶液溶解， 依次加入显色剂， 摇匀后放置， 用 60%乙醇溶液定容至刻度。 于 400 ～800 nm扫描， 结果显示在 549 nm处无吸收。

2.1.6 标准曲线的绘制 分别精密移取穿心莲内酯标准溶液 0.5、 1.0、 2.0、 3.0、 4.0、 5.0 mL于 10 mL量瓶中，分别依次加入显色剂， 摇匀后放置， 用 60%乙醇溶液定容至刻度， 分别于 549 nm处测定吸光度。 以取样标准品溶液质量浓度 （C） 对吸光度 （A） 进行线性回归， 得回归方程A=4.871C+0.017 3 （r=0.999 2）， 结果表明穿心莲内酯在0.010 2 ～0.102 mg/mL质量浓度范围内呈现良好的线性关系。

2.1.7 精密度考察 精密移取穿心莲标准溶液 2.0 mL于10 mL量瓶中。 余下操作同测定波长的选择一致， 于 549 nm处 连 续 6 次 测 定 吸 收 值， 平 均 为 0.173， RSD 为0.68%， 表明该仪器精密度良好。

2.1.8 回收率试验 分别取线性范围内高、 中、 低 3 种质量浓度的穿心莲总内酯溶液按处方比例加入辅料进行回收率的测定，每一质量浓度各做3个样品。计算回收率值为98.04%， RSD为 1.03%， 结果详见表 1。

表 1 穿心莲总内酯回收率结果 （n=3）

2.2 穿心莲骨架缓释片的制备 将穿心莲内酯和辅料分别过80目筛。 按处方称取各组分， 将穿心莲内酯与辅料按等量递加法混合均匀， 加适量的黏合剂制软材， 制颗粒， 60℃干燥 1 h， 2 号筛整粒， 加入颗粒质量的 1%的润滑剂硬脂酸镁， 压片压力控制在 7 ～9 kg/cm即得。 本品每片约含穿心莲内酯主药 80mg， 片重约为 300 mg。

2.3 释放度测定方法 取本穿心莲总内酯骨架缓释片， 按《中国药典》 2010 年版［8］二部释放度测定法， 附录第一法（转篮法） 操作， 释放介质为 1.0%十二烷基硫酸钠溶液（SDS） 800mL， 转速为 100 r/min， 温度为 （37 ±0.5）℃，分别于 2、 4、 6、 8、 10 h 取样 5 m L， 30 s内经 0.45 μm微孔滤膜过滤，同时补充等体积同温介质，定量移取续滤液4 mL于 10 mL具塞试管中， 挥干溶剂， 加入60%乙醇适量溶解， 照分光光度法于 549 nm波长处测定吸光度， 代入标准曲线方程计算浓度，计算累积释放百分率。

2.4 缓释片处方优化

2.4.1 正交设计 在单因素考察的基础上确定了进行正交试验的辅料种类与用量范围，选择影响药物释放的因素，4个因素分别为： A、 HPMC规格； B、 HPMC用量； C、 乳糖与淀粉比例； D、 致孔剂 PVP用量。 拟将本品制成 12 h释放的骨架片。 根据 《中国药典》 2010 年版有关规定确定以下处方释放标准： ①药物释放初期 （1 ～2 h） 累积释放度20% ～30%， 用于考察药物是否有突释。 ②药物释放中期（4 ～6 h） 时累计释放度 40% ～70%， 用于确定释药特性。③药物释放后期 （8 ～12 h） 时累计释放度 80% ～100%，用于考察释药是否基本完全。 参考文献［9-10］， 设计综合评分 Y值为筛选指标， 即 （Q10- ［ （ Q2-30）2+ （ Q6-50）2］1/2）。 ［ （ Q2-30）2+ （ Q6-50）2］1/2反映了 2、 6 h 释放度的偏差， 此偏差越小越佳； 10 h 时应释放 80%以上，Q10应越大越佳， 故以综合评分 Y值与释放度指标共同描述其体外释放情况。对4个因素进行考察，每因素分设3水平， 按 L9（34） 正交试验表设计试验方案， 测定各处方的体外释放度， 并对结果进行分析， 结果见表2～4。

表2 因素水平

表3 正交试验分析及结果

表4 方差分析

2.4.2 方差分析与结论 由直观方差分析结果可见， D因素极差比其他因素极差小得多，故可以D项为误差项进行方差分析。结果表明，B因素差异有极显著性，A和 C因素差异无显著性。 根据极差分 A3＞A2＞A1， C1＞C2＞C3，而综合考察指标Y值越大，药物缓释越接近理想，因此选取三因素 Y值最大的水平， D因素则选取 PVP用量最少的水平， 穿心莲总内酯缓释片的最佳处方， 即药物与20% HPMC K15M混合， 乳糖和淀粉 3 ∶1 加至足量， 过 80 目筛， 用85%乙醇溶液为黏合剂制软材， 湿法制粒， 加1%硬脂酸镁压片，即得。

2.4.3 优选处方的验证 按筛选出来的最佳制剂处方制得3批样品，在各时间点的体外释放度，进行工艺重复性考察， 结果如表5。

表5 3批样品的体外释放度测定结果

试验结果表明：3批骨架缓释片中药物的释放度均较理想， 12 h 的释放量均达90%以上， 且重复性好， 工艺设计合理，可行。

2.5 穿心莲总内酯缓释片释药模型的拟合 将穿心莲总内酯的释放数据， 分别以下列方程拟合。 零级方程 Q=kt+ b； 一级方程 ln （100-Q） =kt+b； Higuchi方程 Q=k t1/2；Peppas方程 Q=ktn。 其中 Q为累计释放分率， t为时间，结果见表6。

表6 穿心莲总内酯释药机制的模型

2.6 释放机理考察 药物从亲水凝胶骨架片中心释放一般通过两种机制： 药物扩散和凝胶骨架溶蚀［11］。 对于圆柱型制剂 （如片剂） 而言， 当 0.45 ＜n ＜0.89 时， 表现释放规律是扩散和骨架溶蚀综合作用的结果，为不规则转运；当n ＜0.45 时， 为 Fick 扩散； 当 n ＞0.89 时 为 溶 蚀 机 制［12］。用 peppas方程来考察穿心莲总内酯缓释片的释放， 首先将方程转化为下列形式： ln Q∞=ln K+n ln t， 将 3 批缓释片体外释放度结果数据代入公式计算， 求得释放指数值 （n）为 0.67 （r=0.996 5）， 表现为扩散和骨架溶蚀综合作用。

3 讨论

本研究以HPMC为骨架材料， 以乳糖、 淀粉为填充剂，PVP为致孔剂， 制备了穿心莲总内酯骨架型缓释片， 2 h 释放约 30%， 6 h 释放约 60%， 10 h 释放约 80%， 12 h 释放90%以上， 结果证明其缓释药效果理想， 符合设计要求。

本研究采用的模型药物穿心莲总内酯为水难溶性药物，因此加入表面活性 1.0%十二烷基硫酸钠以增大其溶解度，以满足漏槽条件［13］。

本研究采用比色法测定穿心莲总内酯的吸光度，参考文献［14］， 表明穿心莲总内酯在 15 ～25 min 之内稳定， 因此选择在 15 min 测定穿心莲总内酯的吸光度。

药物释放动力学方程符合零级方程和 Peppas方程， 应用 Peppas方程作为拟合方程， 计算 n 值等于 0.67， 说明药物释放更倾向于骨架的溶蚀。这与缓释片在溶出过程中的实际情况一致。

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R944

： B

： 1001-1528（2014）03-0634-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.044

2013-03-14

成都中医药大学科技发展基金 （ZRMS201240）

李小芳 （1964—） ， 女， 医学博 士， 教授， 从 事 中 药新剂 型 及 中药新 技 术 研究。 Tel： 13808195110， E-mail： lixiaofang918 @163.com