胰岛素测定前标本的处理方法比较

吕 萍

（辽宁省沈阳医学院附属第二医院输血科，110002）

·特别提示·

胰岛素测定前标本的处理方法比较

吕 萍

（辽宁省沈阳医学院附属第二医院输血科，110002）

目的 讨论和评价在样品从门诊运送到检测实验室时，如何维持血清和血浆中胰岛素的稳定性。方法 从20名体检者抽取静脉血，立即处理或室温下储存24 h。比较乙二胺四乙酸（EDTA）或氟化钠（NaF）对胰岛素测定结果的影响。结果 EDTA抗凝标本的胰岛素在室温下24 h内是稳定的。如果样品未使用添加剂或NaF，则胰岛素浓度显著降低。结论 如果从门诊运送到检测实验室的待测胰岛素样品能在24 h内处理，则不需要血浆的离心及冻存。

胰岛素；乙二胺四乙酸；氟化钠；测定

循环血胰岛素测定通常适用于胰岛素瘤的诊断（表现为低血糖时可测量的胰岛素）、胰岛素瘤患者的随访（包括术中监测）、1型糖尿病剩余胰岛素分泌的鉴定、胰腺移植手术后的监测。胰岛素测定作为一种研究工具，对于诊断以高胰岛素血症为特征的2型糖尿病和代谢综合征具有极其重要的意义[1]。现在愈来愈多的证据表明，以空腹或耐糖测试后胰岛素和血糖测定为基础的胰岛素耐受测定，有助于提高潜在的2型糖尿病或心血管疾病患者的诊断和治疗[2]。在临床实践中，为了保持血液中胰岛素的稳定性，需要医护人员立即将样本离心，快速将冻结的血清或者血浆转移至检测实验室。本研究旨在比较不同抗凝剂处理及不同时间对血液胰岛素测定结果的影响。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取正常体检者20例。其中，男12名例、女8例；年龄31～45岁。其中10名在注射75 g葡萄糖2 h后取样。把每一个体的样本分别放入6只采样管：两支为乙二胺四乙酸（EDTA）管（上海科华，容积2.0 mL，终浓度为1.5～2.0 mg K2-EDTA/mL全血）；两支管为无添加剂的血清标本（江苏康健，容积4.5 mL)；两支添加氟化钠（NaF），作为糖酵解抑制因子和草酸钾的抗凝剂（上海科华，容积2.7 mL，终浓度为2.0～3.0 mg NaF/mL全血）。

1.2 主要仪器及试剂 胰岛素测定采用化学发光法，使用美国贝克曼公司生产的AccESS全自动微粒子化学发光免疫分析仪及配套试剂。血糖测定采用己糖激酶法，使用日本产HITACHI 7170S全自动生化分析仪及配套试剂。

1.3 血糖和胰岛素测定 在每一样本组中，针对每种采样管，取其中一支管于10 min内离心，取上清，并立即冻存；其余未被离心的样本管（1支为EDTA，1支为血清，1支为NaF）在室温下（22～24℃）贮存24 h后离心，分离血清或血浆，分析前贮存在-20℃下，所有的样本在融化后分为两批进行胰岛素和葡萄糖测定。分析需在取样10 d内进行，所有样本均做双管测定，取平均值。

1.4 统计分析 对于分析前处理获得的不同类型的胰岛素和葡萄糖样品，采用SPSS 11.5统计学软件进行分析，测定结果做配对秩和检验，并进行相关性分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

就先前确定的标准，在含EDTA样本中，对室温下贮存24 h的胰岛素测定，结果没有显著性影响（P=0.35）。值得注意的是，在这种贮存条件下，添加了氟化盐和没有添加剂样本的结果分析分别为P＜0.000 1 和P=0.000 9，见表1。 在胰岛素测定的结果上，立即处理含EDTA的样本和在室温下贮存了24 h后的样本具有相关性（r=0.998)。见图1。依照相关回归分析，结果对比显示如下等式：贮存在室温24 h的EDTA样本=立即处理的EDTA样本×0.96＋2.1 pmol/L（斜率95%可信区间：0.92～0.97；截距95%可信区间：2.8～6.3 pmol/L）。

贮存了24 h的无添加剂的样本和仅含EDTA的样本葡萄糖的浓度显著下降。见表2。含氟化物的样本葡萄糖的结果下降适中，但具有统计学意义，贮存在室温下24 h后大约下降了10%（P＜0.000 1），贮存了24 h含氟化物的样本中可见明显的溶血现象。

图1 含EDTA样本即刻处理与放置室温24 h后处理的胰岛素测定结果相关性（pmol/L）

3 讨论

我们的研究显示，EDTA作为检测分析的稳定物，已被普遍应用在自动化测试中，加入EDTA后内源性胰岛素实际在血液样本中较稳定。在胰岛素测定的结果上，立即处理含EDTA的样本和在室温下贮存了24 h后的样本是一致的。两者间的变异性主要是分析方法不同的批间变异。没有添加剂的样品管中，在室温下贮存了24 h的胰岛素测定结果下降轻微但有统计学意义。红细胞内含有胰岛素降解酶，EDTA能与IDE的辅基金属离子生成稳定的络合物而影响胰岛素降解酶的活性，使胰岛素避免循环中不确定蛋白水解酶和依赖于钙的胰岛素酶的水解[3-4]。在含有氟化物的样本中胰岛素浓度显著下降，可能是因为这些样本中出现溶血而向血清中释放了大量的红细胞胰岛素降解酶[5-6]。

由于近年来胰岛素检测大多采用发光免疫分析法，试剂、仪器成本较高，且胰岛素测定非急诊项目，故大多数医院不是24 h开机检测此项目。另外，实际工作中，常有各种原因需要保存标本以备复查。因此，我们的研究结果对门诊患者处置时尤其具有重要的实际意义。根据我们的结果，如果确信是在24 h内取的样品，现在似乎有充分的理由使用常规的运输系统运送未经处理的需测量胰岛素的样品。基于颜色改变测温的不可逆温度控制条带可另外被用来排除运送期间意外的热损伤。尽管葡萄糖测量的样品试管中包含氟化物盐，我们发现对室温24 h内存储的血清葡萄糖测定结果影响轻微，但有重要统计学意义；这在解释葡萄糖测定结果中被考虑并且强调血清或者毛细血管中葡萄糖浓度的现场即时分析有重要性。

迄今为止，已发表的数据表明胰岛素测量对潜在的代谢综合征和2型糖尿病患者有重要作用。肥胖和胰岛素抵抗都是心血管疾病的强大的预测器，但是任何肥胖程度的胰岛素抵抗又加重了冠心病和2型糖尿病的风险。识别谁最有胰岛素抵抗及谁最能受益于减肥可能是重要的。这些人可能是今后特异治疗策略的目标。以后更大领域和长期研究能最终阐明通过胰岛素测定的不同设置来分析个体胰岛素敏感度的实际意义。

[1] Isomaa B. A major health hazard: the metabolic syndrome[J]. Life Sci, 2003, 73(19): 2395-2411.

[2] Ferrannini E, Muscelli E, Stern MP, et al. Differential impact of insulin and obesity on cardiovascular risk factors in nondiabetic subjects[J]. Int J Obes Relat Metab Disord, 1996, 20(1): 7-14.

[3] 李伟雄，周静．溶血对血清胰岛素测定的影响及应对措施[J]．中国热带医学，2006，6(8)：1475-1476．

[4] 池胜英，张文辉，陶志华．溶血对血清胰岛素测定的影响[J]．现代中西医结合杂志，2003，12(19)：2092-2093．

表1 室温储存24 h后样品中胰岛素测定浓度（pmol/L）

表2 室温储存24 h后样品中葡萄糖测定浓度（mmol/L）

[5] 夏凤城，汪寅章．氟化钠对放免分析血浆胰岛素的影响[J]．军医进修学院学报，1996，17(4)：274-276．

[6] 郭永铁．不同浓度的EDTA-K3对胰岛素测定干扰的实验研究[J]．医学检验，2010，25(16)：20．

1672-7185（2014）12-0004-03

10.3969/j.issn.1672-7185.2014.12.003

2014-03-10）

R44

A