ND－O－BSA－IgM－ELISA在麻风检测中特异性的评价

张振国苏宗义乐宏元刘晓虹叶 理吕成志朱帮勇高 阳王雨欣宋顺鹏∗

ND－O－BSA－IgM－ELISA在麻风检测中特异性的评价

张振国1苏宗义1乐宏元1刘晓虹1叶 理1吕成志1朱帮勇2高 阳3王雨欣4宋顺鹏1∗

有学者报道,经优化后的ND－OBSA－IgM－ELISA在麻风血清学诊断中有极高的敏感性和特异性,1亦发现ND－OBSA－IgM－ELISA比PGL－I－IgM－ELISA特异性高,但国内外尚未报道临床上易与麻风混淆的疾病及可能有交叉反应的个体的检测结果。我们对与之相关的易混淆疾病和可能有交叉反应者进行血清学检测,以对ND－O－BSA－IgM－ELISA的特异性作出评价。

1 材料和方法

1.1 材料 血清的收集:麻风病人血清60份,来自于广西、四川的皮肤病研究所和本实验室血清库,其中少菌型(PB)30例,多菌型(MB)30例。正常人血清100份,来自大连市体检中心,经检测为正常人；结缔组织疾病患者血清30份；银屑病患者血清30份；梅毒患者血清30份；结核病人血清30份；妊娠个体血清30份；分别来自大连市皮肤病医院,大连市结核病医院和大连市妇产医院。

ND－O－BSA抗原由美国Calarado州立大学提供。用挥发性缓冲液将抗原配成浓度为0.1 μg/mL,按照每孔0.1 mL包被于96孔酶标板(costar公司),37℃18 h干燥后,置于4℃备用。

酶结合物 羊抗人HRP－IgM购于Sigma公司。

1.2 方法 间接酶联免疫吸附试验,即: ND－O－BSA－IgM－ELISA。按Wu等优化后的方法进行。1用PBS(PH 7.2)浸泡抗原包被96孔板(0.2 mL/孔),37℃保温20 min后倒去浸泡液,甩干,加入5%封闭剂(SM－PBS)0.2 mL/孔,放于37℃孵育2 h；甩干封闭剂；加待检血清,按1∶100(稀释液为2.5%SM－PBS)稀释,每孔加0.1 mL,置于37℃孵育1 h；甩去血清,用PBS冲洗3遍,扣干；加酶结合物1∶1000(稀释液为2.5%SM－PBS),每孔0.1 mL,置于37℃1 h；甩去酶结和物,用PBS冲洗3次,。加0.01%底物液(OPD 10 mg,0.1 M,PH 5.0柠檬酸－磷酸盐缓冲液99 mL,甲醇1 mL,30%H2O240 μL),每孔0.1 mL,置于37℃保温30 min；加终止液(1.25 M的H2SO4),每孔0.1 mL,立即在酶标仪(Bio－RAD)于波长为490 nm处读OD值(每份血清包被两个孔,取平均值,酶标仪读取OD值,两孔值变化超过10%重复实验)。每板均设阳性对照,阴性对照及空白对照。

表1 麻风患者及其他受检对象血清抗ND－O－BSA抗体水平

1.3 统计学方法 计算平均值、标准差、t－test以及敏感性和特异性,正常值的确定用OD＝¯x±2sd。

2 结果统计

结果见表1。

本实验室理论阈值取0.14(OD＝x¯＋2sd),正常人阴性率为97%,多菌型病人阳性率100%,少菌型病人阳性率90%,病人和正常人之间的差异显著(t＝7.46,P＜0.05)。妊娠个体及结缔组织病患者、梅毒患者,银屑病患者、结核病患者无1例出现阳性,正常人与之全无差异。

3 讨论

近年来新发麻风病例流动人口所占比例逐渐增加,对健康人群构成了新的威胁。麻风临床表现复杂,各类麻风的临床表现多种多样,可类似多种疾病,皮肤损害及病理表现也没有特异性,查菌常出现阴性结果。因此,在临床上与常见的易于混淆之皮肤病及有可能有交叉反应的个体之间,往往难以鉴别,从而导致误诊和漏诊。本研究比较了麻风患者与常见的几种易混淆之皮肤疾病及有可能有交叉反应的个体之间的血清学差异。结果显示,ND－O－BSA－IgM－ELISA实验的敏感性在MB可达100%,在PB可达90%,其特异性达97%,而在其他疾病及可能有交叉反应的个体检测中,无1例出现阳性。进一步证实了ND－O－BSA－IgM－ELISA的高度敏感性和特异性。因此,在临床上可有效检测麻风患者,降低漏诊和误诊率,提高诊断率,及时治疗减少致畸、致残率,提高患者生活质量。

(特别感谢中国医学科学院皮肤病医院吴勤学教授及麻风与结核分枝杆菌实验室主任王洪生教授)

1 Wu QX,Ye GY,Li XY.Serological activity of ND－O－BSA in sera from patients with leprosy,tuberculosis,andnomal controls.Int J Lepr,1988,56(1):50－55.

(收稿:2013－02－25)

1大连市皮肤病医院检验科,辽宁大连,116021

2广西壮族自治区皮防所,广西南宁,530000

3大连市结核病医院,辽宁大连, 116000

4大连市妇产医院,辽宁大连, 116021

∗通信作者