糖化血红蛋白浓度的短期生物学变异

李 薇，黄春梅，吴 卫，胡莹莹，陈 倩，郭 野，张玉娟，崔 巍

中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院检验科， 北京 100730

·论 著·

糖化血红蛋白浓度的短期生物学变异

李 薇，黄春梅，吴 卫，胡莹莹，陈 倩，郭 野，张玉娟，崔 巍

中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院检验科， 北京 100730

目的 研究糖化血红蛋白(glycated hemoglobin-A1c,HbA1c)浓度短期内的生物学变异。 方法 30名健康志愿者在第1天、第3天和第5天的上午8∶00、中午12∶00和下午4∶00分别采集静脉血，进行HbA1c浓度的测定。分析计算HbA1c浓度的个体内变异(within-subject coefficient of variations, CVI)、个体间变异(between-subject coefficient of variations, CVG)、分析变异(analytical coefficient of variations, CVA)、个体指数(index of individuality，II)和参考变化值(reference change value，RCV)。结果 总体、女性及男性CVI分别为1.39%、1.49%和1.32%；CVG分别为2.65%、2.33%和2.90%；CVA均为0.6%；II分别为0.5、0.6和0.5；95% RCV分别为4.22%、4.45%和4.02%；99% RCV分别为5.19%、5.86%和5.29%。HbA1c上午8∶00、中午12∶00和下午4∶00的日内变异差异无统计学意义(P=0.28)；第1天、第3天和第5天的周内日间变异差异无统计学意义(P=0.31)；男女性别间差异亦无统计学意义(P=0.18)。结论HbA1c浓度的日内和周内日间生物学变异很小，结果相对稳定，男性和女性之间亦无明显差异。

糖化血红蛋白；生物学变异

MedJPUMCH,2014,5(3):270-272

糖化血红蛋白(glycated hemoglobin-A1c,HbA1c)是血红蛋白与糖类经非酶促反应而形成的结合产物，其合成过程是缓慢而不可逆的，与血糖浓度成正比，且不受一次偶尔血糖升高或降低的影响。HbA1c的这一特点决定其在糖尿病监测中的重要意义，它可以反映测定前2～3个月内机体平均血糖水平，是糖尿病患者血糖总体控制的监测指标，可以指导对血糖的调整。因此，近年来美国糖尿病协会(American Diabetes Association, ADA)和世界卫生组织(World Health Organization, WHO)都已经建议将HbA1c作为优于糖耐量的糖尿病诊断指标。

目前研究证实HbA1c可以稳定可靠地反映出检测前一段时间内人体的平均血糖水平，但有关HbA1c浓度在一天内不同时间甚至一周内的变化幅度，尚罕见报道。随着HbA1c在糖尿病监测中的意义日益突出，有必要了解HbA1c的生物学变异情况，为更好地运用HbA1c监测血糖提供更多的实验室参考数据。本研究旨在对HbA1c浓度的短期生物学变异进行分析。

对象和方法

对象

2013年8月至9月招募在北京协和医院工作的健康志愿者30名，其中男性17名，女性13名，年龄23～34岁，中位年龄24岁。通过面谈和健康问卷调查，确定所有入选志愿者均未服用任何药物，无吸烟、饮酒等不良习惯；并通过血常规、血糖、肾功能、肝功能等常规生理常数检查，确定入选志愿者为表观健康者。志愿者抽血当日无剧烈运动，女性未在月经期和妊娠期，研究期间保持规律的生活习惯。所有入选志愿者均签署知情同意书。

样本采集和处理

研究对象每次采血前静坐10～15 min后，抽取静脉血2 ml于EDTA-K3抗凝的真空采血管中。采血时间点分别为研究第1天、第3天和第5天的上午8∶00(空腹)、中午12∶00、下午4∶00，每名对象一共被采集9次样本。标本采集后于室温保存，2～4 h内测定。

检测方法

仪器与试剂：Variant Ⅱ Yurbo糖化血红蛋白分析仪及其原装试剂、校准品和质控品均为美国Bio-Rad公司产品。

HbA1c测定：严格按照仪器和试剂标准操作规程检测标本，所用仪器的性能指标、室内质控和室间质评均符合临床检测需求。标本均采用同一台仪器使用同批号试剂且在相同时间段内进行检测。

统计学处理

采用SPSS 13.0软件中的巢式方差分析计算HbA1c浓度的个体内变异(within-subject coefficient of variations, CVI)和个体间变异(between-subject coefficient of variations, CVG)。采用Excel 2003计算分析变异(analytical coefficient of variations, CVA)、个体指数(index of individuality，II)、参考变化值(reference change value，RCV)。CVA通过分别计算高值和低值质控品的10个独立检测值而获得。II计算公式为II=CVI/CVG。RCV计算公式为RCV=21/2×Z×(CVA2+CVI2)1/2，当Z值为1.96和2.58时，分别代表95%和99%的概率。均值之间的两两比较采用One-way ANOVA检验，P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

CVI、CVG、CVA、II和RCV

本研究总体、女性及男性的CVI分别为1.39%、1.49%和1.32%；CVG分别为2.65%、2.33%和2.90%；CVA值均为0.6%；II值分别为0.5、0.6和0.5；95% RCV分别为4.22%、4.45%和4.02%；99% RCV分别为5.19%、5.86%和5.29%。提示CVI、CVG和CVA的变化不大，差异较小。

日内变异、日间变异及性别间差异

HbA1c的日内变异：上午8∶00所测HbA1c均值为(5.35±0.15)%，中午12∶00为(5.35±0.16)%，下午4∶00为(5.32±0.16)%，3个时间点的检测值比较，差异无统计学意义(P=0.28)。提示HbA1c浓度的日内变异很小，结果相对稳定。

HbA1c的日间变异：研究第1天所测HbA1c均值为(5.36±0.17)%，第3天为(5.34±0.16)%，第5天为(5.32±0.15)%，3日间的检测值比较，差异无统计学意义(P=0.31)。提示HbA1c浓度的日间变异很小，结果相对稳定。

HbA1c的性别间差异：男性HbA1c均值为(5.37±0.17)%，女性为(5.32±0.14)%，男女间的检测值比较，差异无统计学意义(P=0.18)。提示HbA1c浓度的性别间差异很小。

讨 论

个体内生物学变异是决定实验室指标检测结果准确性和可靠性的重要因素之一。本研究通过严格控制分析前和分析中的各项影响因素，在确保分析前变异和分析变异最小化的前提下，分析了HbA1c的短期生物学变异。本研究参考了Fraser等[1]和Harris[2]的计算方法，通过研究健康人群日内和周内的HbA1cCVI、CVG和CVA，并计算Ⅱ和RCV，从而确定参考区间的实用性和判断连续检测结果之间是否有统计学差异，探讨短期生物学变异对HbA1c检测及结果的影响。目前关于HbA1c生物学变异的研究罕见报道[3- 5]，而关于中国人群的HbA1c生物学变异研究尚未见报道。Ucar等[3]研究的是相对长期的生物学变异，即每个月进行一次样本采集，连续监测3个月。该研究总体、女性及男性的CVI分别为1.17%、1.23%和1.04%；CVG分别为5.58%、5.75%和4.75%；CVA分别为1.60%、1.68%、1.43%；Ⅱ值分别为0.35、0.36和0.37；95% RCV分别为5.45%、5.76%和4.87%。本研究与之相比，HbA1c浓度的总体、女性及男性的CVI略高，而总体、女性及男性的CVG均较低，这可能与观察时限和人种不同有关。本研究HbA1c浓度的Ⅱ值和Ucar等[3]报道的Ⅱ值差异较大，这可能与所采用的统计方法不同有关，后者Ⅱ的计算公式为 (CVA2+CVI2)1/2/CVG，而本研究采用的是目前常用的计算方法(Ⅱ=CVI/CVG)。当Ⅱ值小于0.6时，提示认为传统以正常人群为基础的参考范围对个体检测值异常与否的判断能力非常有限；在这种情况下，连续随访患者的结果可能比使用参考范围判断更有效。相反地，当Ⅱ大于1.4时，则认为使用以正常人群为基础的参考范围判断个体检测值的异常与否很有效[2]。尽管本研究与Ucar等[3]报道的Ⅱ值存在差异，但均小于0.6，说明当个体的指标发生变化时，均不能用HbA1c的参考范围来判断相应变化有无临床意义。RCV是用来判断某一个体指标连续两次检测结果之间的差异(升高或降低)是否有统计学意义的指标。根据RCV的计算公式，笔者计算出了HbA1c的RCV，95%(P<0.05)和99%(P<0.01)水平的概率分别代表差异具有显著性和高度显著性[6]。如果计算两次结果之间的变异值落在相应范围内，可认为差异是由固有分析变异和个体内生物学变异造成，不具有统计学意义。RCV是通过CVA和CVI计算得到，本研究RCV小于Ucar等[3]的报道，原因可能是本研究的CVA明显小于该研究的CVA所致。

综上所述，HbA1c的日内和周内的生物学变异较小，血液浓度相对稳定，男性和女性之间也不存在差异。说明HbA1c与抽血时间、抽血时是否空腹没有关系，不受进餐时间以及短期生活方式改变的影响，所反映的血糖状况相对稳定，对于糖尿病控制是一个良好的监测指标。

[1]Fraser CG, Harris EK. Generation and application of data on biological variation in clinical chemistry[J]. Crit Rev Clin Lab Sci,1989,27:409- 437.

[2]Harris KH. Effects of intra- and interindividual variation on the appropriate use of normal ranges[J]. Clin Chem,1974,20:1535- 1542.

[3]Ucar F, Erden G, Ginis Z, et al. Estimation of biological variation and reference change value of glycated hemoglobin (HbA1c) when two analytical methods are used[J]. Clin Biochem,2013,46:1548- 1553.

[4]Kilpatrick ES, Maylor PW, Keevil BG. Biological variation of glycated haemoglobin.Implications for diabetes screening and monitoring[J]. Diabetes Care,1998,21:261- 264.

[5]Rohlfing C, Wiedmeyer HM, Little R, et al. Biological variation of glycohemoglobin[J]. Clin Chem,2002,48:1116- 1118.

[6]Fraser CG. Biological variation: from principles to practice[M]. Washington DC: AACC Press, 2001.

Short-term Biological Variation of Glycated Hemoglobin-A1c

LI Wei, HUANG Chun-mei, WU Wei, HU Ying-ying, CHEN Qian, GUO ye, ZHANG Yu-juan, CUI Wei

Department of Clinical Laboratory, Peking Union Medical College Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences &Peking Union Medical College, Beijing 100730, China

CUI Wei Tel: 010-69159713, E-mail:cuiw@pumch.cn

Objective To study the short-term biological variation of glycated hemoglobin-A1c (HbA1c). Methods Blood samples from 30 healthy volunteers [17 men and 13 women; aged 23-34 years (median, 24 years)] were drawn at 8∶00 am, 12∶00 pm， and 4∶00 pm each day for 3 days (days 1, 3 and 5), and HbA1cvalues were measured in duplicate by high performance liquid chromatography (Variant Ⅱ Yurbo Analyser, Bio-Rad). Results The within-subject coefficient of variations (CVI) of total, male, and female subjects in this study were 1.39%, 1.49%, and 1.32%, respectively. The between-subject coefficient of variations (CVG) of the three groups mentioned above were 2.65%, 2.33%, and 2.90%, respectively. The analytical coefficient of variations (CVA) of these three groups were all 0.6%. The index of individuality (II) of the three groups were 0.5, 0.6, and 0.5, respectively. The 95% probabilities of reference change value (RCV) of the three groups were 4.22%, 4.45%, and 4.02%, respectively. The 99% probabilities of RCV were 5.19%, 5.86%, and 5.29%, respectively. Furthermore, intra- and inter-day biological variations of HbA1cwere fairly constant among the population examined(P=0.28,0.31), and no significant difference was observed between the male and female participants(P=0.18). Conclusions The short-term CVIand CVGof HbA1cin healthy individuals are minimal. The laboratory findings are quite constant and homogeneous for HbA1cin short term and between genders.

glycated hemoglobin-A1c; biological variation

崔 巍 电话：010-69159713，E-mail：cuiw@pumch.cn

R446

A

1674-9081(2014)03-0270-03

10.3969/j.issn.1674-9081.2014.03.005

2014- 04- 30)