沉降式制片技术在痰找抗酸杆菌中的应用

曾江，罗一钧，彭海英

(赣州市第五人民医院，江西赣州34100)

·检验与临床·

沉降式制片技术在痰找抗酸杆菌中的应用

曾江，罗一钧，彭海英

(赣州市第五人民医院，江西赣州34100)

目的探讨沉降式制片技术在痰找抗酸杆菌中的应用优势。方法取晨痰标本应用沉降式制片技术与传统痰涂片方法检测做比较。结果在本次实验收集的93例痰找抗酸杆菌标本中，通过沉降式制片技术诊断的阳性标本为44例，阳性率为47.3%，而传统方法制片技术诊断的阳性标本为22例，阳性率为23.7%，经卡方检验,χ2=11.37,P＜0.05,差异有统计学意义,表明沉降式制片技术诊断的阳性率高于传统方法制片技术的阳性率。结论沉降式制片技术痰抗酸染色可避免红细胞等干扰，使制片为较标准化，且其阳性率明显高于传统痰涂片法。

沉降式制片技术；痰涂片；抗酸杆菌

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.038

结核杆菌属分枝杆菌属，传统的抗酸杆菌检查方法有厚涂片、薄涂片、漂浮法集菌涂片和培养法。痰涂片抗酸染色，镜检因其快速、简便、费用低，而成为临床上常用的病原菌检查方法[1-4]。有报道显示血痰标本涂片阳性率高达32.3%[5]，但疾控中心反复强调制片时勿挑取含血标本，因为含新鲜血液的标本中可见到被染色的红细胞，易干扰痰涂片的镜检结果[6,7]。有文献表明沉降式制片技术在痰脱落细胞检查中可以有效的避免痰液中血液、口腔杂物等的影响[8]，因此本文就沉降式制片技术在痰找抗酸杆菌中的作用进行观察。

1 材料与方法

1.1 标本来源2011年1月-2011年6月各科室痰找抗酸杆菌标本共计93例。其中男52例，女41例，年龄17～80岁(36.5±8.56)岁，对每例患者标本同时采取传统方法制片和沉降式制片技术进行抗酸杆菌检查。

1.2 仪器与试剂LBP—2801自动样本转移机、OLYMPUS CX41、离心机、震荡器及制片染色机，痰细胞专用保存液，Tris缓冲液，1，4-二硫代苏糖醇，石炭酸复红，3%盐酸酒精，吕氏美兰液。

1.3 传统痰涂片抗酸染色方法

1.3.1 涂片用竹签折断的毛茬面挑取痰标本，于玻片正面靠右端2/3处中央均匀涂抹成卵圆形痰膜，待自然干燥后做抗酸染色。

1.3.2 抗酸染色初染石炭酸复红2～3滴，加热3～5min，待标本冷却后用水冲洗；脱色3%盐酸酒精脱色30s～1min；用水冲洗，复染碱性美兰溶液复染1min，水洗，用吸水纸吸干即可。

1.4 沉降式技术制片制作

1.4.1 痰液处理方法(1)黏液稀释液，加2毫升1，4-二硫苏糖醇(DDT)化痰液于痰细胞保存瓶当中,震荡器震荡15min左右,置痰液全部液化。(2)过滤标本∶用LBP—2801自动样本转移机处理，除去痰液中的黏液丝及口腔中附带的杂物。(3)收集样品：将过滤标本2600r/min离心5min,去上清液,震荡细胞块至充分混匀，静置10min,如痰中带有血液可多次缓冲液洗涤。

1.4.2 沉降制片将免涂玻片(厂家已制作的成品，玻片表面附有黏附剂)放置制片染色板上，并扣上制片染色舱。制成直径大小为13mm的薄片。

1.4.3 抗酸染色在沉降式制片染色机设定好染色时间及顺序。

1.5 统计学方法应用SPSS 17.0统计软件对实验数据进行分析，率的比较采用卡方检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

涂片背景比较：沉降式制片技术，背景清晰，染色深，抗酸杆菌分辨高且避免了红细胞对制片染色干扰的问题。制片大小，厚薄均一致，无分层(图1)。传统涂片中含有黏液丝，杂物的干扰，大小不一致且有分层(图2)。经过统计学分析：在本次实验收集的93例痰找抗酸杆菌标本中，通过沉降式制片技术诊断的阳性标本为44例，阴性标本为49例，阳性率为47.3%，而传统方法制片技术诊断的阳性标本为22例，阴性标本为71例，阳性率为23.7%，经卡方检验,χ2=11.37,P＜0.05,差异有统计学意义,说明沉降式制片技术诊断的阳性率高于传统

图1 沉降式制片技术涂片(抗酸染色，1×)(佳能5D2单反相机拍摄)

图2 传统制片技术涂片(抗酸染色1×)(佳能5D2单反相机拍摄)

3 讨论

痰涂片抗酸杆菌镜检结果对诊断传染性结核病是一项重要指标。但由于传统痰涂片方法受技术操作等多方面因素的影响。如含血液的痰标本，口腔中的杂物，人为染色的差异性等。会造成结果的差异及假阴阳性的出现[9]。应用沉降式制片技术制片染色，可避免人为制片的差异化，消除痰液中血液、口腔杂物等带来的染色效果的影响[8,10,11]。从而提高痰抗酸杆菌的检出率，充分发挥痰抗酸杆菌对结核病诊断作用的关键。

沉降式制片技术虽优于传统常规制片技术，但因需沉降式制片染色机及自动样本转移机等仪器，尚不能普及基层。但在结核病、传染病等专科医院笔者推荐此方法可以提高检出的阳性率。

[1]边泽源,杨芸红,何川,等.噬菌体生物扩增法直接检测痰标本中结核分枝杆菌异烟肼耐药性的研究[J].实验与检验医学,2011,29 (3)∶219-220.

[2]吴增斌,潘曙明,陈峰.液基薄层细胞学涂片快速检测痰病原菌价值[J].中华实用诊断与治疗杂志,2010,24(12)∶1206-1207.

[3]李宁,伍严安,胡辛兰,等.液基薄层细胞学涂片快速检测痰病原菌价值[J].实验与检验医学,2013,31(3)∶214-216.

[4]杨志勇,杨敏.峡江县2004～2009年结核病控制项目抗酸杆菌痰涂片镜检分析[J].实验与检验医学,2010,28(6)∶615-616.

[5]李强,陆其斌.影响痰涂片抗酸杆菌检出率的因素分析[J].检验医学与临床,2011,8(1)∶64-65.

[6]严开斌,张以祥.不同时间段痰标本检查抗酸菌结果分析[J].实验与检验医学,2009,27(4)∶423.

[7]杨新明,邹文玮.不同方法检查痰中结核杆菌的结果及分析[J].实验与检验医学,2010,28(3)∶303

[8]黄勋福,韩福兰,吴燕杏.LBP液基细胞学沉降式制片技术在痰脱落细胞诊断中的应用[J].现代医院,2009,9(7)∶22-23.

[9]周禄顺.提高肺结核病人痰中结核杆菌检出率的体会[J].实验与检验医学,2008,26(4)∶449.

[10]何梅,熊锦美,黄传胜.沉降式液基细胞学应用于宫颈癌筛查的临床研究[J].检验与临床,2008,46(22)∶119-120.

[11]Lee KR,Ashfaq R,Birdsong GG.Comparison of conventional Papanicolaou smears and fluid-based thirrayer system for cervical cancer screening[J].Obstet Cyneco，1997,90(2)∶278-284.

R378.91+1,R446.5

B

1674-1129(2014)06-0746-02

2014-09-02；

2014-10-10)