外周血CD4＋T细胞和CD8＋T细胞亚群与胃癌的相关研究

张保国

外周血CD4＋T细胞和CD8＋T细胞亚群与胃癌的相关研究

张保国

目的探讨Ⅳ期胃癌患者外周血CD4＋T细胞和CD8＋T细胞表达状态与疾病临床病理特征及预后之间的关系。方法采用流式细胞技术检测40例胃癌患者外周血CD4＋T细胞和CD8＋T细胞数目及二者之间的比值；收集胃癌患者临床病理资料并进行随访，分析CD4＋T和CD8＋T表达状态与临床病理特征及无疾病进展生存时间（PFS）之间的关系。结果CD4＋T细胞与胃癌患者年龄、肿瘤分化程度、KPS评分及PFS无明显相关性，与性别有相关性（P＜0.05）。CD8＋T细胞与性别、肿瘤分化程度有相关性（P＜0.05），与年龄、Karnofsky功能状态评分（KPS评分）、PFS无明显相关性。CD4＋／CD8＋比值与性别、年龄、肿瘤分化程度均无相关性，与KPS评分显著相关（P＜0.05）。生存分析发现，CD4＋／CD8＋比值与PFS有明显相关性（P＜0.05）。结论CD4＋T细胞和CD8＋T细胞在胃癌抗肿瘤免疫中发挥重要作用，检测其比值对于判断胃癌的预后具有一定价值。

CD4＋T细胞；CD8＋T细胞；胃癌；预后

胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率呈上升趋势。机体免疫功能抑制和免疫状态异常是介导肿瘤发生发展的重要原因。Ho等［1］认为在机体免疫失衡状态下，肿瘤细胞可以逃避免疫细胞的监控，发生免疫逃逸，进而导致肿瘤发生、发展。T细胞亚群是抗肿瘤免疫中重要的一类淋巴细胞［2］，主要包括CD4＋T细胞与CD8＋T细胞。CD4＋T细胞作为辅助性T细胞能产生淋巴因子，增强CD8＋T细胞杀伤肿瘤细胞功能，具有辅助细胞免疫和体液免疫应答作用，CD8＋T细胞作为抑制性T细胞和细胞毒性T细胞，是重要的效应细胞，二者之间的平衡维持着机体正常的免疫应答［3⁃4］。本研究通过流式细胞技术检测Ⅳ期胃癌患者外周血中CD4＋T细胞和CD8＋T细胞的表达情况，分析其与一系列临床指标之间的相关性及与患者预后之间的关系，为临床诊疗提供新的依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象 研究对象均来自南京医科大学附属南京医院肿瘤内科。所有对象为2010年12月至2012年12月期间住院的Ⅳ期胃癌患者，接受晚期一线化疗，共40例。其中男30例，女10例，年龄25～85岁，中位年龄64岁。对所有患者均进行Karnofsky功能状态评分（KPS评分）［5］。所有患者均在化疗前2 d清晨抽取空腹血检测。所有研究对象在近期内均无急、慢性细菌性感染及病毒性感染，均无自身免疫性疾病或使用过免疫抑制剂。所有患者随访至2013年3月，随访内容包括肿瘤指标、CT、胃镜等。

1.2 试验方法 所有研究对象均于化疗前2 d抽取清晨空腹静脉血2ml，肝素抗凝。取50μl抗凝血于流式专用试管中，加入Beckman Coulter公司提供的CD45 FITC（异硫氰酸荧光素）、CD4 RD1（藻红蛋白）、CD8 ECD（藻红蛋白⁃德州红⁃X）、CD3 PC5（藻红蛋白⁃花青苷5）四标记单克隆荧光抗体20μl，混匀，室温避光反应20min，加入500μl红细胞裂解液，溶解红细胞5～10 min，1000×g离心5min，弃上清，再加入1ml PBS，1000× g离心5min，弃上清，补足500μl磷酸盐缓冲液，混匀后上Beckman Coulter公司CYTOMICS FC500型流式细胞仪检测并使用CXP软件获取10 000个细胞，以SSC（侧向角散射）／CD45设门，记录辅助／诱导T淋巴细胞（CD45＋CD3＋CD4＋CD8－）、抑制／细胞毒性T淋巴细胞（CD45＋CD3＋CD4－CD8＋）百分数并计算辅助／抑制T淋巴细胞比值（CD4＋／CD8＋）。

1.3 统计学分析 所有数据采用SPSS 16.0软件进行统计分析。计量资料采用均数±标准差表示。组间数据分析采用t检验，计数资料采用卡方检验，生存分析采用Kaplan⁃Meier分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌患者外周血CD4＋细胞、CD8＋细胞的表达状态 40例胃癌患者外周血CD4＋T值为33.41±10.30，CD8＋T值为27.51±10.59，CD4＋／CD8＋在正常范围内的均值为1.33±0.30，CD4＋／CD8＋异常的均值为1.67 ±1.30。

2.2 CD4＋T细胞、CD8＋T细胞与临床参数之间的关系 CD4＋T细胞计数与年龄、分化程度、KPS评分无关，与性别相关（P＜0.05），女性患者CD4＋T细胞较男性患者高；CD8＋T细胞与性别、分化相关（P＜0.05），男性患者CD8＋T细胞较女性患者高；分化程度越差，CD8＋T细胞越低。CD4＋／CD8＋与性别、年龄、分化程度均无相关性，而与KPS评分相关（P＝0.039），KPS评分越高，CD4＋／CD8＋在正常范围内的比例越高。见表1。

表1 CD4＋T细胞、CD8＋T细胞与临床参数之间的关系

2.3 各临床参数与患者生存期之间的关系 采用Kaplan⁃Meier生存分析发现，CD4＋／CD8＋比值与PFS有明显相关性，CD4＋／CD8＋比值在正常范围内的患者PFS显著高于异常者（P＝0.012）（图1）。而性别、年龄、分化程度、KPS评分、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞与PFS无明显相关性（P＞0.05）。

3 讨论

胃癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，居全世界恶性肿瘤死因第4位，我国是胃癌高发区，其发病率和死亡率远超世界的平均水平。机体的免疫状态与肿瘤的发生发展密切相关［6］，当机体的免疫功能受到抑制，肿瘤的生长速度明显增快，快速发展的肿瘤又反馈性加剧机体免疫功能的破坏。T细胞是抗癌免疫的核心细胞，包括CD4＋T细胞、CD8＋T细胞。CD4＋T细胞不仅可以分泌大量的细胞因子辅助CD8＋T细胞杀伤肿瘤细胞，而且在肿瘤免疫中具有免疫记忆和直接杀伤肿瘤细胞功能，CD8＋T细胞除行使杀伤效应外，亦具有强烈的调节效应［7⁃8］。恶性肿瘤患者多数处于免疫抑制状态，由于免疫功能下降而出现T细胞亚群的紊乱，其中主要一个表现就是CD4＋／CD8＋比值异常。

图1 CD4＋／CD8＋与胃癌患者PFS的关系

CD4＋T细胞并不是一种单一的淋巴细胞，而是一系列具有不同功能的细胞群。近年来，随着对CD4＋T细胞研究的深入，目前已经证实活化的CD4＋T细胞可以分为CD4＋的辅助性T细胞和CD4＋CD25＋的调节性／抑制性T细胞（regulatory／suppressor T cell）两大类。其中，辅助性T细胞主要包括Th1、Th2和Th17。这些不同的亚群具有抗肿瘤或抑制免疫反应，促进肿瘤生长等截然相反的功能［9］。长期以来，人们认为Th1和Th2细胞具有抗肿瘤免疫功能。作为辅助性T细胞，CD4＋T细胞通过分泌干扰素（IFN）等细胞因子和CD8＋T细胞共刺激分子辅助细胞毒T细胞特异性杀伤肿瘤细胞。近来，Muranski等［10］已经证实Th17细胞同样具有抗肿瘤效应。CD4＋CD25＋Treg细胞具有免疫无能性和免疫抑制性两大特点。其免疫无能性表现在接受抗原刺激后既不增生也无白介素⁃2分泌等T细胞活化的现象；免疫抑制性是指其自身活化后能够抑制T淋巴细胞的活化和增殖，进而抑制机体的免疫功能。以往多项研究表明，CD4＋CD25＋Treg细胞在多种恶性肿瘤，如肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌等患者体内存在增高的现象，而且增高水平与肿瘤分期晚、病程进展快及预后差具有显著相关性［11⁃12］。CD8＋T细胞又叫CD8＋的细胞毒性T细胞（cytotoxic T cell，CTL），通过穿孔素／颗粒酶途径和Fas／FasL途径能够高效、特异性地杀伤靶细胞，而不损害正常组织［13］。然而，CTL细胞的活化部分依赖于Th细胞，二者的平衡在维持机体免疫功能中发挥着重要作用。

本研究结果显示，CD4＋／CD8＋比值在正常范围内的患者PSF较CD4＋／CD8＋比值异常者延长，差异有统计学意义（P＝0.012），而将CD4＋T、CD8＋T细胞分别进行生存分析时却得到阴性结果。Shah等［14］在宫颈癌的研究中也得出相似结果，进一步证实以上2种T细胞介导的免疫功能在恶性肿瘤发生发展中的作用。这表明机体的免疫状态不是由单一的一类细胞调控，只有各类免疫细胞维持在一定稳态时才能发挥最佳的免疫功能。

本研究结果还显示CD8＋T细胞与肿瘤分化程度具有相关性（P＝0.03），肿瘤分化越差，CD8＋T值越低。CD8＋T具有特异性直接杀伤肿瘤细胞的作用，分化越差的肿瘤往往恶性程度越高，越容易产生免疫耐受，导致CD8＋T细胞表达降低。另外，KPS评分与CD4＋／CD8＋比值相关，评分越高，CD4＋／CD8＋比值在正常范围内的例数越多。KPS评分即功能状态评分标准，是用来判断患者临床状态的一种指标，评分越高，健康状态越好。本研究结果显示，KPS评分高的患者抗肿瘤免疫越强。薛锋杰等［15］研究68例乳腺癌患者免疫状态与生存质量之间的关系，也得到了相同的结果。本研究结果还显示，CD4＋T细胞、CD8＋T细胞数与性别有相关性，女性患者比男性患者CD4＋T细胞数高，而CD8＋T细胞数却相对较低，由于本研究样本量较小，结果可能具有偶然性，需要扩大样本量进一步研究。

综上所述，晚期胃癌外周血CD4＋／CD8＋比值与患者临床生存质量及预后密切相关，但是本研究样本量小，技术路线相对简单，需进一步扩大样本量来证实CD4＋／CD8＋比值是否可成为胃癌预后指标和免疫治疗靶标。

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Relationship between CD4＋and CD8＋T cells in peripheral blood and gastric cancer

ZHANGBao⁃guo．Department of Oncology，Nanjing Hospital Affiliated to Nanjing Medical University，Nanjing 210006，China

ObjectiveTo investigate the relationship of the presence of CD4＋，CD8＋T cells in peripheralblood with the pathologic characteristics and prognosis of gastric cancer.M ethodsFlowcytometry was used to analyze the number and proportion of CD4＋，CD8＋T cells in periphreral blood from 40 patientswith gastric cancer.The clinical data of the pa⁃tients were collected.The relationship of the proportion and number of CD4＋，CD8＋T cells with the pathologic data and prognosiswere statistically analyzed.ResultsThe number of CD4＋T cells had no correlation with age，differentiation and KPSscore.A higher number of CD4＋Twas detected in female patients（P＜0.05）.The number of CD8＋T cellswas sig⁃nificantly associated with gender and differentiation（P＜0.05），and notassociated with age and KPSscore（P＝0.15）.Both CD4＋and CD8＋Twere not associated with the prognosis of gastric cancer.The ratio of CD4＋／CD8＋was significantly associa⁃ted with KPS score，while not associated with age，gender and differentiation.Those patients with normal ratio of CD4＋／CD8＋had a higher KPS score（P＜0.05）and longer progression⁃free survival time（P＜0.05）.ConclusionsCD4＋and CD8＋T cellsmay have an important role in anti⁃tumor immune of gastric cancer.Detection of these two kinds of cells has clinical value on evaluating the prognosis of gastric cancer.

CD4＋T cell；CD8＋T cell；gastric cancer；prognosis

R 735.2

A

10.3969／j.issn.1003⁃9198.2014.03.011

210006江苏省南京市，南京医科大学附属南京医院（南京市第一医院）肿瘤科