正交试验优选消疹止痒胶囊药材的提取工艺

张 勇，红 梅，锡林通嘎拉嘎，孟 竹，罗 璇（内蒙古自治区人民医院药学处，呼和浩特 010010）

消疹止痒胶囊是在我院名老中医传统方剂的基础上研制而成的纯中药制剂，广泛用于血虚风热所致的各种皮肤疾病，尤其对于急、慢性荨麻疹的疗效较好[1-2]。该方由川芎、生地、桑白皮、地骨皮、白鲜皮、麻黄、蝉蜕、诃子等中药组成，具有养血疏风、清热止痒之功效，原以煎剂应用于临床达40余年，疗效甚佳，深受广大患者认可。但是由于剂型的限制，使用上有诸多不便，故研制成胶囊。方中川芎有效成分阿魏酸微溶于水，可溶于热水，水溶液中稳定性差，见光易分解，易溶于乙醇、甲醇、丙酮，难溶于苯、石油醚[3-4]；诃子中含有大量鞣质，其主要成分为诃子酸、没食子酸等；没食子酸易溶于水、乙醇等，几乎不溶于苯、氯仿与石油醚[5]。为发挥其最大临床疗效，本研究根据药物有效成分的性质和药理作用，经过多次试验和查阅有关文献[6-10]，确定以阿魏酸、没食子酸的含量为指标，采用正交试验法对提取工艺进行系统考察，选出消疹止痒胶囊最优提取工艺。

1 材料

1.1 仪器

LC-10AT VP型高效液相色谱仪，包括LC-10ATvp泵、SCL-10Avp型控制器、SPA-10Avp型检测器、CLASS-VP色谱工作站（日本岛津公司）；J6MC型高速离心机（美国Beck-Man公司）。

1.2 药材

川芎、生地、桑白皮、地骨皮、白鲜皮、麻黄、蝉蜕、诃子均购自内蒙古医药有限责任公司，经笔者鉴定为真品。

1.3 试剂

阿魏酸对照品（批号：0773-9910）、没食子酸对照品（批号：0831-9501）均购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为高纯水。

2 方法与结果

2.1 正交试验优选消疹止痒胶囊药材醇提工艺

2.1.1 提取工艺 精密称取样品9份，每份样品按处方量分别精密称取川芎、桑白皮、地骨皮、麻黄、白鲜皮按L9（34）正交试验表进行乙醇提取，减压回收乙醇至半稠膏，加入处方量一半的蝉蜕细粉，混匀，干燥，粉碎至粉末，备用。取本品0.5 g，研细，精密称定，加20 ml 0.5%碳酸钠溶液，超声处理30 min，离心，取上清置分液漏斗中，药渣用0.5%碳酸钠溶液洗涤3次，每次10 ml，离心，取上清并入分液漏斗中，用HCl调pH至1～2，用25、25、20、20、20 ml乙醚萃取5次，乙醚液蒸干，用30%甲醇溶液微热使溶解，定量转移至10 ml棕色量瓶中，并用30%甲醇定容，离心，取上清，得消疹止痒胶囊醇溶药材溶液。

2.1.2 含量测定（1）色谱条件。色谱柱：Phenomen kromasil C18（250 mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-1%冰醋酸（30 ∶70，V/V）；检测波长：316 nm；柱温：35 ℃；进样体积：10 μl。理论板数按阿魏酸峰计不得低于3 000。（2）对照品溶液的制备。取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释制成每1 ml含10µg的阿魏酸对照品溶液，即得。（3）标准曲线的制备。精密称取阿魏酸对照品2.5 mg，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇定容，摇匀，精密吸取1、2、3、4、5、6 ml溶液，分别置10 ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀。按“2.1.2（1）”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以峰面积积分值（y）为纵坐标，药物质量浓度（x）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为y＝7 515 745.48x－735.49（r＝0.999 9）。结果表明，阿魏酸质量浓度在0.053 8～0.322 8 μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.1.3 正交试验优选醇提工艺 根据文献[11-12]及预试验，以阿魏酸含量为评价指标，乙醇的体积分数（A）、乙醇的用量（B）、回流时间（C）、回流次数（D）为考察因素，每个因素选取3个水平，采用L9（34）正交表进行试验。因素水平见表1；正交试验结果见表2；方差分析结果见表3。

表1 因素与水平（n＝3）Tab 1 Factors and levels（n＝3）

表2 正交试验结果（n＝9）Tab 2 Results of orthogonal test（n＝9）

表3 方差分析结果Tab 3 Analysis of variance

由表2、表3中可知，各因素对试验结果影响的大小顺序为：C＞A＞D＞B；由方差分析结果可见，乙醇的体积分数（A）、乙醇的用量（B）、回流时间（C）、回流次数（D）对阿魏酸含量的影响均无统计学意义（P＞0.05）。根据试验结果和实际生产情况，综合各因素，选定最优提取工艺为A3B1C3D3，即8倍量90%的乙醇提取3次，每次1.5 h。

2.2 正交试验优选消疹止痒胶囊药材水提工艺

2.2.1 提取工艺 精密称取样品9份，每份样品按处方量分别精密称取生地、诃子按L9（34）正交试验表进行水提取，减压浓缩至半稠膏，加入处方量一半的蝉蜕细粉，混匀，干燥，粉碎至粉末，备用。取本品0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，摇匀，称定质量，放置过夜，超声处理30 min，放冷，称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，水浴蒸干，残渣用流动相溶解，转移至25 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，得消疹止痒胶囊水溶药材溶液。

2.2.2 含量测定（1）色谱条件。色谱柱：Phenomen kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：2%甲醇的乙腈溶液-0.1%三乙胺、0.1%磷酸等比混合溶液（3 ∶97，V/V）；检测波长：220 nm；柱温：30 ℃；进样体积：20 μl。理论板数按没食子酸峰计算应不低于5 000。（2）对照品溶液的制备。取没食子酸对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 ml含15µg的没食子酸对照品溶液。（3）标准曲线的制备。精密称取没食子酸对照品0.374 mg，置25 ml棕色量瓶中，加流动相定容，摇匀，精密吸取1、2、4、6、8、10 ml溶液，按“2.2.2（1）”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以峰面积积分值（y）为纵坐标，药物质量浓度（x）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为y＝21 406.2x－120 506.5（r＝0.999 5）。结果表明，没食子酸质量浓度在0.014 96～0.149 6 μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.2.3 正交试验优选水提工艺 根据预试验[11-12]，以没食子酸含量为评价指标，加水量（A）、煎煮时间（B）、煎煮次数（C）、浸泡时间（D）为考察因素，每个因素选取3个水平，采用L9（34）正交表进行试验。因素水平见表4；正交试验结果见表5；方差分析结果见表6。

表4 因素与水平（n＝3）Tab 4 Factors and levels（n＝3）

表5 正交试验结果（n＝9）Tab 5 Results of orthogonal test（n＝9）

表6 方差分析结果Tab 6 Analysis of variance

从表5、表6中可以看出，各因素对试验结果影响的大小顺序为：A＞C＞D＞B：由方差分析结果可见，加水量（A）、煎煮时间（B）、煎煮次数（C）、浸泡时间（D）对没食子酸含量的影响均无统计学意义（P＞0.05）。根据试验结果和实际生产情况，综合各因素，选定最优提取工艺为A1B1C3D3，即8倍量水浸泡2 h后煎煮3次，每次1 h。

2.3 验证试验

按上述优选的最优工艺，制备3批消疹止痒胶囊（批号：20100916、20100917、20100918）样品，对工艺进行验证。依照该制剂质量标准方法进行含量测定[13]，测得阿魏酸的含量分别为0.082 0、0.082 2、0.078 3 mg/g，RSD＝2.72%；没食子酸的含量分别为2.814 0、2.796 0、2.809 0 mg/g，RSD＝0.93%。验证结果表明，优选出的工艺稳定可行。

3 讨论

本试验是综合处方中药物有效成分的理化性质和药理作用及生产实践等多方面的因素，经多次试验研究、分析比较而确定分别采用醇提和水提法[14]。川芎中主要含有挥发油、川芎嗪、阿魏酸、多糖等，桑白皮主要含有黄酮类衍生物、香豆类衍生物和三萜类化合物；地骨皮含有甜菜碱、β-谷甾醇、亚油酸、桂皮酸及多种酚性物质等；白藓皮、麻黄主要成分均为生物碱类，这些成分在醇中均有一定的溶解性，故采用醇提的方法提取。方中君药川芎因其有效成分川芎嗪易升华，在工艺制备过程中损失较大，成品中转移率较低，测定其含量无实际意义，故选择阿魏酸为指标性成分，运用高效液相色谱法对制剂中川芎的阿魏酸进行含量测定，通过L9（34）正交试验设计对工艺条件进行优选。

地黄为方中臣药，主要含梓醇等环烯醚萜苷类化合物和多糖，具有清热凉血、滋阴、提高人体免疫力等功效。地黄与诃子中的成分在水中具有一定溶解性，故采用水提法。但是，梓醇化学性质不稳定，易被氧化分解，所以选择以没食子酸（诃子）的含量为评价指标，对水提取工艺条件进行优选。

根据试验结果及生产实际情况，乙醇提取物中以阿魏酸的含量为评价指标，全面考察了影响乙醇提取效率的因素；以没食子酸含量为评价指标，考察了影响水提工艺主要因素。结果表明，优选出的最佳工艺操作简便、稳定可行，有效成分得到很好的保留。

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