某养殖场鸡源粪肠球菌分离鉴定及耐药性研究

苏崴艺，李欣南，韩镌竹

（辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心，辽宁　沈阳　110016）

某养殖场鸡源粪肠球菌分离鉴定及耐药性研究

苏崴艺，李欣南⋆，韩镌竹

（辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心，辽宁沈阳110016）

本文从辽宁某鸡场100份肉鸡盲肠拭子中分离获得粪肠球菌24株，通过ATB细菌鉴定仪进行鉴定确认为粪肠球菌，并对这24株粪肠球菌进行了14种抗生素的药敏试验。结果显示，粪肠球菌对青霉素、万古霉素、氨苄西林和替拉考宁敏感；对红霉素、氯霉素、环丙沙星、四环素、左氧氟沙星和奎奴普汀/达福普汀耐药，耐药率均达到100.0%，养殖场抗菌药物耐药严重。

粪肠球菌；抑菌作用；最低抑菌浓度

肠球菌属（Enterococcus）广泛分布在自然界，常栖居在人、动物的肠道和女性生殖道，是人类的正常菌群之一[1]。近年来，肠球菌属细菌引发的感染不断上升，肠球菌已成为医院感染的常见条件致病菌，在革兰阳性球菌所致的医院感染中，肠球菌感染位居第二位，仅次于葡萄球菌，可导致人体多脏器的感染，病死率高达21.1%～27.15%[2-3]。临床肠球菌感染以粪肠球菌为主，屎肠球菌次之[4]。同时粪肠球菌的感染也会对养殖业造成很大经济损失，蔡亚娜等[5]通过对山东某地区8个大型集约化肉鸡养殖场的27只死淘鸡进行剖检、电镜观察、病原菌分离鉴定，明确了细菌混合感染为其显著特征，此地区优势致病菌依次为粪肠球菌、浅绿气球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和嗜水气单胞菌。可见粪肠球菌无论在人临床还是动物养殖领域都有很高的潜在致病危险，因此，调查粪肠球菌耐药性对于人畜等各方面临床用药均有很高的指导价值。

1　材料

1.1仪器材料

1.1.1仪器美国NUAIRE生物安全柜 Ⅱ型、三洋全自动高压灭菌器、电热恒温培养箱、DENSIMAT麦氏比浊仪、微量移液器、BIOMERIEUX鉴定移液器、ATB Expression鉴定仪。

1.1.2标准物质材料ID32STAPH鉴定条；粪球菌标准菌株（ATCC29212）购自中国兽医药品监察所。

2　方法

2.1试验菌株的制备

2.1.1试验菌株的采集取肉鸡盲肠处于回肠与盲肠接口处刨开，见图1，将肠道内壁外翻，用无菌棉拭子进行样品采集，共采集肉鸡盲肠棉拭子100份。无菌条件下涂布于粪肠球菌培养基琼脂平板上，37℃培养48 h。筛选紫色突起圆形菌落为疑似粪肠球菌。

图1　鸡盲肠形态形态Fig.1　Ceca l morphology

2.1.2试验菌株的分离纯化将疑似粪肠球菌的菌落分离接种于粪肠球菌显色培养基中，37℃培养48 h，见图2。挑取粪肠球菌显色培养基上紫色单菌落，在哥伦比亚血琼脂上进行划线纯化培养，37℃ 48 h，获得100株可疑菌株，备用。

图2　粪肠球菌显色培养基Fig.2　Enterococcus faecalis on identification chromogenic medium

2.1.3菌株的鉴定对上述100株可疑菌株进行生化鉴定，采用梅里埃全自动细菌鉴定仪对菌株进行鉴定，以生化鉴定作为最终判定标准。结果24株与标准粪肠球菌菌株生化谱一致。共获得24株粪肠球菌菌株，粪肠球菌生化鉴定谱，见表1。

表1　粪肠球菌生化鉴定谱Table1　Standard biochem ica l spectrum for Enterococcus faecalis

2.2粪肠球菌对于1414种抗生素的药物敏感试验将上述经过鉴定的24株粪肠球菌，采用梅里埃的肠球菌药敏试纸条进行14种抗生素的细菌药物敏感性试验，通过仪器判读结果，并通过微量稀释法验证。

3　结果

对分离获得的24株粪肠球菌，进行了14种抗生素的药物敏感性试验，结果见表2。

表2　粪肠球菌对于14种抗生素的敏感度Tab le2　The sensitivity of Enterococcus faeca lis to antim icrobia l drugs

可以看出该养殖场分离获得的鸡粪肠球菌对于青霉素、万古霉素、氨苄西林和替拉考宁敏感，耐药率分别为4.1%、0%、4.1%和4.1%；对于呋喃妥因、利福平、氯霉素、庆大霉素耐药处于中介，耐药率分别为25.0%、58.0%、33.0%和37.5%；对于红霉素、呋喃妥因、利福平和环丙沙星都有较高的耐药性，耐药率均达到100.0%。因此，该养殖场鸡粪肠球菌耐药严重。

4　讨论

大多数肠球菌为多重耐药菌株，由于其细胞壁厚对多种抗菌药物呈现天然耐药。如对头孢菌素类、低浓度氨基糖苷类、克林霉素以及复合磺胺等体外即使敏感，临床效果不佳[1、7]。从表2中可见，该养殖场鸡粪肠球菌对于红霉素、氯霉素、四环素这3种常用于治疗革兰氏阳性菌感染的抗生素出现了100.0%耐药，说明养殖场该类药物用药压力严重，因此，在养殖过程中应缓解该类抗生素的使用，并提倡联合用药。值得注意的是用于针对耐药性强的细菌感染和粪肠球菌感染的奎奴普丁也出现100.0%耐药，而替拉考宁作为多肽类新型抗生素出现耐药是重要的危险信号，应重点监测万古霉素、替拉考宁以及氨基糖苷类药物的耐药变化趋势，避免超级细菌的产生。同时，虽然呋喃妥因耐药率也只有25%，但硝基呋喃类药物属于养殖业禁用药物，因此，也反映了养殖环节药物滥用情况严重。

由于近年来粪肠球菌作为益生菌添加剂使用现象越来越普遍，益生菌在养殖环节的大量应用其危害尚无法证实，但确实是抗性引入的因素之一[8]。加之养殖环节抗生素的乱用现象严重，导致粪肠球菌耐药性逐渐提高，给临床治疗带来巨大阻力。因此，应密切监测粪肠球菌耐药性动态变化规律，及时反馈耐药信息，对于合理使用抗生素有重要的指导意义。

[1]姚杰,徐元宏,魏志华，等.粪肠球菌和屎肠球菌临床分离株的耐药性检测及比较[J].安徽医科大学学报，2010，2:266-268.

[2]姚杰，徐元宏.耐万古霉素肠球菌检测的研究进展[J].安徽医药，2009，13（10）：1274-1276.

[3]刘义刚，陶传敏，陈文昭，等.某医院临床分离肠球菌药敏分析[J].预防医学情报杂志，2009，25（3）：209-212.

[4]马俊春.临床标本中110株肠球菌的重新鉴定[J].中华医学检验杂志，1992：15（1）：33.

[5]蔡亚娜，白华，齐静，等.大型肉鸡养殖场中死淘鸡病原菌分析[J].中国畜牧兽医杂志，2012，1：213-215.

[6]RichardsM J,Edwards J R,CulverD H,et al.Nosocomial infections in combined medical-surgical intensive care units in the United States [J].InfectCont rolHospEpidemiol,2000,21 (8):510-512.

[7]杨希国，李欣南，李香珍，等.鸡大肠杆菌的分离鉴定及耐药性研究[J].现代畜牧兽医，2011,7:32-33.

（编辑：韩斌）

IIdentification and drug resistance of Enterococcus faecalis isolated from chicken in a farm

Su Weiyi,Li Xinnan*,Han Juanzhu
(Liaoning Province Qual ity and Safety Testing Center of Veterinary Medicine and Livestock Feed,Liaoning Shenyang110000)

In this paper,24 strains of Enterococcus faecalis were isolated f rom 100 cecum swabs of broi lers in a farm,Liaoning Provence and identif ied as Enterococcus faecal is through the ATB bacterial identi fication inst rument.Their drug sensitivity was tested against 14 antibiotics.The resul ts showed they were sensitive to Penici l l in,Vancomycin,ampici l l in and Teicoplanin,resistant against Toerythromycin,Chloramphenicol,Ciprof loxacin,tet racycl ine,levof loxacin and Dal fopristin,the resistance rate reached 100%.According to the resul ts,the bacteria f rom the broi lers in the farm were resistant to antimicrobial drugs seriously.

Enterococcus faecalis;Bacteriostasis;Minimum inhibitory concent ration

S852.61

：B

：1672-9692(2014)04-0048-03

2014-02-27

苏崴艺（1987-），男，本科，从事细菌耐药性分子生物学研究。

李欣南（1978-），女，博士，科长，主要从事动物源细菌耐药性；微生态制剂；生鲜乳质量安全评价等工作。