芩榆烧伤凝胶制备工艺及安全性评价

杨巧丽 刘 燕 史玉柱 王 雪 姚 华 王林林 康雨彤 胡海蛟 黄 华

新疆维吾尔自治区药物研究所，新疆乌鲁木齐830004

芩榆烧伤凝胶制备工艺及安全性评价

杨巧丽 刘 燕 史玉柱 王 雪 姚 华 王林林 康雨彤 胡海蛟 黄 华

新疆维吾尔自治区药物研究所，新疆乌鲁木齐830004

目的制备一种治疗烧烫伤的纯中药凝胶剂——芩榆烧伤凝胶，并进行安全性实验研究。方法将黄芩、关黄柏、地榆中药材经浸渍、渗漉、浓缩、干燥、粉碎等现代工艺制成干粉，白及蒸馏提取制成一定比重的浓缩液，冰片加入乙醇溶液溶解，三者合并加入甘油、高取代羟丙基纤维素（H-HPC）和苯甲酸钠混匀后制成凝胶剂，并进行安全性试验研究。结果大鼠皮肤急性毒性试验证明该制剂无急性毒性；豚鼠完整和破损多次皮肤给药刺激试验结果证明该制剂对破损及完整皮肤多次给药均无刺激性；豚鼠皮肤局部过敏试验结果证明，该制剂高剂量组[1.5 g（生药）/g]致敏率为10.0%，有弱致敏性，24 h后情况逆转，红斑及水肿消失。芩榆烧伤凝胶组[0.5 g（生药）/g]致敏率为0.0%。结论芩榆烧伤凝胶临床剂量用于皮肤安全。

芩榆烧伤凝胶；制备工艺；安全性实验

芩榆烧伤液为解放军69220部队医院开发的用于治疗烧烫伤的制剂，此方具有止痛生肌、化瘀解毒、清热凉血等作用，用于各种原因引起的烧伤、烫伤。考虑到烧伤液中的60%可能会给患者带来一定的刺激性，长时间存放易挥发等问题，课题组对该制剂进行了改进，制备了芩榆烧伤凝胶。课题组前期药效学研究表明，芩榆烧伤凝胶对烫伤皮肤有促愈合作用，同时具有较好的抗炎镇痛和抗菌作用，与原制剂芩榆烧伤液作用相当[1]。

在前期研究的基础上，为评价其用药安全性，本课题进行了皮肤急性毒性试验、皮肤刺激性试验及皮肤过敏性试验，评价其皮肤用药的安全性，为临床用药提供依据。现报道如下：

1 动物与试药

1.1 供试品

芩榆烧伤凝胶组：0.5 g（生药）/g，批号：20121013。芩榆烧伤凝胶高剂量组：1.5 g（生药）/g，由浸膏粉和蒸馏水临用前配制成稠膏。芩榆烧伤凝胶、芩榆烧伤高剂量和空白基质组用样品均由新疆维吾尔自治区药物研究所维吾尔药分析实验室提供。

1.2 试剂

羧甲基纤维素钠（CMC-Na，黏度：300～600，安徽山河药用辅料股份有限公司，批号：20110904；黏度：800～1200，上海山浦化工有限公司，批号：20110401），低取代羟丙基纤维素（L-HPC，湖州展望化学药业有限公司，批号：20110426），高取代羟丙基纤维素（HHPC，黏度：75～150，批号：424851；黏度150～300，批号：55024，购自北京凤礼精求商贸有限责任公司），羟丙基甲基纤维素（HPMC，湖州展望化学药业有限公司，批号：20110509），聚乙烯吡咯烷酮-K30（PVP-K30，购自北京凤礼精求商贸有限责任公司，批号：G01757PTO），甘油（浙江遂昌惠康药业有限公司，批号：20120415）、苯甲酸钠（武汉有机实业有限公司，批号：Y-100330003）；黄芩、关黄柏、地榆和白及等均购自新疆奇康哈博维药有限公司，经新疆维吾尔自治区药物研究所何江副研究员鉴定符合《中国药典》2010年版规定。2，4-二硝基氯苯，天津市光复精细化工研究所，批号：2005 0323；无水乙醇，天津市致远化学试剂有限公司，批号：20090628。

1.3 动物

SD大鼠，体重180～220 g；健康豚鼠，体重280～320 g，雌雄各半，均由新疆实验动物研究中心提供，实验动物生产许可证号分别为：SCXK（新）2011-0001和SCXK（新）2011-0002。

2 方法与结果

2.1 药物组成及制备工艺

2.1.1 药物组成

黄芩100 g，关黄柏66.7 g，地榆66.7 g，白及16.7 g，冰片2 g。

2.1.2 制备工艺

以上五味，地榆粉碎成粗粉，用适量5%乙醇做溶剂，浸渍72 h后，加30倍量5%乙醇进行渗漉，流速为300mL/（min·kg），收集渗漉液，减压浓缩（0.08mPa，60℃）至相对密度为1.20～1.25（60℃）的清膏，真空干燥（0.08mPa，60℃），粉碎，过160目，备用；黄芩和关黄柏粉碎成粗粉，用适量70%乙醇做溶剂，浸渍12 h后，加40倍量70%乙醇进行渗漉，流速为200mL/（min·kg），收集渗漉液，减压浓缩（0.08 mPa，60℃）至相对密度为1.20～1.25（60℃）的清膏，真空干燥（0.08 mPa，60℃），粉碎，过160目，备用；白及粉碎成粗粉，加14倍量水煎煮2次，每次1.5 h，滤过，合并滤液，浓缩至药材∶药液=1∶15（g/g），备用。将120 g H-HPC和1.8 g苯甲酸钠加入白及水提液中分散均匀，溶胀过夜；再将100 g甘油加入H-HPC凝胶基质中，搅拌均匀；再将上述地榆浸膏、黄芩、关黄柏浸膏，加入凝胶基质中，搅拌均匀；取冰片加适量乙醇使溶解，加入上述基质中，搅拌均匀，加注射用水至500 g，即得[2]。

2.1.3 用法

外用，涂抹于洁净创面，每日3～4次。

2.2 皮肤急性毒性试验

2.2.1 试验分组

选用健康SD大鼠40只，体重180～220 g，雌雄各半，于给药前24 h剔去大鼠颈背部毛，每侧备皮面积6 cm×6 cm，依性别、体重随机分为5组，分别为空白基质组、芩榆烧伤凝胶完整皮肤组、芩榆烧伤凝胶破损皮肤组、芩榆烧伤凝胶高剂量完整皮肤组、芩榆烧伤凝胶高剂量破损皮肤组，每组8只。破损皮肤的制备采用无菌9号针在大鼠备皮区划“#”字，以渗血为度。

2.2.2 给药方法

制作破损皮肤模型当天各给药组均采用最大给药量开始涂抹给药，给药体积以均匀涂布备皮区为宜，约40 mg/cm2。每天给药4次，前3次给药后敷贴3 h后用温水除去受试物，末次给药后24 h用温水除去受试药[3]。

2.2.3 观察指标

去除受试物后肉眼观察并记录体重变化、饮食、外观、分泌物、排泄物、死亡情况及中毒反应（中毒反应的症状、严重程度、起始时间、持续时间、是否可逆）等。对濒死及死亡动物及时进行解剖，连续观察14 d。

2.2.4 结果

实验结果表明，在试验观察期内芩榆烧伤凝胶、芩榆烧伤凝胶高剂量组以及空白基质组外用时对完整皮肤和破损皮肤的SD大鼠的动物活动行为无改变，饮食正常，毛发有光泽，眼及耳鼻无分泌物，排泄物正常，无死亡及中毒情况，与空白基质组比较，各给药组间动物体重增长率均无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。提示芩榆烧伤凝胶在大鼠皮肤外用无明显急性毒性。结果见表1、2。

表1 芩榆烧伤凝胶急性毒性实验期内各组动物一般情况

2.3 急性皮肤刺激性试验

2.3.1 试验分组

取健康白色豚鼠20只，体重280～320 g，于实验前24 h，用动物电推剪剔去豚鼠颈背部毛（每侧3 cm× 3 cm，无红斑、水肿及破损）；脱毛后依性别、体重随机分两组，分别为芩榆烧伤凝胶完整皮肤组和芩榆烧伤凝胶破损皮肤组，每组10只，其中破损皮肤组动物在脱毛基础上，用消毒过的9号针在受试动物脱毛区左侧划“#”字，以渗血为度，制作破损皮肤模型。

2.3.2 给药方法

每组豚鼠左侧脱毛区为受试物区涂抹芩榆烧伤凝胶剂，右侧为对照区给予空白基质。受试动物左右脱毛区均给药40 mg/cm2，4次/d，每次给药后玻璃纸覆盖无刺激胶布固定4 h，后除去受试物并用温水洗净给药部位[4-5]。

表2 芩榆烧伤凝胶急性毒性实验中各组大鼠毒性情况及体重变化情况（g，±s）

表2 芩榆烧伤凝胶急性毒性实验中各组大鼠毒性情况及体重变化情况（g，±s）

组别动物数（只）死亡（只）动物体重给药前用药后7 d用药后14 d体重增长系数（%）空白基质组芩榆烧伤凝胶完整皮肤组芩榆烧伤凝胶破损皮肤组芩榆烧伤凝胶高剂量完整皮肤组芩榆烧伤凝胶高剂量破损皮肤组8 8 8 8 8 0 0 0 0 0 201.3±14.1 200.6±15.0 201.0±13.6 204.8±11.5 201.1±14.2 226.9±16.5 228.6±22.1 222.5±15.3 230.4±15.3 227.3±13.8 247.9±19.6 249.1±23.7 243.3±12.5 249.1±17.8 247.0±14.3 23.2 24.2 21.0 21.7 22.8

表3 皮肤刺激性反应评分标准

表4 皮肤刺激性强度评分标准

2.3.3 观察指标及评价方法

去除药物后1、24、48、72 h观察并记录用药部位有无红斑、水肿等情况。对每只豚鼠根据皮肤刺激性反应评分标准进行评分，并计算平均分，根据皮肤刺激强度评分标准进行评价。

2.3.4 结果

参照表3、4的皮肤刺激性反应和强度评分标准，通过肉眼观察豚鼠的完整皮肤及破损皮肤均无红斑、水肿以及充血的出现。去除药物后72 h观察未发现豚鼠有不正常行为，呼吸正常，饮食正常，且各组72 h内各个时间点刺激反应评分为0。提示芩榆烧伤凝胶对豚鼠完整及破损皮肤均无刺激性。见表5。

表5 芩榆烧伤凝胶皮肤刺激性实验结果（分）

2.4 主动皮肤过敏性实验[6-7]

2.4.1 试验分组

取健康白色豚鼠40只，体重280～320 g，于实验前24 h，用动物电推剪剔去豚鼠颈背部毛（每侧3 cm× 3 cm，无红斑、水肿及破损）；脱毛后依性别、体重随机分4组，每组10只，分别为芩榆烧伤凝胶组、芩榆烧伤凝胶高剂量组、空白基质组、2，4-二硝基氯苯阳性对照组。

2.4.2 给药方法

2.4.2.1 致敏接触将受试物均匀涂布于左侧受试区，约40mg/cm2，给药后玻璃纸覆盖无刺激胶布固定6 h，第7天和第14天以同样方法各重复1次，阳性致敏组致敏浓度为1%的2，4-二硝基氯苯。

2.4.2.2 激发接触于末次给受试物后14 d，将受试物均匀涂布与右侧受试区，约40 mg/cm2，给药后玻璃纸覆盖无刺激胶布固定6 h，阳性致敏组激发浓度为0.1%的2，4-二硝基氯苯。6 h去除受试物后，即刻观察。

2.4.3 观察指标及评分方法

去除药物后1、24、48、72 h再次观察皮肤过敏情况，按皮肤过敏反应评分标准给予评分，并记录各组各时间的平均分值，同时密切观察动物是否有哮喘、站立不稳或休克等严重的全身过敏反应出现。通过皮肤致敏性评价标准计算致敏反应发生率。将出现皮肤红斑、水肿或全身过敏反应的动物例数（不论程度轻重）除以受试物总数计为致敏发生率。

2.4.4 试验结果

参照表6、7的皮肤过敏反应程度和评价标准，各组动物均未出现休克或死亡等严重全身过敏反应；芩榆烧伤凝胶组受试动物均未出现红斑、水肿等过敏反应；芩榆凝胶高剂量组激发后1 h出现弱致敏反应，致敏度为10.0%，24 h时红斑及水肿过敏情况逆转；阳性对照组给药区域出现不同程度的红斑及水肿，致敏率为100.0%。结果见表8。

表6 皮肤过敏反应程度的评分标准

表7 皮肤致敏性评价标准

表8 主动皮肤过敏反应实验结果

3 讨论

芩榆烧伤液是多年临床应用的经验方，处方由黄芩、关黄柏、地榆、白及等中药组成，为解放军69220部队医院开发的用于治疗烧烫伤的制剂，课题组将该方中药材采用30倍量60%乙醇，以7 mL/min流速经渗漉法提取后得到该制剂。此方具有止痛生肌、化瘀解毒、清热凉血等作用，用于各种原因引起的烧伤、烫伤。课题组前期安全性研究表明，芩榆烧伤液在大鼠完整或破损皮肤用药，在实验观察期内均未出现死亡，动物给药部位皮肤及全身也未出现其他与给药相关的急性毒性反应。芩榆烧伤液对豚鼠完整皮肤及破损皮肤均无刺激性。芩榆烧伤液在实验观察期内对豚鼠皮肤外用给药未引起主动皮肤过敏反应。药效学研究表明，芩榆烧伤液对大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合有较好的促进作用，具有一定的抗炎作用，在体外对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌均有一定的抑菌作用[8-10]。

考虑到芩榆烧伤液中60%的醇可能会刺激烧烫伤患者创面皮肤、作用于病灶部位的药物浓度降低较快、长期存放不稳定等问题，芩榆烧伤凝胶在保持芩榆烧伤液处方不变前提下，运用现代制药技术，结合凝胶剂药物，与能形成大分子网络体系的辅料混合制成半流体制剂，该极性可较长时间与作用部位紧密黏附，有较好的生物相容性，无油腻感，通过改进后可能更有利于药物释放、吸收，稳定性可能也会有所改善等。

为更好地探讨用药的安全性，采用最大给药量法进行大鼠急性毒性试验，观察给药后14 d内大鼠的行为活动、饮食、用药部位皮肤以及体重增长率，与空白基质组比较无显著性差异；皮肤局部过敏性试验高剂量组（临床剂量3倍）激发后1 h出现弱致敏性，24 h后情况逆转，红斑及水肿现象消失。此外，本药物的皮肤刺激性试验研究均无异常，提示该制剂临床拟用剂量用于皮肤是安全的。

[1]胡海蛟，张莉，黄华，等.芩榆烧伤凝胶对烫伤的药效学研究[J].中药药理与临床，2013，29（2）：160-163.

[2]康雨彤，贺金华，毛艳，等.芩榆烧伤凝胶制备工艺优选[J].医药导报，2013，32（8）：1085-1088.

[3]《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》课题研究组.中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则[S].北京，2005.

[4]陈奇.中药药理研究实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2006：159-162.

[5]《中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则》课题研究组.中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则[S].北京，2005：12-15.

[6]国家药典委员会.中药、天然药物免疫毒性（过敏性、光过敏反应）研究的指导原则[S].北京：中国医药科技出版社，2005：10-13.

[7]周一平，陈奇有，陈四艳，等.咪喹莫特乳膏的非临床安全性评价[J].中国新药杂志，2005，14（4）：432-435.

[8]李维强，王云飞，苏庆，等.正交试验法优选芩榆烧伤液提取工艺研究[J].解放军药学学报，2011，27（4）：293-295.

[9]李寅，杨巧丽，王雪，等.芩榆烧伤液的特殊安全性试验研究[J].中国医药导报，2012，9（6）：31-35.

[10]张晗，杨巧丽，李寅，等.芩榆烧伤液治疗烧烫伤的主要药效学研究[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（15）：152-155.

Preparation technology and security experiment of Qinyu Burns Gel

YANG Qiaoli LIU Yan SHI Yuzhu WANG Xue YAO Hua WANG Linlin KANG Yutong HU Haijiao HUANG Hua
Institute of Meteria Medica of Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi 830004,China

Objective To preparate raditional Chinesemedicine——Qinyu Burns Gel(QBG)and to evaluate the safety. Methods The raw material such as Astragali Radix,Phellodendri Amurensis Cortex,Radix Sanguisorbae were turned into solid by a serial of modern treatment technology-soak,percolate extraction,concentrated,and dried by vacuum. Meanwhile,Bletilla striata water extracts were concentrated.Borneol were dissolved into rthanol solution.Then,all of them were mixed with Glc,glycerin H-HPC and Natrium benzoicum,which were made QBG.The Security of QBG were evaluated.Results The experimental results showed that itwas neither of urgent toxicity,stimulary function,nor of allergy-inducing response.Guinea pig skin local irritation test results showed that the sensitization rate of preparation of high dose group[1.5 g(crude drug)/g]was 10.0%,there were weak allergenic,the situation reversed after 24 h, erythema and edema disappeared.The sensitization rate of Qinyu Burns Gel[0.5 g(crude drug)/g]was 0.0%.Conclusion QBG isa newly externally-applied burns gelwhich can be used safely.

Qinyu Burns Gel;Preparation technology;Security experiment

R286

A

1673-7210（2014）08（b）-0090-03

2014-04-16本文编辑：卫轲）

新疆维吾尔自治区科技计划项目（编号2011 10105）。

杨巧丽（1979.12-），女，河南长葛人，硕士；研究方向：中药药理与毒理。

黄华（1965.6-），女，江西樟树人，硕士，研究员，新疆药物研究所药理2室主任；研究方向：中药药理与毒理。