幼狐脑炎母源抗体消退情况监测

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（山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊 261061）

幼狐脑炎母源抗体消退情况监测

郭洪梅，王成森

（山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊 261061）

本研究采用微量中和实验的方法，对30日龄、45日龄、60日龄幼狐的传染性脑炎母源抗体进行检测。结果显示，30日龄幼狐的传染性脑炎母源抗体水平较高，中和抗体平均效价为1∶48.3；在45日龄断乳期该母源抗体平均中和抗体效价显著下降到1∶18.3；在60日龄该母源抗体基本消失，多数中和抗体效价低于1∶2.9。实验结果表明，45～50日龄对幼狐进行传染性脑炎疫苗首免，能避开免疫空白期和母源抗体干扰，获得较好免疫效果。

：中和试验；狐狸脑炎；幼狐；母源抗体；

狐狸脑炎是（fox encephalitis，FE）由犬I型腺病毒（ canine adenovirus type 1，CAV-1）引起的一种急性、败血性、接触性传染病，是严重危害狐狸养殖业发展的主要疫病之一，疫苗接种是我国目前防控该病的主要措施，这在很大程度上控制了CAV-1在狐群中的爆发流行，但是仍有部分狐场爆发脑炎、发病率较高［1］，免疫效果不佳的原因可能是狐狸脑炎疫苗首免时间不当所致。若疫苗首免时间过早，母源抗体的干扰会严重影响免疫效果，造成免疫失败；若疫苗首免时间过晚，则易出现免疫空白期，使动物易于感染CAV-1。因而本研究采用微量中和试验方法对不同日龄幼狐的狐狸脑炎母源抗体进行检测，进一步弄清母源抗体的消退规律，以期选择恰当的首免时机，克服母源抗体的干扰，避免出现免疫空白期，为制定狐狸脑炎疫苗的适宜免疫程序提供科学依据。

1 材料

1.1实验动物和分组选自潍坊郊区的养狐场，选择未经狐狸脑炎疫苗免疫的4窝健康银狐幼狐，共30只。幼狐45日龄断奶，试验期间按正常养殖程序补喂饲料和分窝，弱仔、死仔及时淘汰。

1.2血清

1.2.1对照血清狐狸传染性脑炎阳性血清由山东畜牧兽医职业学院实验室自制保存，阴性血清采自健康北极狐（SN抗体效价≤1∶4 ）；过滤除菌后置-20℃冻存待检，实验前将血清56℃水浴灭活30 min备用。

1.2.2待检血清分别于幼狐出生后30日龄、45日龄、60日龄时前肢臂头静脉采血，分离血清，过滤除菌后置-20℃冻存待检，实验前将血清56℃水浴灭活30 min备用。

1.3参照毒株扬州大学惠赠的CAV-1弱毒株。

1.4细胞系MDCK细胞购自中国科学院上海生科院细胞资源中心。

2 方法

采用固定病毒-稀释血清法，用微量中和试验［2］检测待检血清中狐狸脑炎母源抗体效价。

2.1狐狸脑炎病毒含量的测定启封冻干病毒，用细胞生长液对病毒液进行10倍梯度稀释，取10-3～10-6稀释度之间的病毒稀释液进行毒价测定，每个稀释度接种4孔，每孔50 µL，然后加100 µL3.0×105个/mL 的MDCK细胞悬液于各孔中，最后一列孔为正常细胞对照，接种细胞生长液，置于5%CO2培养箱中于37℃培养，逐日观察结果，记录细胞出现细胞病变（CPE）的孔，至接种后第4天按Reed-Muench法计算病毒的TCID50／50µL。

2.2微量血清中和试验

2.2.1MDCK细胞悬液的准备取长满单层的细胞一瓶，倾去培养液，加入胰酶消化，将消化好的MDCK细胞稀释成成3.0×105个/mL的MDCK细胞悬液。

2.2.2血清的稀释取96孔微量培养板，以50µL／孔体积，用细胞维持液将血清进行2倍系列稀释至1∶256，每个稀释度做4孔。

2.2.3血清抗体与病毒中和感作在上述各孔内加入50µL稀释好的200TCID50／50µL CAV-1液，混匀，同时做阴、阳性血清对照，病毒对照和正常细胞对照，在25℃感作1.5 h。

2.2.4添加细胞感作完成后，每孔加入100µL 3.0×105个/mL的MDCK细胞悬液，置5%CO2培养箱37℃培养，逐日观察CPE，在对照系统成立的前提下，观察5天后判定结果。以每孔完全不出现细胞病变为中和标准，按Reed-Muench法计算血清的中和抗体效价。

3 结果

3.1中和抗体效价测定结果由表1可以看出，30日龄幼狐脑炎母源中和抗体水平较高，平均SN抗体效价为1∶48.3；45日龄断乳期间SN抗体水平有明显下降，平均SN抗体效价为1∶18.3；60日龄部分幼狐的SN抗体基本消失，多数SN抗体效价小于1∶2.9。

3.2对病死狐狸的综合诊断

表1幼狐狐狸脑炎母源中和抗体效价统计结果

实验过程中，25号幼狐于31日龄时突然死亡，死前无症状，见体表被嘶咬，综合判断可能因采血受到惊吓造成应激致死。

4 讨论

母源抗体的被动免疫对新生动物是十分重要的，然而对疫苗的免疫效果也带来一定的影响，若免疫时间过早，母源抗体的干扰易造成疫苗免疫失败；若免疫时间过晚，则动物体内较低的母源抗体水平不足以对抗FEV强毒的感染。据夏咸柱等的研究［3］，FEV母源SN抗体达1∶4以上具有明显的免疫干扰作用，SN抗体最低免疫保护值为1∶16。

弄清幼狐抗CAV-1母源中和抗体的消长规律，对制定CAV-1免疫程序有很重要的意义。对30只未进行CAV-1免疫接种的健康幼狐母源SN抗体检测结果表明，在30日龄绝大多数幼狐抗CAV-1平均母源中和抗体效价在1∶48.3，这表明绝大多数幼狐在30日龄抗CAV-1的母源中和抗体效价较高，免疫保护力高，如此时对幼狐进行CAV-1免疫，母源抗体会严重干扰CAV-1的免疫效果，易造成免疫失败；幼狐在45日龄母源抗体均较低，血清抗CAV-1平均中和抗体效价等于1∶18.3，有一定免疫保护力；幼狐在60日龄母源抗体基本消失，血清抗CAV-1平均中和抗体效价小于1∶2.9，免疫保护力很低，幼狐易于感染CAV-1而发病。实验结果表明，幼狐脑炎疫苗的首免时间宜在45～50日龄，这样能避开免疫空白期和母源抗体干扰，获得较好免疫效果。

[1] 郑海发，聂金珍，赵常太，等．狐狸脑炎流行病学调查[J]．特产研究，1992（1）：29-30．

[2] 柴秀丽，闫喜军，姜莉莉，等．狐狸传染性脑炎中和试验监测方法的建立和应用[J]．特产研究，2006（4）：8-10．

[3] 夏咸柱，范泉水，扈荣良，等．Ⅱ型犬腺病毒自然弱毒YCA18株的实验免疫研究[J] ．中国兽药杂志，2001，35（2）：1-4

[4] 闫喜军，姜莉莉，柴秀丽，等．狐传染性脑炎活疫苗抗体消长规律的研究[J]．经济动物学报，2006，10（2）：70-72．

[5] 钟志宏，夏咸柱，赵奕，等．狐狸脑炎病毒的分离鉴定和流行病学调查[J]．兽医大学学报，1990，10（2）：111-117．

[6] 聂金珍，郑海发，吴威，等．犬腺病毒1I型病毒株的致弱及狐狸脑炎弱毒苗的研究[J]．中国农业科学，1992，25（2）：14-21．

[7] 李庆国，姜莉莉，樊兆斌．仔狐传染性脑炎母源抗体水平监测[J]．黑龙江畜牧兽医，2011（6）：90-91．

The decreasing of the maternal antibodies to fox encephalitis in fox cubs

Guo Hongmei，Wang Chengsen
（Shandong Vocational Animal Science and Veterinary College，Weifang，Shandong 261061）

Maternal antibodies against fox encephalitis virus in fox cubs at ages of 30，45 and 60 days were detected by micro neutralization test. The results showed that the level of the maternal antibodies was higher at 30 day-old with an average SN titer of 1∶48.3，it was reduced sharply to 1∶18.3 at 45 day-old when weaning，and almost disappeared at 60 day-old as most of them were below 1∶2.9，suggesting that good immunity could be obtained if the infectious fox encephalitis vaccine was inoculated for the fi rst time between 45 and 50 day-old and the immune gap and the maternal antibody interference could be avoided as well.

neutralization test；fox encephalitis；fox cubs；maternal antibody

S852.659.1；S858.299

：B

：1005-944X（2014）02-0077-03

山东省高等学校科技计划项目（J10LC52）