广东省部分猪场细环病毒感染状况

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（广东温氏食品集团股份有限公司，广东新兴 527400）

广东省部分猪场细环病毒感染状况

王东东，邓雨修，李春梅，卢 围，廖承球，潘永飞，周庆丰，宋延华

（广东温氏食品集团股份有限公司，广东新兴 527400）

细环病毒（TTV）目前在全世界的猪群中广泛存在。为了调查其在广东省猪群流行情况，我们运用PCR方法对广东省不同地方猪场和散养户送检的445份血清进行了检测。结果表明：TTV总的阳性率为68.1%（303/445），其中TTV1阳性率为43.1%（192/445），TTV2阳性率为24.9%（111/445）。TTV1的阳性率高于TTV2的阳性率，且猪场送检样品阳性率高于散养户。TTV1和TTV2存在混合感染，猪场样品混合阳性率为23.1%（88/381），散养户样品混合阳性率为1.6%（1/64）。几份阳性样品测序和进化分析显示，它们分别属于TTV1和TTV2。调查结果表明TTV在广东猪群中已经广泛存在。

细环病毒；UTR基因；流行病学

（细环病毒，TTV）在1997年日本的一例输血性肝炎病人身上首次发现[1]。TTV归属于圆环病毒科，指环病毒属。基因组为单链负链的环状DNA，约3.8kb左右，分为编码区和非编码区（UTR）两部分。TTV编码区由6个开放阅读框（ORF1～ORF6）组成，TTVs具有相同的基因组结构，但核酸序列差别较大。有学者根据UTR将TTV分为5个基因型群（genetic group）[2]。目前已知感染的动物包括灵长类、猪、禽、绵羊、牛、狗和猫等[3-4]。猪的TTV主要包括两大基因群TTV1和TTV2。据国外学者研究结果显示[5]，不同地区的感染率为24%～100%。目前普遍认为TTV是非致病的，但有学者研究结果显示[6]TTV2与PCV2流行有一定相关，并可能与断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）之间存在一定的联系。

基于UTR区基因序列的PCR方法是诊断TTV感染的主要手段[3-7]，本研究中我们运用两对PCR引物，分别对TTV1和TTV2进行了检测，并对其感染情况进行了调查，现将结果报告如下。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1血清

445份血清来自广东省17个规模猪场的正常猪群以及表现发烧、消瘦、体况较差的猪只和5个散养户正常猪群送检血清。

1.1.2试剂

DNA提取试剂盒购自天根生化科技有限公司；Premix Taq购自Takara公司。

1.2方法

1.2.1引物

根据Kekarainen T 等[12]的方法设计两对引物TTV1-F/TTV1-R和TTV2-F/TTV2-R，送上海生工合成，用于TTV PCR扩增，详见表1。

表1扩增用引物序列

1.2.2核酸提取

参照天根公司DNA抽提试剂盒说明书进行。

1.2.3TTV1与TTV2的PCR扩增与鉴定

以血清提取的DNA作为模板，用相应引物按下述体系配制：Premix-Taq12.5 μL，20 pmol/L上、下游引物各0.5μL，模板2 μL，灭菌双蒸水补足25μL。扩增条件：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，55 ℃复性30 s，72℃ 延伸30 s，共30个循环；然后72 ℃延伸10 min。扩增产物经10 g/L普通琼脂糖凝胶电泳鉴定，将目的片段克隆至pMD18-T载体。经鉴定后，将阳性克隆送Takara公司测序。

1.2.4系统进化树绘制

用Clustal X对序列进行比对，并用MEGA4软件构建系统进化树。DNA Star软件进行序列同源性比较。

2 结果

2.1PCR扩增电泳鉴定

用血清提取的DNA为模板，进行PCR扩增，得到了预期大小的目的片段（图1、图2）。

2.2检测结果统计

对445份血清样品进行PCR检测，结果表明TTV总的阳性率为68.1%（303/445），见表2。

2.3同源性比较结果

图1 TTV1 PCR扩增结果

图2 TTV2 PCR扩增结果

表2检测结果统计

经 过 D N A S t a r比 对 发现 ，本 研 究 中 所 测 T T V 1和 TTV2之间的同源性分别为91.5%～96.1%和92.8%～98.4%，与参考毒株相比同源性分别为88.0%～96.7%和81.2%～100%（图3、图4）。

2.4系统进化树分析结果

本研究扩增序列经测序后和参考序列用Clustal X进行比对并绘制系统进化树，结果显示，所测序列分属两个基因群：TTV1和TTV2，与预期结果相符，其中Shalan A与Shalan B以及YunheA和Yunhe B为同一份样品中同时检出TTV1和TTV2。

3 讨论

图3 TTV1同源性比较

图4 TTV2同源性比较

图5 TTV1和TTV2进化树分析

TTV在猪群中已经普遍存在，Kekarainen T等[4]的研究显示TTV在猪群中的阳性率为72%。我们对广东省17个规模猪场和5户散养户猪群的检测结果显示TTV的阳性率为68.1%，TTV1和TTV2阳性率分别为43.1%和24.9%，证实TTV在广东存在较高的感染率，并且TTV1阳性率要高于TTV2。这与Kekarainen T 等[7]和Sibila M 等[8]的研究结果一致，但与Segalés J 等[9]和王礞礞等[10]的研究结果不尽相同，可能是由所调查猪群的数量、方法以及猪群本身的差异所致。

在我们对散养户检测的64份样品中，TTV1和TTV2各检出了三份阳性样品（均为4.7%），远低于猪场的TTV阳性检出率（49.6%和28.3%）。所检散养户饲养的猪品种多为土猪，而猪场的猪品种为经培育后的三元杂猪。两者TTV感染率相差极大，是TTV的感染与猪的品种有关，还是三元杂猪的免疫力不及土猪所致，或是养殖密度高使得病毒更易传播，需要进一步收集资料进行研究，

目前TTV感染在猪群引起何种疾病仍未有报道。有学者的研究结果表明，TTV和猪的PMWS之间存在一定相关。Ellis JA等[11]单独接种TTV1、PCV2或者先接种PCV2再接种TTV1不引起猪的临床症状，但是先接种TTV1再接种PCV2，12头猪有6头出现急性的PMWS。Kekarainen T 等[6]发现在PMWS猪群中TTV2的阳性率（91%）要高于非PMWS猪群（72%）。

另外，Krakowka S 等[12]检测了22个商业化的猪肺炎支原体疫苗，结果发现有13个检测到TTV1和TTV2的DNA。我们也对手头的3个国产的蓝耳病疫苗进行了检测，并没有检到TTV的DNA存在。虽然检到病毒的基因组病毒并不代表其仍然具有感染性，但是仍然具有潜在的风险，有文献表明TTV同属的PCV2在接种全基因组到猪后可以检到病毒血症。因此，疫苗中存在的TTV核酸具有潜在的感染危险，今后对疫苗亦应加强检测。

随着我国养猪业的发展，养殖规模的不断扩大，疾病成为困扰养猪业发展的一大问题。TTV作为一种潜在致病病毒，较高的阳性率应该引起我们的重视。TTV的致病性以及与其他疾病之间的关系，需要我们进行深入的研究。

[1] Nishizawa T，Okamoto H，Konishi K.A novel DNA virus（TTV）associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis ofunknown etiology[J].Biochem. Biophys. Res，1997，241（1）：92–97.

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[9] Segalés J，Martínez-Guinó L，Cortey M. Retrospective study on swine Torque teno virus genogroups 1 and 2 infection from 1985 to 2005 in Spain[J]. Vet Microbiol，2009，134（3-4）：199-207.

[10] 王礞礞，周艳君，陈宗艳，等. 我国猪群中TTV的鉴定及其分子流行病学分析[J].中国预防兽医学报，2009，10（31）：751-756.

[11] Ellis JA，Allan G，Krakowka S. Effect of coinfection with genogroup 1 porcine torque teno virus on porcine circovirus type 2-associated postweaning multisystemic wasting syndrome in gnotobiotic pigs[J]. Am J Vet Res，2008，69（12）：1608-1611.

[12] Krakowka S，Ringler S S，Arumugam P，et al. Evaluation of Mycoplasma hyopneumoniae bacterins for porcine torque teno virus DNAs[J]. Am J Vet Res，2008，69（12）：1601-1607.

An Inestigation of TTV Infection in Some Swine Herds in Guangdong Province

Wang Dongdong，Deng Yuxiu，Li Chunmei，Lu Wei，Liao Chengqiu，Pan Yongfei，Zhou Qingfeng，Song Yanhua
（GUANGDONG WENS FOODSTUFF GROUP CO.LTD，Xinxing，Guangdong 527400）

Torque teno virus（TTV）was present in swine the world wide.To investigate the situation of TTV in swine of Guangdong province，a PCR was used to detect 445 serum samples from different swine herds and free-ranging households.The result showed that the total positive rate was 68.1%（303/445）， 43.1%（192/445） positive for TTV1 and 24.9%（111/445） for TTV2 .The positive rate of TTV1 was higher than that of TTV2.Co-infection with TTV1 and TTV2 was existed and the positive rate of herds was 23.1%（88/381）and that of the free-ranging households was1.6%（1/64）.The sequencing and phylogenetic analysis showed that they belonged to two clusters：TTV1 and TTV2. The investigation demonstrated that TTV was widely existed in swine in Guangdong provine.

Torque teno virus；UTR gene；Epidemiology

S852.65

：A

：1005-944X（2014）02-0059-04