UMOD基因启动子区单核苷酸多态性与CKD患者发病年龄的关系

白亚玲，徐金升，张文博，张胜雷，张俊霞，崔立文

（河北医科大学第四医院，石家庄 050011）

据统计，目前我国慢性肾脏病（CKD）患病率已达10.8%［1］。随着年龄的增长，CKD 的发病率、终末期肾衰竭发生率及患者病死率均增加，发病年龄是影响 CKD 预后的重要因素［2～4］。研究发现，UMOD基因启动子区单核苷酸多态性与CKD的发病相关［5，6］;但 UMOD 基因启动子区的多态性与CKD患者发病年龄是否存在相关性尚不清楚。我们对2002～2008年确诊的89例CKD患者静脉血UMOD基因启动子区的多态性进行了检测，现分析结果，探讨其与CKD发病年龄的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2002年8月～2008年8月我院收治的CKD患者89例作为病例组，男46例、女43例，年龄（47.9±15.5）岁。均符合 2002年 KDOQI指南CKD诊断标准:肾脏损伤指标（如蛋白尿、血尿或解剖学异常）或肾小球滤过率（GFR）＜60 mL/（min·1.73m2），任一指标异常 ＞3个月。病因包括肾小球肾炎35例、糖尿病肾病18例、高血压肾损害5例、梗阻性肾病14例、其他17例。以患者首次诊断为CKD时的年龄为发病年龄。选择与病例组年龄、性别相匹配的体检健康者104例作为对照组，其中男62例、女42例，年龄（49.8±13.6）岁。两组年龄、性别比例差异均无统计学意义。所有受试者经河北医科大学第四医院伦理委员会批准并签订知情同意书。

1.2 UMOD基因启动子区多态性检测 采用PCR法。病例组于首次住院清晨、对照组于体检时空腹采血，取静脉血2 mL，应用全血DNA萃取试剂盒迅速提取DNA，于-80℃冰箱保存备用。根据Ensembl网站提供的 UMOD基因序列（Gene ID:ENSG00000169344）用在线Primer 3软件设计引物，上游引物:5＇-TTTCTCCATCCTGTCCCACT-3＇，下游引物:5＇-ATTCCAACCCAAACTCCC-3＇。用 PCR 仪 扩增长481 bp的UMOD基因组DNA片段。PCR反应体系为25 μL，包含DNA 125 ng，上下游引物各10 pmol，Master Mix 12.5 μL，DEPC 水7.5 μL。反应程序:95℃预变性2 min，95℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸1 min，38个循环;最后72℃延伸5 min。将PCR反应产物送至上海生工生物工程技术服务有限公司，采用ABI PRISM 3100 DNA序列分析仪对PCR扩增产物进行测序，采用DNAman软件分析两组UMOD基因序列，与UMOD标准序列进行对比。比较两组UMOD基因多态位点的差异，寻找出与CKD发病相关的多态位点。

1.3 CKD患者UMOD基因启动子区多态性及临床特征与发病年龄的关系 根据基因多态性测序结果，将病例组分为携带及不携带所测多态位点者，分析所测多态位点与CKD患者发病年龄的关系;收集患者就诊时的性别、吸烟史、体重指数（BMI）、平均动脉压等临床资料，分析性别、吸烟史、BMI、平均动脉压与发病年龄的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件行统计学处理。UMOD基因单核苷酸多态位点与发病年龄关系的分析采用Kaplan-Meier方法，组间比较采用Log-rank检验，采用COX比例风险回归模型进行多因素分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 UMOD启动子区基因多态性 病例组和对照组共发现突变位点23个，其中3个位点出现频率大于5%，分别为-1945、-1660、-1617（rs13333226）。病例组、对照组-1 617（rs13333226）G等位基因的频率分别为15.7%和6.7%，病例组高于对照组（P＜0.05）;两组其余位点的基因多态性差异无统计学意义。

2.2 CKD患者UMOD基因多态性及临床特征与发病年龄的关系 病例组携带rs13333226A及携带rs13333228G者发病年龄分别为（45.92±15.14）、（58.85±13.78）岁，前者发病年龄小于后者（P＜0.01）。单因素分析结果显示，病例组BMI≥22者发病年龄＜45岁者的比例高于BMI＜22者，吸烟者发病年龄＜45岁者的比例高于非吸烟者（P均＜0.05），患者性别及平均动脉压与发病年龄无相关性。将单因素分析有统计学意义的因素纳入多因素COX比例风险回归模型，结果显示 UMOD基因rs13333226的多态性是CKD患者发病年龄的独立影响因素;OR=0.494，95%CI为 0.268 ～0.913，P＜0.05。

3 讨论

CKD起病隐袭，较难早期发现，呈持续性进展，最终多导致终末期肾衰竭。研究发现，随年龄的增长，CKD的发病率增加，20～39岁CKD的发病率为4%，≥70岁人群中CKD的发病率高达47%［7］;随年龄的增长，CKD的全因死亡率及心血管死亡风险增加［5，6］。因此CKD发病年龄是判断CKD预后的重要因素;研究CKD发病年龄的影响因素有助于对患者发病时间的判断以及病程、发展和预后的评估。

UMOD基因位于人体16号染色体20 344 374～20 367 623 bp之间，其编码的蛋白为尿调节蛋白。尿调节蛋白特异性表达于肾脏，是生理状况下人体尿中最多的一种蛋白，正常成人分泌量为20～200 mg/24 h。近年研究发现，UMOD基因启动子区的变异与 GFR、血压、血清中尿酸水平有密切关系［4～6，8］。欧洲全基因组（GWAS）相关研究表明，UMOD基因启动子区的多态性与CKD发病风险及GFR有关［5，6］。 本研究发现，病例组-1617（rs13333226）G等位基因的频率高于对照组，提示CKD患者rs13333226 G等位基因的频率增高，rs13333226多态性在CKD发病过程中可能发挥一定作用。

近年研究发现，随年龄的增长，CKD发病率增加［7］。CKD发病年龄的影响因素除高血压、糖尿病、吸烟等外，遗传因素也发挥重要作用。本研究发现，携带rs13333226G的CKD患者发病年龄大于携带rs13333226A者，BMI≥22的CKD患者发病年龄＜45岁的比例高于BMI＜22者，吸烟患者发病年龄＜45岁的比例高于非吸烟者，多因素COX比例风险回归模型分析显示，rs13333226的多态性是CKD患者发病年龄的独立影响因素，携带rs13333226GCKD多发生较晚。Daniel等［9］也发现UMOD启动子区多态性对高龄患者血肌酐的影响更明显。尿调节蛋白是肾脏特异性蛋白，在肾脏组织中可激活中性粒细胞、单核巨噬细胞和成纤维细胞引起炎症反应，促进CKD的发生及进展［10］。近来研究发现携带rs13333226G等位基因者尿中尿调节蛋白的含量降低［6］，考虑 UMOD基因启动子区rs13333226多态性影响CKD发病年龄的机制可能是调节尿调节蛋白的合成。

综上所述，UMOD基因启动子区rs13333226的多态性与CKD发病年龄相关，携带rs13333226A的CKD患者发病年龄小于携带 rs13333226G者。UMOD基因启动子区的多态性可作为CKD发病年龄的预测指标。但本研究受样本例数及受检者种族、地区的限制，UMOD基因启动子区的多态性能否作为CKD患者发病年龄的独立预测因子，还有待大样本的研究进一步验证。

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