巨细胞病毒感染诊断方法的研究进展

刘聪，戴薇，肖德俊，邹翠翠综述，肖九长审校

(赣州市人民医院检验科，江西赣州341000)

·综述·

巨细胞病毒感染诊断方法的研究进展

刘聪，戴薇，肖德俊，邹翠翠综述，肖九长审校

(赣州市人民医院检验科，江西赣州341000)

∶巨细胞病毒在人群中传播广泛，其在我国成人的感染率超过95%，且存在地域差异。多数感染者表现为亚临床症状及潜伏感染。但在感染后较大程度上可侵袭多种器官导致严重疾病，免疫功能减弱的情况下会对患者的身体健康构成严重威胁，孕妇和儿童感染巨细胞病毒后对身体损害较为严重，可导致胎儿畸形、儿童智力发育障碍等，因此巨细胞病毒早期诊断尤为重要，本文就巨细胞病毒感染诊断方法研究进展综述如下。

巨细胞病毒感染；诊断方法；研究进展

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.019

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)在我国感染非常普遍，是疱疹病毒科最大的病毒[1]，在免疫功能低下的人群中如孕妇、儿童可导致严重的危害，有可能会发展为HCMV综合症，出现小头畸形、听力和视力损害等后遗症[2]。因此对HCMV感染的早期准确诊断具有重要的临床意义。

1 CMV的结构及生物性状

CMV属于疱疹病毒的亚科，分子量约为150× 106，是线状双股DNA，内核直径230nm，外核为110nm的二十倍体，二者合称为核衣壳。其被膜上蛋白约14种，其中膜蛋白pp65可作为CMV活动性感染的检测指标[3]。CMV存在于血液、唾液、眼泪、尿液、精液、粪便、子宫颈和阴道分泌物、乳汁等中。病毒可由乳汁、唾液及尿排出，可持续数周到几年[4]。

2 巨细胞病毒感染情况及途径

CMV根据感染发生时间的不同可分为先天性感染(宫内感染)、获得性感染(围产期感染)及产后感染[5]。

2.1 先天性巨细胞病毒感染先天性巨细胞病毒感染即宫内感染，经母婴传播是胎儿CMV感染的主要途径[6]，其具体途径为：母亲本身携带的巨细胞在其妊娠期期间，通过胎盘传递给胎儿，并存在较高的几率导致胎儿流产或死胎等，活婴中约有5%会出现多系统、多器官受累，约5%会表现为非典型的临床症状，90%为亚临床症状。有文章报道，先天性CMV感染大约占新生儿0.15%～2%[7]。经母婴传播导致先天性巨细胞病毒感染率国外报道可达23%[5]，其感染率比国内报道的要低。

2.2 获得性巨细胞病毒感染获得性巨细胞病毒感染即围产期巨细胞病毒感染，是指分娩时巨细胞病毒通过产道传播给新生儿[8]。它与先天性巨细胞病毒感染不同的是感染CMV的母亲所生的孩子出生14d内无法诊断出CMV感染，要到新生儿出生3～12周内才能证实CMV感染[9]。

2.3 产后感染产后感染即出生后获得的感染，是指在母乳喂养过程中经乳汁直接传递给婴儿，也可由母婴经唾液等水平传播引起[10]。

3 巨细胞病毒感染的临床表现

成人感染CMV与自身免疫功能有密切的关系。CMV感染一般以潜伏感染的形式存在，当患者发生肿瘤或器官移植尤其是肾移植后等自身免疫功能低下或缺失时潜在的病毒才会复活增值表现出明显的临床症状。潜在感染及显性感染的患者均可成为传染源[11]。调查研究表明，不同区域和不同经济情况感染率不同，其中亚洲和非洲感染率明显比西方发达国家要高，且多发生在青少年阶段。低收入人群感染率要高于高收入人群[12]。此外，CMV还可侵犯全身各器官，或可导致胎儿早产、足儿小样、听力及智力障碍等。

4 巨细胞病毒感染诊断

4.1 血清学诊断当CMV感染人体后，会出现一些特异性抗体，如IgM、IgG等，孕妇血清中检测到IgM可证实感染CMV，要判断胎儿感染的风险就要进一步证实孕妇是否发生原发感染。但是研究表明IgM的阳性率较低，要在感染2～4周之后才能检测到，而新生儿和免疫力低下的人还有可能出现假阴性的结果[13]。有研究表明IgM水平与CMV的复制程度无相关性[14]，而巨细胞病毒IgG在评估免疫功能低下人群巨细胞病毒活动性感染上无价值[15]。我国孕期女性CMV经胎盘感染新生儿的概率可达35%，因此对孕妇进行CMV检测很重要。目前临床上普遍采用ELISA法来检测孕妇血清中特性抗体IgM是否为阳性来初步判断CMV感染。ELISA法步骤简单，时间短，便于临床应用，但是存在阳性率低，且易出现假阴性，而且出现时间较晚等不足[16]。

4.2 病毒培养病毒分离是目前实验室诊断CMV的金标准[17]。该法就是将检测标本接种后检测是否存在包涵体。这种方法容易污染，步骤复杂，不利于临床快速诊断，还存在的最大问题是CMV只在人纤维母细胞中增殖，因此检测周期较长，只适合用于科研途径[18]。

4.3 巨细胞病毒抗原检测目前国外文献报道的CMV抗原检测通常采用ABC法或免疫荧光检测法[19]。CMV在细胞内复制6～24h后会产生结构蛋白，其中的被膜蛋白大部分是pp65。在20世纪80年代Vinder[20]就建立了免疫荧光定量等方法来检测pp65。当CMV处于活动期时，外周血中会存在高水平的pp65抗原，其可作为CMV感染的活动性检测。近年来检测pp65抗原的方法得到了很大发展，现在有些实验室利用流式细胞术来检测pp65抗原，只需约2h，其操作步骤简单，灵敏度高，特异性好，步骤简单，灵敏度和特异性都很好，值得临床上推广。Piiparinen等[21]认为血液中的pp65抗原的表达水平可预测发生HCMV感染的风险度。有资料表明pp65抗原检测可用于诊断HCMV活动性感染,还可作为指导临床用药及监测药物疗效的一个监测指标[22]。

4.4 病毒DNA的聚合酶链反应(PCR)聚合酶链反应(PCR)检测病毒DNA与免疫酶链法、病毒培养等方法相比，具有步骤简便，灵敏度高，特异性强等优点，还能做CMV定量分析。但是普通PCR也存在不足，容易造成污染和假阳性的缺点。现在的新方法实时荧光定量PCR就是在原来的反应体系中加入荧光基团，可实时检测PCR进程，进而实现定量分析的目的。此方法具有普通PCR的优点外，还能进行CMV感染的动态监测，重复性也好,还能进行早期检测CMV[22]。

综上所述，血清学诊断由于其阳性率较低，容易受到病人体质等因素的影响，很容易造成假阴性结果，已经不能满足临床检测对于高灵敏度和特异度的要求。病毒培养由于其操作的复杂性以及对培养环境的严格要求，也很难满足临床对于快速诊断的需要，实时荧光定量PCR虽具有其独特的优点，但是同流式细胞计数比较而言，却也有其不足之处,比如实时荧光定量PCR引物的设计很关键，决定着实验成功与否，还有RNA模板提取效率、反转录效率、标准品的选择与制备、荧光阈值的设置等复杂实验操作[23]。流式细胞术作为一个新兴的技术已经从科研领域逐步过渡到了为临床服务，因其具有高灵敏性和快速性的优点，逐步被大家所接纳和认可。

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R373

A

1674-1129(2014)06-0703-02

2014-05-04；

2014-10-16)

刘聪，女，1986年12月生，硕士，检验师，研究方向为临床免疫学。

肖九长，男，1969年9月生，本科，副主任技师，研究方向为临床免疫学。