两种不同ELISA法在检测猪繁殖与呼吸综合征抗体中的选择与应用

王宏燕

（辽宁省动物疫病预防和控制中心 辽宁省动物医学研究院，辽宁 沈阳 110164）

两种不同ELISA法在检测猪繁殖与呼吸综合征抗体中的选择与应用

王宏燕

（辽宁省动物疫病预防和控制中心 辽宁省动物医学研究院，辽宁 沈阳 110164）

猪繁殖与呼吸综合征（简称猪蓝耳病）是引起母猪繁殖障碍和仔猪、育成猪呼吸道症状的一种高度接触性传染病。本文比较了两种常用的检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的ELISA方法，确定IDEXX猪蓝耳病抗体ELISA检测试剂盒适合蓝耳病感染抗体的检测和早期诊断；LSI猪蓝耳病抗体ELISA检测试剂盒适合蓝耳病免疫抗体的监测。两种ELISA方法在应用范围和诊断意义方面完全不同，因此在日常监测中，应根据监测目的合理选择猪蓝耳病抗体检测试剂盒。

猪蓝耳病；抗体；检测；ELISA

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种高度接触性的传染病，以引起母猪繁殖障碍、仔猪和育成猪呼吸道症状及高死亡率为主要特征。PRRSV病毒根据抗原特异性不同分为美洲型毒株和欧洲型毒株。该病于1987年首次爆发于美国[1]，之后在世界范围内迅速传播，2006年PRRS在我国大部分省份流行起来，后经证实为高致病性猪蓝耳病，对我国养猪业造成了严重的危害和经济损失[2-3]。疫苗免疫是防控该病最重要的手段之一，但是免疫后猪群能否得以保护以及免疫后是否还发生蓝耳病的问题一直备受关注，解决这个问题关键在于对猪群健康状态的监测和把握。蓝耳病抗体水平是衡量猪群健康状态的一个重要指标，对蓝耳病抗体水平的监测可以判断猪群对蓝耳病的抵抗力，从而了解猪群的相应状态。目前蓝耳病抗体的监测主要依赖成熟的诊断试剂盒，国内使用较多的为IDEXX-ELISA和LSIELISA猪蓝耳病抗体检测试剂盒，这两类试剂盒基于不同的蓝耳病蛋白建立了不同的方法，因此应用范围和诊断意义也不同。

1 IDEXX-ELISA猪蓝耳病抗体试剂盒

1.1 以核衣壳蛋白（N N蛋白）为主要包被抗原核衣壳蛋白（N蛋白）由ORF7编码，是PRRSV衣壳蛋白的重要组成部分。美洲型与欧洲型毒株N蛋白各含123和128个氨基酸，N蛋白在全病毒中含量最高，约占病毒粒子蛋白总量的20%～40%；免疫原性最强，具有4个明确的抗原表位。猪感染PRRSV后，早期免疫应答主要是针对N蛋白，产生非中和性抗体。N蛋白在病毒的早期感染诊断和致病免疫机理研究中具有重要意义。因此，IDEXX-ELISA猪蓝耳病抗体试剂盒检测的抗体与血清的中和活性无相关性，只对早期自然感染和人工感染PRRSV具有诊断意义。

1.2 检测N N蛋白抗体N蛋白最早诱导机体产生抗体，其次是M蛋白，最后是GP5蛋白[4]。活毒接种后8～14 d、灭活苗接种后2～3周产生N蛋白抗体，但持续时间很短，约2个月，且与机体的保护力无关。1.3 用于蓝耳病感染抗体的检测和诊断 由于感染后N蛋白抗体产生早，该试剂盒适合于蓝耳病早期感染的检测和诊断。N蛋白诱导机体产生的抗体是非中和性的，检测结果不能体现机体免疫状况，不适用对免疫猪群的抗体监测。

2 LSI-ELISA猪蓝耳病抗体试剂盒

2.1 以膜蛋白（M M蛋白、GP GP55等）为主要包被抗原M蛋白由ORF6编码，是非糖基化蛋白，美洲型与欧洲型毒株M蛋白各含174和173个氨基酸，并且在两种毒株间高度保守，含有主要的中和表位[5]，是免疫应答的主要抗原。GP5蛋白由ORF5编码，美洲型和欧洲型毒株分别由200和201个氨基酸组成，为囊膜糖蛋白，包含主要中和表位[6]，具有6个抗原决定簇[7]，能够诱导机体产生中和抗体，该抗体在体内和体外均能有效中和PRRSV[8]，表明GP5在诱导PRRSV特异性免疫中具有重要作用。

2.2 检测膜蛋白抗体膜蛋白诱导的抗体能有效中和病毒，在体内出现时间晚，但维持时间长。活毒接种后14～21 d、灭活疫苗接种后3～4周产生膜蛋白抗体，该抗体在体内能持续4～5个月，是机体主要的中和抗体，和机体的保护力相关。

2.3 用于疫苗免疫效果评价和母源抗体检测由于膜蛋白抗体与中和抗体高度相关，该试剂盒可以检测保护性抗体，用于疫苗免疫效果评价，同时也能用于检测哺乳仔猪和断乳仔猪的母源抗体。

3 小结

近年来，蓝耳病在我国感染状况越来越严重，很多地方呈区域性暴发流行。对健康的猪进行蓝耳病的免疫，使猪群产生特异性免疫力，已经成为防控猪蓝耳病的重要措施。众所周知，抗体效价检测是评价疫苗使用效果的主要手段[9]。目前市场上用于蓝耳病抗体检测的试剂盒很多，大致分为两类，一类以N抗原为包被抗原，另一类以膜抗原为包被抗原，最有代表性的为IDEXX-ELISA蓝耳病抗体检测试剂盒和LSI-ELISA蓝耳病抗体检测试剂盒。通过上述比较，这两种试剂盒在诊断时机、诊断范围和诊断意义上有很大不同。因此，在蓝耳病抗体检测中，应根据检测的目的，选择适合的方法，这样得出的结果才更有科学性。例如，了解猪群蓝耳病早期感染情况，选择IDEXX-ELISA蓝耳病抗体检测试剂盒；了解疫苗免疫后抗体消长规律，选择LSIELISA蓝耳病抗体检测试剂盒。

[1]Col l ins JE,Benf ield DA,Christianson WT,et al.Isolation of swine inef r ti l iy and respiratory syndrome virus (isolateATCCVR-2332) in North America and experimental reproduction of the disease in gnotobiotic Pigs[J].J Vet Diagn Invest,1992,4(2):117-126.

[2]宁宜宝，郑杰，张纯萍，等.我国南方猪高热病的研究（Ⅱ）猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的分离、鉴定和致病性测定[J].中国兽药杂志，2007，41(1)：14-18.

[3]Zhou YJ,Hao XF,Tian ZJ,et al.Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome virus emerged in China[J]. Transbound Emerg Dis,2008,55(3-4):152-164.

[4]Nelson EA,Christopher-Hennings J,Benf ieldDA.Serum immune responses to the proteins of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus[J]. Vet Diagn Invest, 1994,6:410-415.

[5]Meulenberg,J.J.,Petersen den Besten,et al. Molecular characterization of Lelystad virus [J].VeterinaryMicrobiology,1997,55:197-202.

[6]Ostrowski M,Galeota JA,Jar AM,et al.Identi fication of neutral izing and nonneut ralizing epitopes in the porcine reproductive and respiratory syndrome virus GP5 ectodomain [J].Virol,2002,76:4241-4250.

[7]Plagemann P G.Complexity of the single linear neut ralization epitope of the mouse arterivirus lactate dehydrogenase-elevating virus[J].Virology,2001,290:112-120.

[8]Goninp,Prizadehb.Seroneutral ization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus correlates with antibody response to the GP5 major envelope glycoprotein[J].J Vet Diagn Invest,1999,11:20-26.

[9]王丽娜，郝利忠，韩春晓，等.兽药残留检测中酶联免疫试剂盒的选择原则与使用注意事项[J].现代畜牧兽医，2013,7:41-44.

（编辑：韩斌）

Comparison of two ELISAmethods to detectantibody againstPorcine Reproductive and Respiratory Syndrome

Wang Hongyan
(Animal disease prevention and cont rol center of l iaoning province,Animal medicine research institute of liaoning province,Shenyang,Liaoning,110164)

Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)is a swine infectious disease that causes abor tions and respiratory disorders.This paper compared the two kinds of commonly used ELISA methods.The IDEXX-ELISA kit which used nuclear capsid protein as coated antigen was suitable to detect antibody against PRRS for ear ly diagnosis.The LSI-ELISA kit with membrane protein as coated antigen was suitable to monitor immune antibody against PRRS.Two methods were completely dif ferent in the range of appl ication and diagnostic signi f icance.So in routine survei llance,we should choice di f ferent PRRS antibody detection kits according to the monitoring purpose.

Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS);Antibody;Detection;ELISA

S851.34+7

：A

：1672-9692(2014)04-0060-03

2014-02-10

王宏燕（1981-），女，硕士，兽医师主要从事疫病检测工作。