HPLC法测定栀子金花分散片中盐酸小檗碱的含量*

陈 威，赵东凤，史红娟，刘喜纲，常金花，刘翠哲

(河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院中药研究所，河北承德 067000)

HPLC法测定栀子金花分散片中盐酸小檗碱的含量*

陈 威，赵东凤，史红娟，刘喜纲，常金花，刘翠哲△

(河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院中药研究所，河北承德 067000)

目的:建立栀子金花分散片中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法:采用HPLC法测定，色谱条件:Diamonsil-C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，流动相为乙腈-0.6%磷酸二氢钠溶液(30:70)，流速为1.0ml/min，检测波长为350nm。结果:盐酸小檗碱在2.5-50μg范围内线性关系良好，r=0.9995;盐酸小檗碱加样回收率(n=6)为100.85%，RSD为3.7%;栀子金花分散片中盐酸小檗碱平均含量为0.633%。结论:本研究建立的HPLC测定栀子金花分散片中盐酸小檗碱含量的方法简便、重复性好，可用于栀子金花分散片中盐酸小檗碱的含量测定。

HPLC;盐酸小檗碱;栀子金花分散片

栀子金花丸由栀子、黄连、黄芩、黄柏、大黄、金银花、知母、天花粉等8味中药组成，收载于《中国药典》2010年版一部[1]。栀子金花丸的功能是清热泻火、凉血解毒，用于肺胃热盛、口舌生疮、牙龈肿痛、目赤眩晕、咽喉肿痛、吐血衄血、大便秘结。栀子金花丸的传统剂型是水丸或蜜丸，存在服用量大、溶出慢等缺点，为此，将药材提取后加辅料制成了栀子金花分散片[2]。黄连和黄柏是栀子金花分散片的有效成分，二者均具有清热燥湿、泻火解毒等作用， 且主要成分均为盐酸小檗碱，控制盐酸小檗碱的含量即可同时控制栀子金花分散片中两味药的含量。为了更好的控制栀子金花分散片的质量，本研究参照文献[3-5]，建立了HPLC测定栀子金花分散片中盐酸小檗碱含量的方法，该方法简便、准确、重复性好。

1 仪器与试剂

JASCO高效液相色谱仪(UV-l5紫外可见检测器，RU-1580泵，CKChom色谱工作站,日本分光);JA2003电子天平(北京精科天平);AG-245电子分析天平(瑞士METTLER公司);北利离心机(北京时代北利离心有限公司);KQ2200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);盐酸小檗碱对照品(批号:110713-201212，中国药品生物制品检定所);栀子金花分散片(自制);乙腈(色谱纯，天津协和昊鹏色谱科技有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Dimonsil-C18柱(4.6mm×150mm，5μm);流动相:乙腈-0.6%磷酸二氢钠(30:70);检测波长:350nm;流速:1.0ml/min;柱温:25℃;进样量:20μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取60℃减压干燥4h的盐酸小檗碱对照品5.0mg置于100ml容量瓶中，加甲醇超声溶解，放冷后加甲醇定容至刻度，得对照品储备液。

2.2.2 供试品溶液的制备:精密称取研细的栀子金花分散片粉末135mg于50ml容量瓶中，加入适量70%甲醇，超声40min，放冷，加70%甲醇定容，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性溶液的制备:按处方制备缺少黄柏和黄连的空白样品，精密称取135mg，按照2.2.2供试品溶液的制备方法制备。

2.3 专属性考察 精密吸取2.2项下的三种溶液各20μl，注入色谱仪，记录色谱图，结果表明盐酸小檗碱与其它杂质峰分离良好，盐酸小檗碱保留时间为10.1min，且阴性溶液无干扰，结果见附图。

附图 盐酸小檗碱液相色谱图

2.4 线性关系考察 分别精密量取2.2.1中的对照品储备溶液0.5ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml，用甲醇定容至10ml容量瓶中，按2.1的色谱条件测定峰面积，以进样量X为横坐标，峰面积值Y为纵坐标绘制工作曲线，得盐酸小檗碱回归方程:Y=71249X+84810，r=0.9995表明盐酸小檗碱在2.5-50μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 取2.2.1中的对照品储备液4ml置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，重复进样6次，测定盐酸小檗碱的峰面积，结果盐酸小檗碱RSD值为0.67%，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验 取2.2.2中的供试品溶液1份，分别放置0、2、3、4、5、6、8、24h后进样，测定峰面积，盐酸小檗碱峰面积的RSD为1.10%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7 重复性试验 分别精密称取栀子金花分散片粉末6份，按照2.2.2项供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，分别进样，并随行对照品溶液，用外标一点法测得盐酸小檗碱含量，结果见表1。盐酸小檗碱平均含量为0.63%，RSD为2.6%(n=6)，表明重复性良好。

表1 重复性试验结果

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的栀子金花分散片粉末6份置于25ml容量瓶中，分别精密加入44.8μg的盐酸小檗碱对照品，按供试品溶液制备方法制备后，按照2.1的色谱条件进样，测得盐酸小檗碱的平均加样回收率(n=6)为100.85%，RSD=3.7%，见表2。

表2 加样回收试验结果

2.9 样品测定 取自制栀子金花分散片粉末3份，按2.2.2供试品溶液的方法制备，按2.1的色谱条件进样，外标一点法测定3次，盐酸小檗碱的含量分别为:0.63%、0.64%和0.64%。

3 讨论

文献报道盐酸小檗碱的色谱峰有拖尾现象[6]。本研究在实验中亦发现，盐酸小檗碱的色谱峰拖尾比较严重。本研究比较了不同比例组成的流动相，如乙腈-0.05%磷酸、乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-0.5%冰乙酸溶液等，发现峰形不好。加入磷酸二氢钠作为扫尾剂去除拖尾现象，但效果不佳，并且磷酸二氢钠加入量过多会造成峰的分离效果不好，最后确定磷酸二氢钠的浓度为0.6%，虽然峰行略有拖尾，但分离良好。研究过程中发现，盐酸小檗碱在250nm、265nm和350nm处均有吸收，选择350nm作为检测波长效果较好。在制备供试品溶液时，分别采用不同的时间(20、30、40、50min)超声提取栀子金花分散片中的盐酸小檗碱，发现超声40min盐酸小檗碱提取完全。

本研究所建立的含量测定方法色谱峰分离良好无干扰，重复性良好，加样回收率合格，且采用超声方法提取盐酸小檗碱操作简单方便，可用于栀子金花分散片中盐酸小檗碱的含量测定。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部[S].北京:化学工业出版社，2010.879-880.

[2]赵文普，崔英慧，刘喜纲，等.栀子金花分散片的制备[J].中国医院药学杂志，2012，32(8):584-587.

[3]郭小龙，蔡敏，陈勇，等.液相色谱法同时测定栀子金花丸中栀子苷和盐酸小檗碱的含量[J].湖北大学学报(自然科学版)，2007，29(3):283-285.

[4]李中文，蔡绍松，魏红，等.桂林西瓜霜喷剂中盐酸小檗碱快速含量测定方法的研究[J].药物分析杂志，2009，29(4): 659-662.

[5]王雪芹，黄海伟，俞如英.盐酸小檗碱及其相关物质分离方法的研究[J].药物分析杂志，2002，22(1):67-69.

[6]孙行之，杨秀裴，余玉木，等.HPLC同时测定散瘀消肿膏中3种有效成分的含量[J].海峡药学，2010，22(11):79-81.

DETERMINATION OF BERBERINE HYDROCHLORIDE CONTENT IN ZHIZIJINHUA DISPERSIBLE TABLET BY HPLC

CHEN Wei, ZHAO Dong-feng, SHI Hong-juan, et al

(Hebei Key Laboratory of Study and Exploitation of Traditional Chinese Medicine, Institute of Chinese Materia Medica, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To establish a method for determining of berberine hydrochloride content in ZhiziJinhua Dispersible Tablet.Methods:HPLC was used to determine berberine hydrochloride content in ZhiziJinhua Dispersible Tablet. The chromatographic column was Diamonsil-C18(4.6×150mm, 5μm), with acetonitrile-0.6% NaH2PO4(30: 70) as mobile phase, fl ow rate: 1.0ml/min, detection wavelength: 350nm.Results:The linear range of berberine hydrochloride was 2.5-50μg (r=0.9995); the average recovery of berberine hydrochloride was 100.85%, RSD was3.7% (n=6). The average content of berberine hydrochloride in ZhiziJinhua Dispersible Tablet was 0.633%.Conclusions:Determination of berberine hydrochloride content in ZhiziJinhua Dispersible Tablet by HPLC in this study is simple and reproducible, and can be used for determining berberine hydrochloride content in ZhiziJinhua Dispersible Tablet.

HPLC; Berberine hydrochloride; ZhiziJinhua Dispersible Tablet

R917

A

1004-6879(2014)01-0017-03

2013-06-04)

* 承德市科学技术研究与发展计划项目(201021020)

△ 通讯作者