Nestin 和Ki67在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义

段爱红 孙志强 杨丽萍 胡志强

1.河北省邯郸市中心医院妇科，河北邯郸056001；2.河北省邯郸市中心医院神经外科，河北邯郸056001；3.河北省邯郸市中心医院放射科，河北邯郸056001

Nestin 和Ki67在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义

段爱红1孙志强2杨丽萍1胡志强3

1.河北省邯郸市中心医院妇科，河北邯郸056001；2.河北省邯郸市中心医院神经外科，河北邯郸056001；3.河北省邯郸市中心医院放射科，河北邯郸056001

目的探讨Nestin及Ki67在卵巢上皮性癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法对2007年1月～2009年1月邯郸市中心医院妇科60例卵巢癌患者及20例卵巢正常患者的病理资料进行回顾性分析，采用免疫组化SP法检测卵巢上皮性癌标本及正常组织中Nestin及Ki67的表达，分析并比较正常卵巢组织及不同病理类型、FIGO分期、残余肿瘤直径的卵巢组织中Nestin及Ki67的表达情况。结果①卵巢上皮性癌标本中Nestin和Ki67阳性表达率（38.5%、76.7%）明显高于正常卵巢组织（5.0%、15.0%），两者相比，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。②组织分化程度高级别的卵巢癌组织中Nestin及Ki67阳性表达率明显高于低级别者（P＜0.05）；FIGO分期越高、残余肿瘤直径越大，Nestin、Ki67阳性表达率越高（均P＜0.05）。③Nestin与Ki67在卵巢癌中的表达无明显相关性（r=0.176，P=0.13）。结论Nestin与Ki67的表达与卵巢癌的发生、发展有密切关系，对Nestin与Ki67的检测可用于判断卵巢上皮性肿瘤的恶性程度及其预后。

卵巢癌；Nestin；Ki67；免疫组化

卵巢上皮性癌（epithelial ovaian cance，EOC）简称卵巢癌，占卵巢恶性肿瘤的90%，是病死率最高的生殖道恶性肿瘤，卵巢癌属于对化疗中-高度敏感肿瘤，目前的标准治疗是肿瘤细胞减灭术辅以铂类为基础的6～8个疗程的联合化疗。70%的患者停止化疗后会复发，复发患者的治疗仍以化疗为主，但多数患者表现为化疗耐药，5年生存率为30%左右[1]。迄今，卵巢癌的病死率仍位于妇科恶性肿瘤之首。本研究采用免疫组化SP法检测原发性卵巢癌中Nestin与Ki67的表达情况，并分析其与卵巢癌临床病理的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

对2007年1月～2009年1月邯郸市中心医院妇科60例卵巢癌患者的病理资料进行回顾性分析，所以卵巢癌患者术前均未接受化疗或放疗，术后均经病理确诊，病历资料完整。年龄31～66岁；浆液性腺癌25例，宫内膜样癌24例，黏液性腺癌11例；2009年国际妇产科联盟（FIGO）[2]手术-病理分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期5例，Ⅲ期40例，Ⅳ期7例；组织分化程度低级别相当于FIGO高中分化（G1/G2）者38例、高级别相当于低分化（G3）者22例；术后残余肿瘤直径＜1 cm者48例，≥1 cm者12例。同时选择同期20例因子宫肌瘤等子宫良性病变行手术治疗的正常卵巢组织进行对照研究。

1.2 主要试剂

鼠抗人单克隆抗体及免疫组化S-P试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。免疫组化方法采用S-P，以PBS代替一抗为阴性对照，阳性对照片由福州迈新生物技术开发公司提供。

1.3 方法

采用免疫组化SP法检测卵巢上皮性癌标本及正常卵巢组织中Nestin及Ki67的表达，具体方法按试剂盒说明书进行。

1.4 判断标准

Nestin阳性细胞为细胞质内出现棕黄色颗粒，Ki67以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性。判定标准：无棕黄色颗粒为（-）；染色弱、染色范围＞50%或染色强、染色范围25%～50%者为（＋）；染色强，染色范围＞75%者为（+++）；介于（+）和（+++）之间为（++），（+）及以上者为阳性表达[3]。

1.5 统计学方法

采用SPSS 14.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验；Spearman相关性检验分析Nestin与Ki67在卵巢癌中表达的相关性，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Nestin与Ki67在正常卵巢及卵巢癌组织中的表达情况

Nestin的染色阳性为细胞质内出现棕黄色颗粒，Ki67的染色阳性为胞核内出现棕黄色颗粒（图1、2）。Nestin及Ki67在正常卵巢组织中的阳性表达率（5.0%、15.0%）低于卵巢癌组织中（38.5%、76.7%），两者相比，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表1。

图1 卵巢癌组织中Nestin的表达（DAB×400）

图2 卵巢癌组织中Ki67的表达（DAB×400）

表1 不同卵巢组织中Nestin和Ki67的表达情况

2.2 卵巢癌组织中Nestin、Ki67的表达与临床病理特征的关系

Nestin及Ki67在浆液性、黏液性、子宫内膜样卵巢癌组织中的阳性表达差异无统计学意义（P＞0.05）。在不同的卵巢癌组织分化程度中，高级别者Nestin及Ki67的阳性表达率明显高于低级别者，差异有统计学意义（P＜0.05）；在FIGOⅠ～Ⅱ期卵巢癌中Nestin及Ki67表达的阳性率明显低于FIGOⅢ～Ⅳ期，两者相比，差异有统计学意义（P＜0.05），残余肿瘤＜1 cm与≥1 cm者Nestin阳性表达率分别为37.5%、75.0%，Ki67阳性表达分别为56.3%、91.7%，两种残余肿瘤相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同临床病理卵巢癌组织与Nestin和Ki67表达的关系

2.3 Nestin与Ki67在卵巢癌中表达的相关性

31例卵巢癌组织中，Nestin和Ki67均为阳性表达，Ki67表达阳性而Nestin阴性表达者23例，Nestin阳性表达而Ki67阴性表达者17例；采用计数资料的相关分析显示，Nestin与Ki67在卵巢癌中的表达无明显相关性（r=0.176，P=0.13）。

3 讨论

肿瘤的发生、发展是多阶段、多步骤演变的过程，最终在生物学方面表现为失控性生长，即过度增殖。肿瘤细胞的过度恶性增殖又为进一步侵入脉管发生远处转移奠定了基础，而后者也正是导致死亡的最主要因素，在肿瘤研究中发现，Nestin是第Ⅳ类中间丝蛋白，目前被广泛应用于神经干细胞的鉴定，最新研究发现Nestin在多种恶性肿瘤细胞中均有表达，如恶性胶质瘤、胃肠道间质肿瘤、睾丸间质肿瘤、恶性黑色素瘤，Nestin表达强度和肿瘤恶性程度和预后呈正相关，如在黑色素瘤中，恶性度越高Nestin表达越强，在远处转移的肿瘤中Nestin表达更强；恶性度低的大脑胶质瘤Nestin表达强度远远低于恶性度高者[4-7]。

本研究应用免疫组织化学方法首次检测了Nestin在不同恶性程度卵巢癌中的表达，研究结果显示，Nestin表达于部分卵巢癌标本中，在卵巢癌组织中Nestin的阳性表达率与组织类型无关（P＞0.05）；Nestin阳性表达率随FIGO分期的进展而升高，Ⅲ～Ⅳ期与Ⅰ～Ⅱ期相比，差异有统计学意义（P＜0.05），残余肿瘤＞1 cm组和残余肿瘤＜1 cm组中阳性表达率分别为75.0%、37.5%，二者相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。徐亮等[8]通过将Nestin和CD133作为干细胞标志物检测其在胶质瘤中的表达，其结果显示随着胶质瘤肿瘤级别的增高，肿瘤标志物Nestin表达也增加，Kaplan-Meier生存曲线分析表明，Nestin高表达组患者生存率低，低表达组生存率高。

本研究提示Nestin可作为判断卵巢癌恶性程度及预后的一种指标，Nestin表达越高，肿瘤组织中CSCs的数量越多，肿瘤的恶性程度就越高，在卵巢癌疾病发展过程中表现出耐药，其预后越差，生存率越低，从而预测肿瘤的恶性程度及患者的生存率，为卵巢癌的诊断和预后判断提供帮助。

Ki67是反映恶性肿瘤细胞增殖活性的一项重要分子标志，其表达范围覆盖了除G0期以外的各增殖周期细胞，是目前检测肿瘤增殖活性和增殖速率最可靠的指标[9-11]。有研究认为Ki67可能是具有蛋白结合特性的重要结构，在细胞有丝分裂中起着维持规则DNA结构的重要作用，Ki67对于预见肿瘤生物学行为，评估预后和选择适当的治疗措施具有重大意义[12-15]。Ki67在浆液性腺癌、内膜样癌、黏液性腺癌中的阳性表达差异无统计学意义（P＞0.05），说明Ki67表达与细胞类型无关。Ki67阳性表达率随FIGO分期的进展而升高，Ⅲ期～Ⅳ期与Ⅰ期～Ⅱ期相比，差异有统计学意义；残余肿瘤＜1 cm与残余肿瘤≥1 cm的阳性表达相比有统计学意义（P＜0.05），这表明晚期及高级别卵巢癌具有更高的增殖活性，Ki67的表达可用于判断卵巢癌恶性程度与与肿瘤的侵袭性，这与国内外学者的研究结果一致[16]。

综上所述，肿瘤的生物学行为包括增殖、浸润、转移、复发等涉及到许多生物因子和蛋白的表达，本研究显示，卵巢组织中Nestin和Ki67表达无明显相关性，二者表达上调可能与卵巢癌的发生发展、浸润、转移过程相关，与患者的组织学类型无关。因此，本研究认为联合检测Nestin和Ki67有利于阐明二者在卵巢肿瘤发生发展、浸润、转移中的演变规律，为卵巢癌早期诊断提供参考依据。

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Expression and clinical significance of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer

DUAN Aihong1SUN Zhiqiang2YANG Liping1HU Zhiqiang31.Department of Gynecology,Central Hospital of Handan City,Hebei Province,Handan056001,China;2.Department of Neurosurgery,Central Hospital of Handan City,Hebei Province,Handan056001,China;3.Department of Radiology,Central Hospital of Handan City,Hebei Province,Handan056001,China

Objective To investigate the expression of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer and the relationship between their expression and clinicopathologic characteristics.Methods pathological files of 60 patients with epithelial ovarian carcinoma and 20 patients with nomal ovarian tissues from January 2007 to January 2009 in Gynecology Department of Central Hospital of Handan City were retrospective analyzed,the Nestin and Ki67 were detected by immunohistochemistry(SP method),the expression of Nestin and Ki67 in nomal ovarian and epithelial ovarian cancer tissues with different pathological pattern,FIGO stages and residual tumor size were analyzed and compared.Results①The positive expression rate of Nestin Ki67 in ovarian epithelial carcinomas(38.5%,76.7%)were higher than those in normal ovarian tissues(5.0%，15.0%),the differences were statistically significant(all P＜0.05).②The positive expression of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer tissues with high differentiation degree was higher than those in with low differentiation degree(all P＜0.05).The higher FIGO stage and larger residual tumor size,the higher positive expression of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer tissues.③There was no significant correlation between Nestin and Ki67 expression(r=0.176,P=0.13).Conclusion The expressions of Nestin and Ki67 are associated with the development and progression of the ovarian epithelial neoplasm,the detection of Nestin and Ki67 may be helpful to estimate the malignant degree and prognosis of the epithelial ovarian carcinoma.

Ovarian cancer;Nestin;Ki67;Immunohistochemistry

R737.31

A

1673-7210（2014）02（b）-0024-04

2013-10-12本文编辑：任念）

段爱红（1974.9-），女，硕士研究生，副主任医师；研究方向：妇科肿瘤。