吴氏消瘤散对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

高 颖， 吴 眉， 唐苾芯， 吴昆仑*， 范春香， 徐佩文， 吴伟泳， 杨 翎， 周小龙

（1.上海浦东新区公利医院， 上海 200135； 2.上海中医药大学， 上海 201203； 3.上海药谷药业有限公司， 上海 201203）

吴氏消瘤散对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用

高 颖1， 吴 眉2， 唐苾芯1， 吴昆仑1*， 范春香1， 徐佩文1， 吴伟泳3， 杨 翎3， 周小龙3

（1.上海浦东新区公利医院， 上海 200135； 2.上海中医药大学， 上海 201203； 3.上海药谷药业有限公司， 上海 201203）

目的 评价吴氏消瘤散 （太子参、白术、炙鳖甲、 山慈菇、 漏芦、 土鳖虫、 急性子、 炙龟甲、 薏苡仁、 枳实等）的抗肿瘤活性。 方法 建立 S180 肉瘤荷瘤小鼠模型、 B16 黑色素瘤荷瘤小鼠模型、 人肺腺癌 A549 荷瘤裸鼠模型， 并测定肿瘤质量和肿瘤抑制率。 结果 吴氏消瘤散低、 中、 高剂量对鼠 S180 肉瘤细胞及人肺腺癌 A549 细胞， 中、 高剂量对小鼠 B16 黑色素瘤细胞的生长有一定抑制作用， 抑瘤率分别为 S180 肉瘤低剂量组为 29.07% ～39.74%、 中剂量组为33.99% ～41.01%、 高剂量组为43.21% ～51.56%； 人肺腺癌 A549 低剂量组为 25.17% ～33.69%、 中剂量组为 31.04%～38.84%、 高剂量组为 34.55% ～44.66%； B16 黑色素瘤中剂量组为 26.45% ～35.66%、 高剂量组为 39.59% ～67.21%。 结论 实验表明， 吴氏消瘤散具有一定的抗肿瘤作用。

吴氏消瘤散； S180 肉瘤； B16 黑色素瘤； 人肺腺癌 A549； 肿瘤抑制

吴正翔教授系上海市名老中医、曙光医院中医血液科专家，吴氏消瘤散是其根据多年临床经验总结而成。本方由太子参、黄毛耳草、海芋、石见穿、石上柏、白术、鳖甲、山慈菇、墓头回，漏芦、土鳖虫、急性子、龟甲、薏苡仁、枳实等十五味中药组成，以健脾益气、消癥散结为原则，选用太子参、白术等健脾益气药物，结合现代药理确认具有抗肿瘤效果的中药，在吴老长达几十年的临床实践中，发现其对胃癌、肝癌、肠癌等多系统恶性肿瘤具有较好疗效。因此，本课题利用小鼠移植瘤模型，对其抗肿瘤活性进行观察。

1 实验材料

1.1 动物及瘤株 SPF级 ICR 6 周龄小鼠， 体质量 18 ～22 g， 雌雄不限 （同一批试验中的小鼠性别相同）。 SPF级 C57BL/6 6 周龄小鼠， 体质量 18 ～22 g， 雌雄不限 （同一批试验中的小鼠性别相同）。SPF级 6 周龄 BALB/C裸鼠， 体质量 18 ～22 g。 以上动物均由上海斯莱克实验动物责任有限公司提供， 动物合格证号 SCXK （沪） 2007-0005。 S180肉瘤、 B16 黑色素瘤、人肺癌 A549 瘤株由上海医药工业研究院药理评价研究中心传代维持。

1.2 药物及试剂 吴氏消瘤散 （采用制剂前浸膏），由上海药谷药业股份有限公司提供，批号Z20110627。 阳性对照药物环磷酰胺购自江苏恒瑞医药股份有限公司， 批号 11031921。 DMEM完全培养基， 内含 10%新生牛血清 （GIBCO BRL公司）。

1.3 仪器 CO2培养箱、细胞收集器、 电子天平等。

2 实验方法

2.1 吴氏消瘤散对 S180 肉瘤生长的抑制作用

2.1.1 荷瘤小鼠模型的建立 参照文献［1］方法，用无菌空针抽取适量腹腔积液，用灭菌的 0.9%氯化钠溶液按 1 ∶10 稀释， 0.5 h 内 ICR小鼠每只右侧腋窝皮下接种肿瘤细胞悬液 0.2 mL。

2.1.2 分组及给药 小鼠于接种次日随机分为溶剂 （0.5%CMCNa） 对照组 （n=20）、 阳性 （环磷酰胺） 对照组 （n=10） 及吴氏消瘤散低、 中、高剂量组 （每组 n=10）。 环磷酰胺组 0.03 g/kg隔天一次腹腔注射、共7次；吴氏消瘤散组依次给予12.5、 25、50 g生药/kg每日 1 次静脉注射、 连续14 d。

2.1.3 瘤质量及抑瘤率 末次给药 24 h 后将 ICR小鼠颈椎脱臼处死，迅速解剖取出瘤块称取质量。以上实验重复两次。

按下述公式计算肿瘤抑制率：

肿瘤抑制率%=［（对照组平均瘤质量 -给药组平均瘤质量） /对照组平均瘤质量］ ×100%

2.2 吴氏消瘤散对 B16 黑色素瘤生长的抑制作用

2.2.1 荷瘤小鼠模型的建立 取经液氮冻存的小鼠 B16 黑色素瘤细胞株， 复苏后在 37 ℃、 5%CO2条件下进行传代培养，将对数生长期的细胞用生理盐水制成密度 2.5 ×105个/mL的细胞悬液， 按0.2 m L/鼠的体积， 经尾静脉注射。

2.2.2 分组及给药 C57BL/6 小鼠于接种次日随机分为溶剂 （0.5%CMCNa）对照组 （n=20）、阳性 （环磷酰胺） 对照组 （n=10） 及吴氏消瘤散低、 中、 高剂量组 （每组 n=10）。 环磷酰胺组0.03 g/kg隔天一次腹腔注射、 共 7 次； 吴氏消瘤散组依次给予 12.5、25、 50 g生药/kg每日 1 次静脉注射、 连续 14 d。

2.2.3 瘤质量及抑瘤率 各组动物于 3 周后处死，称取瘤块质量，并计数肺转移的克隆数。以上实验重复两次。

按下述公式计算肿瘤抑制率：

肿瘤抑制率%=［（对照组平均瘤质量 -给药组平均瘤质量） /对照组平均瘤质量］ ×100%

2.3 吴氏消瘤散对人肺腺癌 A549 生长的抑制作用

2.3.1 荷瘤裸鼠模型的建立 取液氮冻存的人肺腺癌 A549 细胞株， 复苏后于 37 ℃、 5%CO2条件下传代培养，将对数生长期的细胞用生理盐水制备成密度为 1 ×107个/mL的细胞悬液， 接种于裸鼠右腋皮下。无菌条件下取裸鼠体内生长旺盛的第2代异种移植模型的肿瘤组织， 切割成1～2 mm3大小，每只裸鼠右腋皮下接种一块。至移植瘤直径约5 mm时随机分组，按实验设计方案给药。

2.3.2 分组及给药 动物随机分为溶剂 （0.5% CMCNa） 对照组 （n=16）、 阳性 （环磷酰胺） 对照组 （n=8） 及吴氏消瘤散低、 中、 高剂量组（每组 n=8）。 环磷酰胺组0.03 g/kg隔天一次腹腔注射、 共 7 次； 吴氏消瘤散组依次给予 12.5、 25、50 g生药/kg每日 1 次静脉注射、 连续 14 d。

2.3.3 肿瘤抑制率及相对肿瘤增殖率 用游标卡尺测量各裸鼠肿瘤的短径 （a）与长径 （b）， 按公式 （a2×b） /2计算肿瘤体积， 并以此计算相对肿瘤体积 （VRT）： VRT=Vt/V0， V0为随机分组时肿瘤体积， Vt为实验结束处死动物时肿瘤体积。 三周后实验结束时剖取瘤块称定质量。以上实验重复两次。

按下述公式计算相对肿瘤增殖率及肿瘤抑制率：

相对 肿 瘤 增 殖 率%=（ 给 药 组 VRT/对 照 组VRT） ×100%

肿瘤抑制率%=［（对照组平均瘤质量 -给药组平均瘤质量） /对照组平均瘤质量］ ×100%

3 数据统计

运用 SPSS 17.0 统计软件进行数据处理， 所得数据用表示， 各组数据做方差齐性检验和正态性检验，满足条件者用方差分析做多组间比较，P＜0.05 为具有统计学差异。

4 结果

4.1 吴氏消瘤散对 S180 肉瘤生长的抑制作用 吴氏消瘤散低、 中、 高剂量对 S180 肉瘤均具有抑制作用，荷瘤动物瘤质量与溶剂对照组相比，具有极显著性差异 （P＜0.01）。详见表1。

表 1 吴氏消瘤散对 S180 肉瘤生长的抑制作用 （）Tab.1 Inhibition effect of W ushi Xiaoliu Powder on S180 sarcoma （）

表 1 吴氏消瘤散对 S180 肉瘤生长的抑制作用 （）Tab.1 Inhibition effect of W ushi Xiaoliu Powder on S180 sarcoma （）

注： 与溶剂对照组比较，**P＜0.01

组别 动物数/只 动物体质量/g始/终 始 终 瘤质量/g 抑瘤率/%溶剂对照组 20/20 20.5 27.4 2.94 ±0.49—阳性对照组 10/10 20.7 24.9 0.47 ±0.12** 84.01低剂量组 10/10 20.4 27.7 1.86 ±0.43** 36.73中剂量组 10/10 20.9 27.3 1.83 ±0.34** 37.76高剂量组 10/10 21.3 26.4 1.50 ±0.34** 48.98溶剂对照组 20/20 20.0 27.3 2.98 ±0.34 —阳性对照组 10/10 20.2 26.2 0.93 ±0.19** 68.77低剂量组 10/10 20.0 29.5 2.12 ±0.26** 29.07中剂量组 10/10 20.0 29.1 1.97 ±0.16** 33.99高剂量组 10/10 20.2 28.1 1.29 ±0.22** 43.21溶剂对照组 20/20 19.7 27.9 3.00 ±0.33 —阳性对照组 10/10 19.9 23.3 0.40 ±0.13** 86.66低剂量组 10/10 20.0 26.1 1.81 ±0.37** 39.74中剂量组 10/10 20.4 26.4 1.77 ±0.37** 41.01高剂量组 10/10 20.0 25.4 1.46 ±0.37**51.56

4.2 吴氏消瘤散对 B16 黑色素瘤生长的抑制作用吴氏消瘤散中、 高剂量对于小鼠 B16 黑色素瘤肺转移具有明显抑制作用 （P＜0.05 或 P＜0.01），抑瘤 率 分 别 在 26.45% ～35.66%、39.59% ～67.21%之间。详见表 2。

4.3 吴氏消瘤散对人肺腺癌 A549 生长的抑制作用 吴氏消瘤散低、中、高剂量均可抑制人肺腺癌A549 荷瘤裸鼠的相对肿瘤增殖率， 不同剂量的抑瘤 率 分 别 在 25.17% ～ 33.69%、31.04% ～38.84%、 34.55% ～44.66%之间。 详见表 3。

5 讨论

现代医学认为，肿瘤是细胞病理极不均一的一类疾病，不同部位甚至同一部位的肿瘤，其生物学行为千差万别。一部分肿瘤在发病初期即已发生广泛转移，治疗颇为棘手。目前主张对其应采取综合治疗、个体化治疗，以提高治愈率、生存率，改善生存质量。中医药是放化疗、生物治疗等综合疗法中的重要一环，具有诱导肿瘤细胞分化及凋亡、抑制肿瘤细胞生长及转移、清除自由基、逆转肿瘤多药耐药、减轻化疗药物毒副作用及产生类干扰素等多方面的作用［2-4］。

恶性肿瘤属于中医学 “积聚”、 “岩”、 “瘤”等范畴。 中医学对本病的认识很早， 如 《灵枢·九针》中曰： “时者四时八风客于经络之中， 为痼病者也”， 《灵枢·五变》曰：“余闻百疾之始期也，必生于风雨寒暑，循毫毛而入腠理？或为留痹，或为积聚”，认为外感六淫之邪为恶性肿瘤发生的重要原因。在认识到六淫外邪致病的同时，更加强调人体正气的决定作用， 如 《灵枢·百病始生》说：“壮人无积， 虚则有之”， 又 《医宗必读》 提出：“积之成也， 正气不足， 而后邪气踞之”， 《外证医寨》 更明确指出 “正气虚则成岩”。 在五脏之中，历代医家认为脾胃为后天之本，又为气血生化之源，脾气亏虚每致五脏虚损而百病丛生。如清代陈士铎在 《辨证奇闻录》 中指出： “脾位居中焦而运化精微，以灌注于四脏，是四脏之所仰望者，全在脾胃之气。倘脾胃一伤，则四脏无所取资，脾胃病而四脏俱病矣”。 脾虚则不能推动血行而致血瘀；不能运化水湿而湿聚痰凝， “津液凝涩渗著不去，而成积矣”。因此，脾虚气弱、气滞血瘀、 痰凝湿聚等确为肿瘤形成的基本病机［5］。 近些年对肿瘤发病机理的探讨日趋深入， 目前认为， “癌毒” 是恶性肿瘤的特异性病因，同时其作为病理产物可进一步加重对机 体的损 伤［6-8］。因 此， 对其治 疗主张采取辨病与辨证相结合的治疗模式，注重解决“癌毒” 这一重要因素。

表 2 吴氏消瘤散对小鼠 B16 黑色素瘤生长的抑制作用 （）Tab.2 Inhibition effect of W ushi Xiaoliu Powder on B16 melanom a （）

表 2 吴氏消瘤散对小鼠 B16 黑色素瘤生长的抑制作用 （）Tab.2 Inhibition effect of W ushi Xiaoliu Powder on B16 melanom a （）

注： 与溶剂对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别 动物数/只 动物体质量始/终/g始终肺克隆数 抑瘤率/%溶剂对照组 20/20 20.1 ±1.27 23.4 ±3.74 24.50 ±10.13—阳性对照组 10/10 20.2 ±1.11 21.3 ±4.08 4.9 ±2.69** 80.00低剂量组 10/10 19.8 ±1.21 23.4 ±3.89 17.4 ±2.63** 28.98中剂量组 10/10 20.1 ±1.26 24.2 ±2.57 16.7 ±3.66** 31.84高剂量组 10/10 20.1 ±1.14 24.3 ±4.05 14.80 ±2.49** 39.59溶剂对照组 20/20 20.0 ±1.23 24.9 ±4.32 24.40 ±10.03 —阳性对照组 10/10 20.3 ±1.25 21.3 ±3.46 1.6 ±1.26** 93.44低剂量组 10/10 20.2 ±1.15 21.4 ±3.16 16.5 ±5.99* 32.38中剂量组 10/10 20.1 ±1.28 24.3 ±2.75 15.7 ±4.00** 35.66高剂量组 10/10 20.3 ±1.37 25.1 ±1.59 8 ±4.81** 67.21溶剂对照组 20/20 20.3 ±1.22 23.7 ±4.77 23.25 ±10.11 —阳性对照组 10/10 20.2 ±1.19 23.5 ±4.83 2.2 ±1.75** 90.54低剂量组 10/10 19.5 ±0.94 24.4 ±4.70 18.2 ±6.30 21.72中剂量组 10/10 20.4 ±1.26 25.5 ±3.21 17.1 ±3.93* 26.45高剂量组 10/10 20.3 ±1.10 26.2 ±2.58 12.3 ±3.71**47.10

表 3 吴氏消瘤散对人肺腺癌 A549 生长的抑制作用 （）Tab.3 Inhibition effect of Wushi Xiaoliu Powder on human lung adenocarcinoma A549 （）

表 3 吴氏消瘤散对人肺腺癌 A549 生长的抑制作用 （）Tab.3 Inhibition effect of Wushi Xiaoliu Powder on human lung adenocarcinoma A549 （）

注： 与溶剂对照组比较，**P＜0.01

组别 动物数/只始 /终 V0/cm3 Vt/cm3 VRT（Vt/V0） 增殖率/% 瘤质量/g 抑瘤率/相对肿瘤%溶剂对照组 16/16 0.106 ±0.013 1.378 ±0.416 13.27 — 1.157 ±0.29—阳性对照组 8/8 0.104 ±0.011 0.209 ±0.046** 2.12 15.95 0.199 ±0.04** 82.79低剂量组 8/8 0.104 ±0.010 0.826 ±0.267** 8.09 60.95 0.866 ±0.21** 25.17中剂量组 8/8 0.098 ±0.007 0.742 ±0.227** 7.68 57.88 0.798 ±0.24** 31.04高剂量组 8/8 0.103 ±0.009 0.770 ±0.178** 7.59 57.21 0.758 ±0.19** 34.55溶剂对照组 16/16 0.107 ±0.030 1.382 ±0.392 13.13 — 1.394 ±0.34 —阳性对照组 8/8 0.108 ±0.020 0.258 ±0.062** 2.52 19.20 0.252 ±0.10** 81.90低剂量组 8/8 0.110 ±0.018 0.942 ±0.268** 8.66 65.93 1.022 ±0.26** 26.73中剂量组 8/8 0.104 ±0.017 0.858 ±0.189** 8.51 64.79 0.853 ±0.16** 38.84高剂量组 8/8 0.105 ±0.022 0.798 ±0.226** 8.03 61.16 0.772 ±0.16** 44.66溶剂对照组 16/16 0.110 ±0.037 1.335 ±0.341 12.82 — 1.339 ±0.34 —阳性对照组 8/8 0.104 ±0.013 0.218 ±0.053** 2.11 16.47 0.209 ±0.04** 84.40低剂量组 8/8 0.112 ±0.019 0.909 ±0.304** 8.27 64.48 0.888 ±0.21** 33.69中剂量组 8/8 0.102 ±0.015 0.834 ±0.225** 8.17 63.69 0.875 ±0.13** 34.69高剂量组 8/8 0.102 ±0.021 0.720 ±0.147** 7.53 58.75 0.816 ±0.19**39.10

吴氏消瘤散以补气健脾、活血化瘀消痰组方，同时加入山慈菇、石见穿等抗癌解毒药物。药理研究显示，太子参、白术等补气健脾之品对免疫系统具有广泛调节作用，可增强网状内皮系统吞噬功能、 促进特异性抗体形成、 调节 TNF-α、 IL-6 等分泌； 太子参［9］对人胃癌 MGC80-3、 肝癌 HepG2 和结肠癌RKO等多种肿瘤细胞增殖有抑制作用；白术［10］、 石见穿［11］可促进肿瘤细胞坏死、 凋亡， 白术挥发油还可通过抑制细胞外基质降解而抑制肿瘤转移［12］； 山 慈菇［13］对 SMMC-7721 细胞黏 附和侵袭有明显抑制作用。因此，该方充分体现了扶正是基本、抗癌是关键的治疗思想，做到了在宏观上符合传统中医药理论，在微观上符合现代医学理论和中药药理学。本研究也证实，该方剂低、中、高剂量对 S180 肉瘤及人肺腺癌 A549， 中、高剂量对B16 黑色素瘤等多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用。

［ 1 ］ 张国蓉， 尤玲玲， 郎 婧， 等.猪软骨多糖对 S180 荷瘤小鼠 免 疫 功 能 的 影 响 ［ J］.现 代 免 疫 学， 2009， 29（3）： 246.

［ 2 ］ 方 媛， 李 雁.中医综合性防治恶性肿瘤研究［J］.辽宁中医药大学学报， 2012， 14（5）： 80-82.

［3］ 秦 健，李炜弘，曾跃琴，等.中医药在恶性肿瘤治疗中的优势［J］.临床合理用药， 2012， 5（1）： 88.

［ 4 ］ 蒋士卿， 李创业， 康 斐.论脾与恶性肿瘤的关系［J］ 中医学报， 2011， 26（6）： 643-645.

［ 5 ］ 蔡 琨， 冯 泳， 何前松， 等.小半夏加茯苓汤抗 S180肉瘤及免疫调节的研究［J］.贵阳中医学院学报， 2011，33（4）： 4-7.

［ 6 ］ 霍介格， 顾 勤.周仲瑛治疗肿瘤的临证思路探析［J］.上海中医药杂志， 2007， 41（1）： 5-6.

［ 7 ］ 凌昌全.癌毒是恶性肿瘤之根本［J］.中西医结合学报，2008， 6（2）： 111-113.

［ 8 ］ 袁雪莲， 王振家.张代钊教授治疗肿瘤学术思想介绍［J］.新中医， 2008， 40（1）： 17.

［9］ 蔡巧燕，林 珊，肖桂清，等.太子参内生真菌体外抗肿瘤、 抗氧化活性研究［ J］.福建中医药大学学报， 2011，21（6）： 41-46.

［10 ］ Chen H， Chen J， Cu I D， et al.Effects of a Shuangling Fuzheng anticancer preparation on the proliferation of SGC-7901 cells and immune function in a cyclophosphamide-treatedmurine model［ J］.World J Gastroenterol， 2007， 13（48）：6575-6580.

［11］ 郑海音， 武一曼， 林信富， 等.流式细胞术检测石见穿多糖诱导的肝癌细胞凋亡率［J］.福建中医学院学报， 2009，19（3）： 20-22.

［12］ 王郁金， 苏衍进， 郑广娟.白术挥发油对小鼠 H22 肝癌淋巴道转移模型的影响 ［ J］.现代中医药， 2009， 29 （4 ）：74-75.

［13］ 曾 迪， 李晓祥， 边永钎， 等.山慈菇含药血清对 SMMC-7721 细胞侵袭、 黏附能力的影响［J］.第四军医大学学报，2009， 29（4）： 74-75.

Antitumor effect of Wushi Xiaoliu Powder on tumor bearing m ice

GAO Ying1， WU Mei2， TANG Bi-xin1， WU Kun-lun1*， FAN Chun-xiang1， XU Pei-wen1，WUWei-yong3， YANG Ling3， ZHOU Xiao-long3
（1.Gongli Hospital of Pudong District， Shanghai200135， China； 2.Shanghai University of TCM， Shanghai 201203， China； 3.Shanghai Medicine Pharmaceutical Company Limited， Shanghai201203， China）

AIM To investigate the antitumor effect ofWushi Xiaoliu Powder（ Pseudostellariae Radix， Atractylodismacrocephalae Rhizoma， Trionycis Carapax， Cremastrae Pseudobulbus， Rhapontici Radix， Impatientis Semen， Testudinis Carapacis et Plastr， Coicis Semen， Aurantii Fructus immaturus， etc.） on tumor bearing mice. METHODS The antitumor effect was evaluated with S180 sarcoma bearing mice，B16 melanoma bearing mice and human lung adenocarcinoma A549 bearing nudemice bymeasuring the tumorweightand calculating the tumor inhibition rate.RESULTS Wushi Xiaoliu Powder atmoderate or high dose inhibited the tumor cell growth in all threemodels.The tumor inhibition rates of S180 sarcoma bearing mice were 29.07% ～39.74%at low dose，33.99% ～41.01%atmoderate dose and 43.21% ～51.56%at high dose.The inhibition rates of human lung adenocarcinoma A549 bearing nude mice were 25.17% ～33.69%at low dose， 31.04% ～38.84%at moderate dose， and 34.55% ～44.66%at high dose.The inhibition rates of B16 melanoma bearingmice were 26.45% ～35.66%atmoderate dose and 39.59% ～67.21%athigh dose.CONCLUSION Wushi Xiaoliu Powder has an-titumor effect.

Wushi Xiaoliu Powder； S180 sarcoma； B16 melanoma； human lung adenocarcinoma A549； antitumor effect

R285.5

： A

： 1001-1528（2014）03-0446-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.002

2013-05-16

上海市浦东新区科技发展基金资助项目 （PKJ2012-Y52）

高 颖 （ 1971 —） ， 女， 博 士， 主 治 医 师， 助 理 研 究 员， 研 究 方 向： 中 医 内 科 疾 病 的 诊 断 和 治 疗。 E-mail： gaoying711517789800@sina.com

*通信作者： 吴昆仑 （1954—） ， 男， 硕士， 主任医师， 研究方向： 中医内科疾病的诊断和治疗。 E-mail： wkl418@163.com