宁夏枸杞菜中总黄酮和芦丁含量的动态变化研究

张玉玺，马红军，何 薇

（1. 银川能源学院 石油化工系， 宁夏 银川 750105； 2. 银川能源学院 生物工程系， 宁夏 银川 750105; 3. 宁夏食品检测中心, 宁夏 银川 750004）

宁夏枸杞菜中总黄酮和芦丁含量的动态变化研究

张玉玺1，马红军2，何 薇3

（1. 银川能源学院 石油化工系， 宁夏 银川 750105； 2. 银川能源学院 生物工程系， 宁夏 银川 750105; 3. 宁夏食品检测中心, 宁夏 银川 750004）

考察不同生长期枸杞菜中总黄酮和芦丁的含量，以确定枸杞菜的最佳采收期。采用紫外分光光度法测定总黄酮的含量，高效液相色谱法测定芦丁的含量。不同月份总黄酮和芦丁的含量具有显著的差异, 5月和10月总黄酮和芦丁含量均较高。枸杞菜最佳采收期为春季5月下旬或秋季10月下旬。

枸杞菜；总黄酮；芦丁；动态变化

枸杞作为宁夏的特产，以其品质优良、富含多种药性成分和营养成分而名冠全国[1]。枸杞菜即枸杞的嫩梢、嫩叶，有报道表明[2]，其黄酮含量较高；黄酮类成分具有明显的抗氧化和抗自由基过氧化的作用[3-5]。因此研究及控制枸杞叶中的黄酮类化合物对枸杞叶的基础研究和开发应用具有非常重要的意义。本文对不同采收期（5-10月）枸杞菜中总黄酮和芦丁含量进行测定，并确定了枸杞菜的最佳采收期, 为枸杞菜的最佳采收期提供了理论依据。

1 仪器与试剂

Agilent 1100 高效液相色谱仪， TU-1901紫外分光光度计；AE-240型电子分析天平。芦丁对照品购买与中国食品药检定研究院；甲醇和磷酸为色谱纯；乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠为分析纯；水为超纯水；枸杞菜（宁杞菜Ⅰ号；采摘后在阴凉处阴干）由宁夏农林科学院枸杞研究中心提供。

2 测定方法

2.1 总黄酮的测定[6]

2.1.1 对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品适量，加 70% 的乙醇制成约0.2 mg/mL的溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备

精密称取枸杞叶细粉约0.5 g，置碘称瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，称定重量，回流提取1 h，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.1.3 标准曲线的制备

精密吸取对照品溶液 (0.211 mg/mL) 0.1、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL置于10 mL量瓶中，分别加水使成2.0 mL，各加5% NaNO2溶液0.4 mL，摇匀，放置6 min，加10%A13NO3溶液0.4 mL，摇匀，放置6 min，加4% NaOH溶液1 mL，加水至刻度，摇匀，放置15 min，同法制备空白，测定波长509 nm，计算 ，得回归方程 Y=0.0112X-0.0221，r= 0.9989，芦丁在0.0211～0.4220 mg/mL 范围内呈良好的线性关系。

2.1.4 波长的选择

分别取对照品溶液和供试品溶液适量依法显色，于200～600 nm波长范围扫描，结果显示均在509 nm波长处有最大吸收，因此选择测定波长为509 nm。

2.1.5 样品的测定

精密量取供试品溶液1.0 mL依法显色后测定吸收度，按回归方程求得总黄酮含量。

2.2 芦丁的测定[7]

2.2.1 色谱条件

色谱柱为C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇(A)－0.5%的磷酸溶液(B)梯度洗脱，0～5 min，A:30→40；5～10 min，A:40→50；10～20 min，A:50→60；检测波长为358 nm；流速为1.0 mL·min－1；进样量为10 μL。

2.2.2 对照品溶液与供试品溶液的制备

同上述“总黄酮测定”项下的方法。

3 结 果

利用本文建立的方法对宁夏不同采收期（5-10月）枸杞菜中总黄酮和芦丁含量进行累积动态分析，结果见表1，显示枸杞菜最佳采收期为春季5月下旬或秋季10月下旬。

表1 不同采收期总黄酮和芦丁含量的累计动态( n = 3)Table 1 Total flavonoids and rutin contents in wolfberry at different harvesting time ( n = 3)

4 讨 论

4.1 提取方法的考察

精密称取枸杞叶粗粉1.0 g，共18份，分别采用超声提取、回流提取、煮沸提取三种提取方式，以70%的乙醇为提取溶剂，提取时间均为60 min，提取后，分别测定提取液中总黄酮和芦丁的含量。结果以回流提取的方式，提取液中总黄酮和芦丁的含量最高。

4.2 提取条件的优选：

枸杞叶中黄酮类物质的提取会受到提取溶济，提取时间，提取次数等因素的影响，已确定提取方式为回流提取，我们选择了提取溶剂（60%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、热水），提取时间（45、60、90、120 min），提取次数（1、2、3次）3个因素进行了比较，结果表明：1.0 g枸杞叶样品，加入70%乙醇100 mL，加热回流提取60 min，提取液中总黄酮和芦丁的含量最高。

4.3 空白试剂的确定

由于枸杞叶不同浓度乙醇的提取液叶绿素比较深，为了考察叶绿素在总黄酮的显色条件下是否显色或对显色有影响，考察了通过索氏提取器用石油醚脱色，结果通过石油醚脱色后的枸杞叶（石油醚提取后，用70%的乙醇提取时，颜色还为较深的绿色）和未脱色的枸杞叶的总黄酮的含量一致（5.90%），说明样品提取时不用脱色处理；石油醚的提取物（显黄绿色）用70%的乙醇溶解过滤后，用测定总黄酮的方法显色处理后淡黄色消失变为无色，说明石油醚的提取物对总黄酮的测定没有影响；提取液的绿色在加入5%的亚硝酸钠和10%的硝酸铝后颜色变为了黄色，当加入4%的氢氧化钠后颜色变为了水红色。由上面的结论可确定用试剂空白，而不用自身空白。

［1］贺晓慧，贾孟辉，俞维，等.宁夏枸杞叶基础研究述要及应用开发的前景[J].时珍国医国药，2007，18（5）:1111-1112.

［2］李国莉，黄元庆.宁夏枸杞不同组分黄酮含量分析[J]. 宁夏医学院学报，1995，17（2）：114－115.

［3］肖崇厚. 中药化学[M]. 上海：上海科学技术出版社，1996: 265．

［4］张颖，张立睦，周红英，等．不同产地枸杞子中黄酮含量的测定[J]中国中医药科技，2004，11(2)：102-103．

［5］黄元庆，谭安民，沈 泳，等.枸杞黄酮类化合物清除氧自由基及对小鼠 L1210癌细胞能量代谢的抑制作用[J]. 卫生研究，1998，27（2）：109-111.

［6］李铭芳，李淑芳，汪小强，阮红强. 枸杞中总黄酮的分析方法及提取工艺研究[J] 天津农业科学, 2011，17(1)：46-50.

［7］张芦燕,贺凯,马玲,安巍,王英华. HPLC法测定枸杞叶中芦丁的含量[J].药物分析杂志，2009，29（5）：858-860.

Study on Dynamic Changes of Total Flavonoids and Rutin Contents in Ningxia Wolfberry Dish

ZHANG Yu-xi1, MA Hong-jun2, HE Wei3
(1. Institute of Petrochemical Technology, Yinchuan Energy College, Ningxia Yinchuan 750105, China; 2. Department of Bioengineering, Yinchuan Energy College, Ningxia Yinchuan 750105, China; 3. Yinchuan Food Testing Center, Ningxia Yinchuan 750004, China)

Total flavonoids and rutin contents in wolfberry at different growth stages were detected in order to determine the optimum harvest of the wolfberry. UV spectrophotometry was used to determine total flavonoids content, rutin content was determined by HPLC. The results show that flavonoids and rutin contents in wolfberry at different growth stages have significant difference, flavonoids and rutin contents in wolfberry in May and October are high. So the best harvest of wolfberry should be in late May and in late October.

Wolfberry; Total flavonoids; Rutin; Dynamic changes

O 657

A

1671-0460（2014）12-2509-02

2014-09-17

张玉玺（1977-），女，宁夏银川人，讲师，2002年毕业于宁夏大学化学工程与工艺专业，研究方向：化学工程与工艺。E-mail：zyx771120@163.com。