OLYMPUS PK7300全自动血型分析仪使用体会及探讨

石绍川，张巧琳，田耘博

(重庆市血液中心检验科，重庆400015)

·仪器使用与排障·

OLYMPUS PK7300全自动血型分析仪使用体会及探讨

石绍川，张巧琳，田耘博

(重庆市血液中心检验科，重庆400015)

∶血型分析仪；经验；探讨

OLYMPUS-PK7300全自动血型分析仪集自动加样、孵育、判读、数据保存及全过程监控为一体，近年来我国的一些血液中心和中心血站陆续引进了该设备。我中心检验科自2011年初开始将OLYMPUS-PK7300全自动血型分析仪用于ABO和Rh(D)血型的常规筛查检测，使用至今已三年多时间，现将我们使用过程中累积的一些经验以及遇到的一些问题予以简要介绍，以期与同行交流共享。

1 标本准备

1.1 标本类别PK7300要求使用抗凝全血。我们使用的是EDTA抗凝标本，与酶免和ALT检测共用一管标本，使用顺序为：酶免→血型→ALT。

1.2 标本采集标本采集阶段主要应注意有效抗凝和避免脂血。除采血管生产厂家、是否充分颠倒混匀等因素可能影响抗凝效果外，一个比较容易忽略的方面就是采血管的储存条件，尤其是在夏天应将采血管置于阴凉库储存并确保阴凉库的温湿度条件，避免将采血管放在采血车上过夜。避免脂血最行之有效的方法就是加强对献血者的宣传，向公众普及与脂血相关的知识，可以简要地按照如下几个方面进行宣传：避免空腹献血，最好是餐后2h再献血为好，可建议献血者在抽血前喝杯糖水；通常在饭后，特别是丰盛的餐后30min，血中乳糜微粒浓度增加，一般会在1～2h后恢复正常，但若脂类代谢异常或甘油三酯特别高者，乳糜血之现象就持续较久，可能持续3～4h以上；捐血前数餐食物宜清淡，若进食高脂肪食物后，最好在饭后约4h后再捐血；患有高血脂症者不宜献血并应赴医院检查或治疗。

1.3 标本离心在实验室环境温湿度符合要求的条件下，常温离心即可。如果离心不足，容易导致取样针外表面携带血球，造成稀释细胞样本的浓度过高，正定型无效；而适当延长离心时间可以较为有效地避免离心不足的问题，同时也极少发现因适当延长离心时间而导致的对血型或酶免检测的不利影响；但由于真空采血管能承受的离心力有一定范围限制，因此不宜将转速调得过高，否则可能导致试管变形或破裂。PK7300说明书建议的离心条件为转子半径15cm,转速3000r/min,离心时间5 min；在实际应用中，很多实验室对离心条件进行了调整，适当延长离心时间是较常见的调整方式之一，我们设置的离心条件为转子半径17.5cm,转速2500r/min，离心时间10min。

2 检测过程及仪器操作

2.1 仪器开机及初始化OLYMPUS-PK7300可设置为手动或自动开机，开机后即自动进行自检及初始化，初始化过程约需25min，初始化完成后仪器转换到STANDBY状态。

2.2 试验参数设置常规ABO和RhD血型筛查试验的基本参数设置包括名称设置、试剂参数设置、判定逻辑设置、检测盘设置等。与凝集反应过程相关的参数有细胞样本的稀释浓度及稀释细胞样本的加样量、血浆样本的稀释比例及稀释血浆样本的加样量、各试剂加样量、反应温度、反应时间等；SPC、P/C、LIA的阈值范围是三个重要的凝集判定参数。通常情况下，工程师在仪器的安装调试阶段已将上述参数设置好；由于检测项目相对固定，因此一般不需要操作人员对试验参数进行设置或修改；如对试验参数进行修改或微调，务必十分谨慎，并做大量的比对和确认工作[1]。PK7300除可用于常规ABO和RhD血型检测外，另一个较为重要的运用就是利用献血者血浆与试剂O细胞的反应进行献血者不规则抗体的初筛[2]；此外，PK7300还可用于某些传染病抗体检测及红细胞比容测定等，但目前在我国较少被运用于这些方面。

2.3 工作试剂配制厂家建议配制标准血清工作试剂的稀释倍数为1∶40，配制反定型用红细胞工作试剂的浓度为1.7%。在实践中，有的实验室将配制标准血清工作试剂的稀释倍数进行了适当调整，如调整为1∶20；使用该仪器三年多来，我们一直按照1∶40的稀释倍数配制标准血清工作试剂，检测30余万例样本，从未出现过因标准血清工作试剂效价不足而导致的可疑或无效检测，因此我们认为厂家建议按1∶40的稀释倍数配制标准血清工作试剂是较为合适的，当然适当调整(减小)该稀释倍数在理论上也是可行的。反定型用红细胞工作试剂的浓度对检测的影响较大，尤其是影响反定型图像的质量，如果浓度过高或过低还可能导致假阴性或假阳性的凝集判定[3,4]；由于正定型血球样本经仪器自动稀释后的浓度亦为1.7%，因此参照正定型图像调整反定型用红细胞工作试剂的配制浓度是较为简便可行的方法；因试剂红细胞为冷藏保存，因此宜用冷藏保存的生理盐水作为配制反定型用红细胞工作试剂的稀释液，而不宜用常温保存的生理盐水作为该稀释液；各实验室和操作者应当在实践中总结自己配制反定型用红细胞工作试剂的经验。

2.4 仪器运行监测及常见故障排解OLYMPUS PK7300具有自动监控和报警功能，操作者可根据报警提示查找报警原因并进行相应处理，其中因微孔板安装方向不正确导致仪器运行被意外终止和因样本加样针脱出移位导致仪器不能正确完成取样及检测过程是较为常见且需要操作者予以及时处理的两类故障。安装微孔板时务必使其板孔向上，封膜标记位于微孔板安装单元的右前方；微孔板安装方向不正确是导致仪器运行被意外终止的最常见原因之一(出现这类错误时，仪器在加样和孵育阶段均不会发出报警提示，而只有在成像分析和退板时才发出报警提示并自动转换到STOP状态；如果等到仪器提示发生了该故障再做处理，必然会浪费大量的时间，因此对此类故障应以预防为主)，如果发生因微孔板安装方向不正确导致仪器运行被意外终止，操作者需取出停留在成像分析仓内的微孔板并重新初始化仪器；操作者在安装微孔板时养成良好的习惯并在安装后检查确认微孔板的方向是否正确，可以有效避免此类故障的发生。如果发生样本加样针触碰到样本管壁等情况，血球或血浆加样针则可能向上脱出移位；多数情况下血球或血浆加样针脱出移位程度较大，导致仪器不能正确感应稀释清洗液的浓度，则仪器会发出“DILUTED DETERGENT DENSITY ERROR”的报警提示；而少数情况下血球或血浆加样针脱出移位程度不大，仪器尚能正确感应稀释清洗液的浓度，则仪器不会发出上述报警提示；无论血球或血浆加样针发生何种程度的移位，仪器是否发出报警提示，仪器均可继续运行(即不会自动转换到PAUSE或STOP状态)，但不能正确完成取样及检测过程，因此需要操作者对仪器予以暂停运行并将血球或血浆加样针进行复位后再运行；采购质量较好的采血管并予以正确贮存、采集、离心、安装，可以减少此类故障的发生。

2.5 查看检测结果PK7300内置高解析度CCD数码相机，基于SPC、P/C、LIA三种赋值参数对反应图像鉴别、分析及赋值，从而判定反应微孔的凝集情况及检测标本的ABO及Rh血型；除了将三种赋值参数作为判定反应微孔是否凝集的依据外，仪器还能识别一些污点、凝块等，将这些反应孔的凝集情况判定为可疑(?)。操作者在查看检测结果时，除了查看仪器判定的ABO及Rh血型是否有可疑结果外，还应查看每块微板的反应图像是否有异常；当遇到可疑检测结果时，应通过肉眼查看微板、试管法检测、送检等方式予以复核确认。

3 微孔板清洗

PK7300用于血型检测的微孔板为可重复使用的微孔板，新的或检测使用后的微孔板均须清洗后方可使用，微孔板清洗时须穿戴手套、护目镜等保护性装备，微孔板不能超声处理，否则会导致微孔受到磨损。选用的洗涤剂类型对清洗效果的影响较大；目前在我国的PK7300的使用单位中，以使用次氯酸钠或Contrad 2000等表面活性剂两类消毒清洗剂较为常用。我们曾先后使用0.5%浓度的Contrad 2000和有效氯浓度0.3%的次氯酸钠液两种洗涤剂，其中使用前者约二年时间，使用后者一年多时间。对于两种洗涤剂，我们的主要体会是：经Contrad 2000洗涤的微孔板内容易产生洗涤剂残留；经次氯酸钠洗涤的微孔板内无洗涤剂残留，洗涤效果较好，且使用次氯酸钠更符合生物安全的要求，成本亦较低，但空气中挥发的次氯酸钠对呼吸道有一定的刺激性。我们制作了一套清洗微孔板的辅助装置，有效地减轻了操作者的劳动强度，减少了次氯酸钠在空气中的挥发。总之，微孔板的清洗质量直接影响PK7300的检测质量，微孔板清洗是一个十分重要的环节，其尚未能实现在仪器内自动化完成(这或许是PK7300美中不足之最突出点)，清洗工作相对较为繁重，在清洗微孔板时，不仅需要操作者付出辛勤劳动，同时操作者又可以展示智慧对清洗方法予以改进。

4 撰写SOP

不能直接将PK7300说明书作为SOP使用。各实验室应根据自己的工作特点、日常操作顺序、对各程序的使用频率等，参照PK7300说明书撰写自己的SOP。对于使用频率较高的日常操作和维护应重点写，步骤具体；对于使用频率较低的操作和维护可概略地写，注明参照说明书的某章节即可；有些内容在说明书中写得较概略，但实际操作中却步骤较多，如刻录检测数据及图像，这类操作则需要在SOP中写得更详尽具体。

[1]孙波,曹丹,李文超,等.自动输血检测分析系统OLYMPUS PK7300在血型试验中的参数设置[J].中国输血杂志,2010,23(增刊)∶126.

[2]杨莉娜,钱榕,唐绮,等.献血者血型不规则抗体筛查必要性的探讨[J].实验与检验医学,2013,31(3)∶267-268.

[3]王福成,施之雍,蔡隽,等.梯形微板技术在ABO血型检测中的应用[J].中国输血杂志,2007,20(1)∶53-55.

[4]关菌,郭美英,何秋荣.全自动梯形微板法检测ABO血型试剂配制比例探讨[J].中国医药指南,2011,9(14)∶75-76.

R446，R193.3，R457.1+1

B

1674-1129(2014)06-0801-02

2014-06-27；

2014-08-02)

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.065