把放久了的包埋组织块放在湿盒里湿润可避免或减少组织切片碎裂

杨正伟，向 宇，郭 洋，彭 彬，白桂芹，董兴堂，黄小丽，马 利，陈 静，杜 馨，张思航

(川北医学院形态学研究所，四川 南充 637000)

1 经验

2013年4月，我们拟切七八十个甲基丙烯酸树脂(2-hydroxyethyl methacrylate，德国Leica生产)包埋的大鼠眼球组织块，这些组织块已包埋2年多，切片时遇到严重问题：组织块的脆性都大，一切片就碎裂，无法切得完好的组织切片。我们思考很久后想出一个办法：先把树脂块放入湿盒过夜(半天至一天)，即在一密闭的盒子里盛水，水面之上放一有孔的隔层板，板上放树脂块，然后再切片。果然有效，所有的组织块就这样都切得完好的切片(厚度15 μm)。

2014年2月，我们要切二三百个石蜡(德国Leica生产)包埋的金黄地鼠胰腺和肝脏组织块。它们已包埋3年多，且包埋后不久就切过(切片厚度7 μm)，当时切片完全没问题。但这次再切这些组织块时问题严重，一切就粉碎。基于上面的经历，我们试着把石蜡块放入湿盒三天左右，且把石蜡浸在水里，结果也出乎意料的好：都切得完好的切片(厚度5 μm)。

最近，我们又要切五六十个石蜡包埋的大鼠肾脏组织块。它们已包埋6年半，2年半前曾切过(切片厚度7 μm)，当时切片问题不大，部分组织块虽有些脆，但向石蜡块切面哈气(用口吹气)之后，还是切得不错的切片。但这次切片(厚度10 μm)问题较大，组织碎裂严重。依样画葫芦，我们把石蜡块放入湿盒几天，结果也避免或减少了切片碎裂。

2 讨论

我们的上述经验表明，组织块放置或保存(一般放在切片盒里，注意勿让组织块受压变形)几年后会变干、变脆。因此切片时组织易碎裂，难以切得完整的组织切片。把组织块放在湿盒里湿润过夜或几天的方法，可部分或完全解决这个问题。

笔者所在实验室长期从事形态定量研究，经常要成批的包埋(尤其是用甲基丙烯酸树脂)组织块并制作质量要求高的切片[1]，但很少遇到上述严重问题。可能是因为我们通常切的是“新鲜”组织块，即包埋后几个月之内就要切片。这说明，组织变脆可能更常见于“陈旧”的组织块。难怪文献总结的石蜡切片的十多个常见问题中，也没有包括这个问题[2]。

不过，组织脆性增加、切片易碎裂的问题，实践中可能并非不常见，也未必只见于放久了的组织块。也许，由于问题不那么严重，或由于同时包埋、同时切片的组织块少，对这个问题不易引起重视。我们常见或常闻切片中这样那样的小窍门，例如哈气(上述)，用冰块冰或用湿布擦(湿化)石蜡块切面，把石蜡块切面浸泡在温水里三五分钟[3]，甚至把整个石蜡块冰冻之后再切片。如这些方法有效，它实际上说明组织块有些干燥或变脆了，但是人们可能多半会把这个问题归咎于脱水、透明、浸蜡或包埋过程[4]，不会想到用湿盒来湿润整个组织块的解决办法。最近，我们用石蜡包埋了六七十个大鼠脊髓组织块，包埋后二三个月之内就切片，每块都要切上百张连续切片(厚度14 μm)。我们后来发现，为保证连续切片的质量，切片前先把石蜡块放入湿盒3～7 d的方法很有帮助。

话又说回来，湿润组织块虽有利于切片，但未必有利于组织块的长期保存。从常识讲，干燥才利于组织本身的保存。事实上，笔者之一(杨正伟)一二十年前保存甲基丙烯酸树脂包埋的组织块，就要在盒子里放入干燥硅胶颗粒，切片前一二天才把组织块拿出来。此外，组织处理、包埋介质甚至切片刀等方面的问题也可能引起切片时的组织碎裂，组织的质地以及组织块的大小想必也与切片脆裂有关，这样的问题就未必能用湿润组织块的方法很好或有效的解决。例如，我们最近在切一些组织块时又注意到，湿润石蜡块使切片好切了，但换用更锋利的刀片才使蜡带更成形——更易切取连续切片。

【参考文献】

[1]杨正伟.生物组织形态定量研究基本工具:实用体视学方法[M].北京:科学出版社,2012.

[2]赵 荧,唐军民.组织切片技术[A].见:李继承(主编).组织学与胚胎学实验技术[M].北京:人民卫生出版社,2010：13-20.

[3]马新峰,赵利萍.影响免疫器官石蜡切片质量的因素分析[J].河南职工医学院学报,2007,19(6):586-587.

[4]侯春春，徐 水.浅析影响石蜡切片质量的关键因素[J].中国农学通报,2009,25(23):94-98.