HPLC法同时测定复方乳酸依沙吖啶溶液中两种组分的含量

马 萍，吴 诚，王景成，曹 淼，孙 平，张丽平，牛华英（.第二炮兵总医院药学部，北京 00088；.济南大成医药发展有限公司，山东 济南 5000）

HPLC法同时测定复方乳酸依沙吖啶溶液中两种组分的含量

马 萍1，吴 诚1，王景成2，曹 淼1，孙 平2，张丽平1，牛华英2（1.第二炮兵总医院药学部，北京 100088；2.济南大成医药发展有限公司，山东 济南 250100）

目的：建立HPLC法同时测定复方乳酸依沙吖啶溶液中乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明的含量。方法：色谱柱为Luna氰基柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水-三乙胺（50∶50∶0.5）；流速1.0 mL·min-1；柱温30 ℃；检测波长230 nm；进样量20 µL。结果：乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明与二苯酮分离良好。乳酸依沙吖啶在0.601 2 ～ 1.403 0 mg·mL-1范围内线性关系良好（r = 0.999 4），盐酸苯海拉明在0.148 7 ～ 0.346 9 mg·mL-1范围内线性关系良好（r = 0.999 9），依沙吖啶和苯海拉明的平均回收率分别为99.91%、99.73%，RSD分别为1.06%（n = 9）、1.10%（n = 9）。结论：本方法简便准确，快速可靠，可用于复方乳酸依沙吖啶溶液的含量测定和质量控制。

复方乳酸依沙吖啶溶液；乳酸依沙吖啶；盐酸苯海拉明；高效液相色谱法；含量测定

复方乳酸依沙吖啶溶液（复方利凡诺溶液），是《中国人民解放军医疗机构制剂规范》（2002年版）中收载的外用灭菌溶液剂[1]。其有效组分为乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明，具有消炎、脱敏、止痒的作用，临床上常用于治疗皮肤湿疹等疾病。复方乳酸依沙吖啶溶液原质量标准仅有乳酸依沙吖啶紫外检测的含量测定方法，本文建立HPLC法同时测定复方乳酸依沙吖啶溶液中两种组分的含量，以期为该制剂质量控制提供参考。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（包括LC-10ATVP泵、SPD-10AVP紫外检测器、PDA检测器、LC Solution 色谱工作站，日本岛津公司）。

乳酸依沙吖啶（中国药品检定研究院，含量：94.3%，批号100290-201002）；盐酸苯海拉明（中国药品检定研究院，含量：99.9%，批号100066-200807）；复方乳酸依沙吖啶溶液（100 mL/瓶，含乳酸依沙吖啶200 mg及盐酸苯海拉明50 mg，第二炮兵总医院配制科研用）；二苯酮（北京通县育才精细化工厂，批号970721）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Luna氰基柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：30 ℃；流动相：乙腈-水-三乙胺（50∶50∶0.5，用冰醋酸调节pH至6.5）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：230 nm；进样量：20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液分别精密称取乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明对照品适量，分别置于量瓶中，用水溶解并稀释至刻度制成浓度为5.314 mg·mL-1和2.478 mg·mL-1储备液；精密量取乳酸依沙吖啶储备液2 mL和盐酸苯海拉明储备液1 mL置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀作为对照品溶液备用。

2.2.2 供试品溶液精密量取复方乳酸依沙吖啶溶液5 mL置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即为供试品溶液。

2.3 专属性实验

精密称取二苯酮5 mg，置于100 mL量瓶中，加乙腈5 mL使溶解，用水稀释至刻度，摇匀；另取乳酸依沙吖啶对照品10 mg和盐酸苯海拉明对照品2.5 mg，置于同一10 mL量瓶中，加上述二苯酮溶液1 mL，用水稀释至刻度，摇匀，即为定位溶液，取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。按二苯酮、乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明的顺序出峰，各峰之间的分离度均应大于2.0，乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明的理论塔板数分别大于3000和5000。详见图1。

图1 复方乳酸依沙吖啶溶液典型HPLC图A – 空白基质溶液，B – 定位溶液（含5 μg·mL-1的二苯酮和1000 μg·mL-1的乳酸依沙吖啶及250 μg·mL-1的盐酸苯海拉明），C – 供试品溶液，D – 对照品溶液；1 – 二苯酮，2 – 乳酸依沙吖啶，3 – 盐酸苯海拉明Fig 1 Typical HPLC chromatograms of complex ethacridine lactate solutionA – blank substrate solution, B – locating solution( 5 μg·mL-1diphenyl ketone, 1000 μg·mL-1ethacridine lactate and 250 μg·mL-1benzhydramine hydrochloride), C – sample solution, D –reference solution; 1 – diphenyl ketone, 2 – ethacridine lactate, 3 –benzhydramine hydrochloride

2.4 线性关系考察

分别精密吸取乳酸依沙吖啶储备液1.2、1.6、2.0、2.4、2.8 mL和盐酸苯海拉明储备液0.6、0.8、l.0、1.2、1.4 mL分别置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度摇匀，各取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。分别以浓度为横坐标（X），色谱峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明的回归方程分别为：Y = 1.77×107X – 5.78×105（r = 0.999 4）、Y = 1.56×107X – 2.54×104（r = 0.999 9）。结果表明，乳酸依沙吖啶（0.601 2 ～ 1.403 0 mg·mL-1）和盐酸苯海拉明（0.148 7 ～ 0.346 9 mg·mL-1）在各自浓度范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验

取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，以峰面积计算，测得乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明的RSD分别为0.13%和0.16%（n = 6），表明方法精密度良好。

2.6 稳定性实验

取同一供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、6、8 h进样测定。计算乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明色谱峰面积RSD分别为0.06%和0.15%（n = 5），表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.7 重复性实验

取复方乳酸依沙吖啶溶液（批号090915）共6份，按“2.2”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别进样，测定乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明的平均标示量（%）分别为101.12%（RSD = 0.98%）、100.52%（RSD = 0.75 %），RSD均小于2.0%，表明方法重复性良好。

2.8 回收率实验

取乳酸依沙吖啶对照品约40、50、60 mg（含量94.3%），各3份，精密称定，分别置9个50 mL量瓶中，按处方比例各加入盐酸苯海拉明对照品约10、12.5、15 mg各3份，加水适量使溶解，并用水稀释至刻度，摇匀。分别精密量取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明对照品，精密称定，用水溶解并定量稀释制成每1 mL中约含乳酸依沙吖啶1 mg与盐酸苯海拉明0.25 mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算本品中乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明的回收率。乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明的平均回收率分别为99.91%、99.73%，RSD分别为1.06%、1.10%。具体见表1和表2。

2.9 耐用性实验

分别改变流动相中有机相比例（±5%）、流动相pH值（± 0.1）、柱温（27 ℃、33 ℃）与流速（0.98 mL·min-1、1.02 mL·min-1），以“2.3”项下定位溶液为供试品溶液，在上述不同的条件下分别取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，考察各峰之间的分离度。详见表3。

表1 乳酸依沙吖啶回收率实验结果. n = 9Tab 1 Results of recovery test for ethacridine lactate. n = 9

表2 盐酸苯海拉明回收率实验结果. n = 9Tab 2 Results of recovery test for benzhydramine hydrochloride. n = 9

表3 耐用性实验结果Tab 3 Results of durability test

结果显示微调有机相比例（± 5%），pH值（± 0.1），柱温（27 ～ 33 ℃），流速（0.98 ～ 1.02 mL·min-1），系统适用性溶液中各峰之间的分离度均大于2.0，表明方法耐用性良好。

2.10 样品含量测定

取复方乳酸依沙吖啶溶液3批，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明的含量，详见表4。

表4 复方乳酸依沙吖啶溶液的含量测定结果.%Tab 4 Results of contents determination in complex ethacridine lactate solution. %

3 讨论

有关乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明各自的含量测定方法文献[2-3]均有报道，但同时检测的方法未见报道。因此，本文建立了高效液相色谱法同时测定制剂中乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明的含量。

《中国药典》（2010年版）[4]分别收载了乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明HPLC的含量测定方法，由于乳酸依沙吖啶有2个芳香胺基结构，C18对其保留强，因此采用C18色谱柱，而盐酸苯海拉明则采用氰基键合硅胶为填充剂。本实验首先尝试采用《中国药典》中乳酸依沙吖啶的HPLC法，但通过预实验发现在该条件下盐酸苯海拉明峰形差、严重拖尾、理论塔板数低，继而尝试采用《中国药典》中盐酸苯海拉明的HPLC法，用氰基键合硅胶为填充剂，乙腈-水-三乙胺（50∶50∶0.5，用冰醋酸调节pH值至6.5）为流动相，该条件下乳酸依沙吖啶和苯海拉明保留时间适合，峰形对称，分离度好。

乳酸依沙吖啶在270 nm波长处有最大吸收，盐酸苯海拉明在258 nm波长处有最大吸收，如果以270 nm或258 nm为检测波长，两者峰面积相差悬殊，为了便于定量，选择两者吸收较相近的230 nm为检测波长。由纯度实验可见，乳酸依沙吖啶和盐酸苯海拉明的峰纯度均符合规定，两主峰处均未检出其他杂质，表明本方法专属性良好。经方法学考察，本文建立的检测方法操作简便、重现性佳、回收率高，可作为复方乳酸依沙吖啶溶液含量测定和质量控制方法。

[1]中国人民解放军总后勤部卫生部.中国人民解放军医疗机构制剂规范[S].2002年版.北京：人民军医出版社，2003：112.

[2]刘玉春，李艳娜.HPLC法测定乳酸依沙吖啶注射液的含量[J].安徽医药，2008，12（3）：225-226.

[3]江燕.高效液相色谱法测定盐酸苯海拉明片的有关物质和溶出度[J].中国现代应用药学，2006，23（4）：331-333.

[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：481，725.

Simultaneous determination of two components in complex ethacridine lactate solution by HPLC

MA Ping1, WU Cheng1, WANG Jing-cheng2, CAO Miao1, SUN Ping2, ZHANG Li-ping1, NIU Hua-ying2(1. Department of Pharmacy, General Hospital of the Rocket Forces , Beijing 100088, China; 2. Jinan Dachpharm Development Co. Ltd., Jinan 250100, China)

Objective:To establish the HPLC method for simultaneous determination of ethacridine lactate and benzhydramine hydrochloride in complex ethacridine lactate solution.Methods:The extract was separated by Luna CN column (4.6 mm × 250 mm, 5 μm ), and the mobile phase was consisted of acetonitrile-water-triethylamine (50 : 50 : 0.5) with the fl ow rate of 1.0 mL·min-1. The column temperature was 30 ℃. The detection wavelength was 230 nm and the injection volume was 20 µL.Results:The calibration curves of ethacridine lactate and benzhydramine hydrochloride were linear in the range of 0.601 2 – 1.403 0 mg·mL-1(r = 0.999 4) and 0.148 7 – 0.346 9 mg· mL-1(r = 0.999 9), respectively. The average recovery of ethacridine lactate was 99.91% with RSD of 1.06% (n = 9). The average recovery of benzhydramine hydrochloride was 99.73% with RSD of 1.10% (n = 9).Conclusion:The method is simple, accurate and reliable. It can be used as the quality control of complex ethacridine lactate solution.

Complex ethacridine lactate solution; Ethacridine lactate; Benzhydramine hydrochloride; HPLC; Content determination

R917

A

1672 – 8157(2014)03 – 0149 – 03

2014-01-20

2014-03-03）

军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题计划重点项目（13ZJZ22）

牛华英，女，副主任药师，主要从事新药研发工作。E-mail：niuhuaying@sohu.com

马萍，女，副主任药师，主要从事医院新制剂研发及药物临床研究。E-mail：maping691009@126.com