胃黏膜不同病变中表达凋亡蛋白与幽门螺杆菌CagA＋东亚型感染的关系研究

谢中斌，王利霞

（榆林市第二医院检验科，陕西 榆林719000）

胃黏膜病变指胃黏膜出现炎症、糜烂、溃疡、萎缩、肠化、增生等病变，临床可表现为胃溃疡、慢性萎缩性胃炎、胃癌等［1］，其中胃癌是最为危重的胃黏膜病变类型之一。临床研究显示，幽门螺杆菌感染损伤胃黏膜上皮细胞是胃癌起病、发展的重要因素之一。幽门螺杆菌已被国际癌症研究机构（IARC）划分为Ⅰ类致癌源，该病菌内含的细胞毒素相关蛋白A（CagA）是其主要毒力因子之一，其也是胃黏膜病变主要作用因子之一［2］。本文就我院120例胃黏膜病变患者进行分类研究。现报告如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料 将我院2011年12月～2013年5月收治的胃黏膜病变患者作为研究对象。纳入标准［3］：①具临床经验丰富的医师，根据诊断标准，结合胃黏膜组织检验报告，确诊为胃黏膜病变患者。②获得患者及其家属知情同意，签署同意书。排除标准［4］：①孕妇、哺乳期妇女。②合并有严重的心、肝、肾疾病。③服用过影响本研究结果检测的药物。经纳入排除标准筛选后，共120例胃黏膜病变患者，其中男68例，女52例，年龄19～73岁，平均年龄（42．19±5．37）岁；病程1～17月，平均病程（6．47±3．93）月；慢性萎缩性胃炎患者49例，胃癌患者23例，胃溃疡患者48例。

1．2 方法 药剂来源：HP鼠抗人单克隆抗体、CagA＋东亚型鼠抗人抗体由日本医科大学提供；Fas兔抗人抗体、SP试剂盒以及其他试剂均由中衫生物技术有限公司生产。取样操作：通过胃镜活检孔选用活检钳钳取胃窦小弯侧距幽门口2cm处黏膜组织2份，一份行快速尿素酶试验，一份贮藏于－200摄氏度液氮中行冰冻切片处理。检测操作：通过快速尿素酶试验以及免疫组化SP法检测幽门螺杆菌CagA＋东亚型感染情况；检测方法严格按照相关标准进行。阳性判定标准为：显微镜下细胞胞质、胞核呈黄棕色、棕褐色。凋亡蛋白检测选用免疫组织化学SP法检测，操作与上升检测近似。阳性判定标准：显微镜下细胞胞质、胞核呈黄棕色；4个高倍镜视野下，阳性细胞平均百分率＜10%为阴性，≥10%为阳性。比较不同病变患者感染幽门螺杆菌CagA＋东亚型的情况以及感染该菌型患者体内凋亡蛋白表达与未感染者的区别。

1．3 观察指标 检查并记录不同胃黏膜病变患者幽门螺杆菌CagA＋东亚型感染情况：检测感染患者与未感染患者体内caspase－3、肿瘤蛋白P53、P73的表达阳性率，以及阳性表达水平。评判标准如下：阳性表达百分比P分为11个等级，等级1为0%，记0分，以后每个等级增加10%，分值加1；11等级为100%，记10分；阳性表达强度I分为3个等级，主要按照细胞染色颜色分级，1级为黄色；2级为棕黄色；3级为棕色。凋亡蛋白表达水平分值S＝P×I。S值≥3分即为阳性，其中最高分为30分；S值＜3分为阴性。

1．4 统计学方法 将所得数据经SPSS 17．0进行统计学分析，计量资料采用（±s），两组间采用t检验；计数资料采用百分率，组间采用χ2检验；P＜0．05表示差异具有统计学意义，P＜0．01表示差异显著。

2 结果

2．1 不同胃黏膜病变患者幽门螺杆菌CagA＋东亚型感染情况 慢性萎缩性胃炎患者幽门螺杆菌CagA＋东亚型感染为30．61%，胃癌患者78．26%，胃溃疡患者52．08%，胃癌患者的感染率最高，120例患者中，上述三者总感染58例（48．33%），三者间感染率比较差异显著（F＝14．6815，P＝0．0000），见表1。

表1 不同胃黏膜病变患者幽门螺杆菌CagA＋东亚型感染情况比较Table 1 Different gastric mucosa lesions infected with helicobacter pylori CagA ＋ East Asia type

2．2 感染幽门螺杆菌CagA＋东亚型患者与未感染者体内凋亡蛋白阳性表达率 感染幽门螺杆菌CagA＋东亚型的患者体内caspase－3、肿瘤蛋白P53、P73表达阳性率见表2。

表2 感染者与未感染者体内凋亡蛋白阳性表达率比较Table 2 Expression of apoptosis protein

2．3 感染者与未感染者体内凋亡蛋白表达水平 感染幽门螺杆菌CagA＋东亚型的患者体内caspase－3、肿瘤蛋白P53、P73的表达水平远高于未感染者，见表3。

表3 感染者与未感染者体内凋亡蛋白表达水平比较（±s）Table 3 The expression of apoptosis protein

表3 感染者与未感染者体内凋亡蛋白表达水平比较（±s）Table 3 The expression of apoptosis protein

组别 n 凋亡蛋白表达水平Caspase－3 P53 P73感染者58 18．43±3．11 13．51±2．44 11．95±2．07未感染者 62 2．97±1．09 2．69±1．13 2．73±1．09 t 35．8544 30．8209 30．2270 P 0．0000 0．0000 0．0000

3 讨论

幽门螺杆菌（HP）归属于革兰氏阴性螺旋形微需氧菌类中，该病菌可长期存活在人体胃部黏膜上。全世界性调查显示，50%以上人群存在HP感染情况。HP感染与胃癌、胃黏膜相关淋巴瘤、胃溃疡、慢性萎缩性胃炎、十二指肠溃疡等胃黏膜病变存在极大联系。HP感染者形成何种胃黏膜病变与病菌内部毒力因子存在极大相关性［4］。以毒力因子细胞毒素相关蛋白A（CagA）为例，该种毒力因子可通过CAG致病岛编码中的Ⅳ型分泌系统诱使病菌递入人体细胞中，通过或不通过酪氨酸磷酸化作用来控制人体细胞的生存、活化、增殖以及迁移，最终间接或直接诱发胃癌。CagA蛋白根据其羟基末端EPIYA基序的不同可分为西方型和东亚型，中国、日本、韩国等感染菌种多为东亚型；而美国、澳大利亚、英国、法国等感染菌种多为西方型［5］。流行病学级分子生物学研究显示，东亚型CagA＋菌种其毒性强于西方型＋菌种，这意味着东亚地区人群胃癌情况将更为危险。本次研究中，慢性萎缩性胃炎患者幽门螺杆菌CagA＋东亚型感染为 30．61%，胃癌患者 78．26%，胃溃疡患者52．08%，胃癌患者的感染率最高，所有患者中，总感染率为48．33%，三者间感染率比较差异显著（F＝14．6815，P＝0．0000），可以发现我院所在地区人群胃黏膜病变与HP感染存在极大联系，并且患者CagA分型多表现为东亚型。此外胃癌患者其HP感染率最高，这提示HP感染与胃癌存在极大联系。

细胞凋亡速率是衡量肿瘤疾病情况的重要标志之一。从分子生物学角度来看，细胞凋亡是机体组织为调节机体正常发育、维护机体内部稳定，由基因控制的细胞主动生理性凋亡过程［6］。换而言之，正常细胞凋亡过程只与基因存在一定联系，不应被其他外力干涉，但HP可直接或间距作用胃黏膜上皮细胞凋亡过程。这种由HP诱发的不正常细胞凋亡过程将导致胃黏膜正常生理结构和功能遭受破坏，最终诱发细胞癌变［7］。有研究显示，HP感染者其胃黏膜上皮细胞凋亡指数显著增加，HP阴性患者只有少量阳性细胞只存在于胃腺浅表，而HP阳性患者阳性细胞大量存在胃腺深部及浅表［8］。临床认为HP作用细胞凋亡的机制可能与诱发Bcl－2家族、caspase家族、Fas家族等凋亡蛋白起效存在一定联系［9］。P73和P53是一种同源性的肿瘤抑制蛋白，大量研究证明，P73和P53存在着肿瘤人群高表达，非肿瘤人群低表达的特征，因此这两种蛋白成为临床癌变检测的重要参数之一［10］。本次研究中，感染幽门螺杆菌CagA＋东亚型的患者体内caspase－3、肿瘤蛋白P53、P73表达阳性率远高于未感染者。感染幽门螺杆菌CagA＋东亚型的患者体内caspase－3、肿瘤蛋白P53、P73的表达水平也远高于未感染者，表明HP感染可加速细胞凋亡过程，患者体内凋亡蛋白caspase－3含量显著高于正常人群。此外，感染人群的肿瘤蛋白P53、P73阳性水平也显著高于正常人群，提示感染者体内癌变几率高于正常人群。

4 结论

感染幽门螺杆菌CagA＋东亚型的患者体内凋亡蛋白表达水平高于未感染患者，且胃癌患者该菌的感染率高于其他病变患者。

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