糖尿病患者血清MLCK水平与其它糖尿病指标相关性研究

刘宓，潘卫，李兴

(1、贵阳医学院附属贵州省肿瘤医院检验科，贵州贵阳550004；2、贵阳医学院检验系，贵州贵阳550004)

·论著·

糖尿病患者血清MLCK水平与其它糖尿病指标相关性研究

刘宓1，潘卫2，李兴2

(1、贵阳医学院附属贵州省肿瘤医院检验科，贵州贵阳550004；2、贵阳医学院检验系，贵州贵阳550004)

目的探讨糖尿病患者血清非骨骼肌型肌球蛋白轻链激酶(nskMLCK)和常用糖尿病检测指标的关系，以及nskMLCK在糖尿病时的可能作用。方法检测144例糖尿病患者血清nskMLCK、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、维生素D3(VD3)以及空腹血清C肽水平，采用Spearman等级相关分析各指标与血清nskMLCK的相关性；同时分析包括高血压、高血脂等因素对血清nskMLCK的影响。结果与糖尿病相关检测指标进行相关性分析显示，血清nskMLCK水平与BMI、FPG、HbA1c及VD3之间无相关性，与空腹C肽水平呈负相关(r=－0.187)；分析其它可能影响血清nskMLCK水平的因素表明，血清nskMLCK的水平受代谢综合征和病程的影响(P=0.045和0.011)，单独高血压、高血脂、白内障及性别与血清nskMLCK水平无关。结论糖尿病时，患者血清nskMLCK与空腹C肽的负相关提示血清nskMLCK可能参与了胰岛素水平的调节，在糖尿病的发生发展中起到重要的作用。

糖尿病；肌球蛋白轻锭激酶；空腹C肽

肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kianse，MLCK)是激活肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化的重要激酶，在细胞黏附、细胞运动和迁移、细胞凋亡等一系列机体的生理活动中起着重要的作用[1]。除了参与正常的生理活动，MLCK的表达异常与许多疾病如自发性高血压[2]、急性肺损伤[3]、肠炎性疾病[4]、哮喘[5]、肿瘤细胞的侵袭转移以及细胞凋亡[6，7]、动脉粥样硬化[8]、心肌肥大[9]等的发生相关。

本课题组前期研究发现，糖尿病时MLCK水平明显升高[10]，因此本研究拟通过分析MLCK与一些常用的糖尿病检测指标进行比较，探讨MLCK与糖尿病的相关性。

1 材料与方法

1.1 研究对象2012年1月至9月贵阳医学院收治的糖尿病患者144例，均符合2010年中国糖尿病指南的诊断标准；其中男性76例，女性68例；平均年龄63.04±2.5岁。同时收集条件匹配的131例健康人做为对照，男性61例，女例70例，平均年龄60.35±3.7岁。

1.2 样本收集和检测所有研究对象于早晨空腹抽取抗凝全血(EDTA-K2抗凝)和静脉血，离心取血浆和血清样本，检测糖化血红蛋白(glycohemoglobin,HbA1c)、空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)、维生素D3(Vitamin D3,VD3)和空腹C肽。未能立即检测的血清样本保存在-80℃低温冰箱中，检测前取出复溶至常温。

1.3 主要试剂及仪器nskMLCK试剂(Santa Cruz Biotechnoloty，Inc)，FPG试剂和HbA1c试剂(SIEMENS诊断)，VD3和空腹C肽试剂(罗氏诊断)；酶标仪(TECAN infinite F50)，全自动生化分析仪(SIMENS公司ADVIA2400 Chemistry System)，全自动糖化血红蛋白分析仪(SIMENS公司DCA Vantage Analyzer)，全自动化学发光免疫分析仪(罗氏公司E170)。

1.4 实验方法双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各样本血清nskMLCK水平，常规化学法检测FPG，电化学发光免疫分析法检测C肽和VD3，POCT免疫测定法检测HbA1c。分析前采用各项目配套定标品和室内质控品同时检测，当室内质控结果在控后方进行研究样本的检测。

1.5 数据统计采用SPSS13.0进行数据统计，由于血清nskMLCK呈非正态分布，因此采用Spearman等级相关进行数据分析，P＜0.05差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 糖尿病患者血清nskMLCK水平与对照组相比，糖尿病组血清nskMLCK水平明显高于对照(P= 0.009)，差异具有统计学意义。见表1。

表1 糖尿病时血清nskMLCK的表达水平(中位数，P25-P75)

2.2 血清nskMLCK与糖尿病相关检测指标的关系采用Spearman等级相关分析糖尿病时nskMLCK与各指标之间的相关性(结果见表2)。结果显示，血清nskMLCK水平与BMI、FPG、HbA1c及VD3无相关性，与空腹C肽水平呈负相关(r=－0.187)，差异具有统计学意义(P=0.030)。

2.3 可能影响糖尿病组血清nskMLCK水平的因素分析采用多个独立样本比较的秩和检验分析显示，代谢综合征(P=0.045)和病程(P=0.011)与血清nskMLCK的水平相关，单独高血压、高血脂(P= 0.61)、白内障(P=0.602)及性别(P=0.055)与血清nskMLCK水平无关。

3 讨论

研究采用Spearman等级相关对各指标间的关系分析后发现，血清nskMLCK水平与FPG浓度变化无相关性，与HbA1c也无相关性。本课题组前期的动物研究显示，9周时组织MLCK水平升高呈现统计学差异，至12周时糖尿病大鼠血清MLCK水平明显高于6周和9周的大鼠，差异具有统计学意义。表明随着疾病的进展，糖尿病大鼠MLCK水平在逐渐升高。由于FPG代表患者抽血时的血糖浓度，而HbA1c代表患者2～3月前的血糖水平，因此推测血清nskMLCK的水平升高与血糖浓度有关，但其水平的变化与血糖浓度的变化无关。也就是说，当患者血糖水平持续维持在高浓度时可能会诱导机体MLCK的表达增强，但MLCK水平的变化并不受血糖水平变化的影响，其水平的变化可能由多种机制进行调控，这还需在我们在进一步的研究中加以分析。另外由于糖尿病是一种慢性疾病，大多数研究对象已经接受了较长时间的降糖治疗，因此，我们的研究结果也可能会受到疗程、疗效等因素的影响。

表2 糖尿病组血清nskMLCK与各指标的相关性

除与空腹血糖浓度和HbA1C无关外，血清nskMLCK水平与BMI和VD3水平也无相关性，与空腹C肽水平具有负相关(P=0.030)。C肽是由胰岛素裂解产生的一段含有31个氨基酸的多肽。糖尿病患者由于胰岛素水平明显不足，因此C肽水平也相应降低。以前人们认为C肽是无生物活性的肽段，但近年来的研究显示C肽与糖尿病多种并发症相关。对1型糖尿患者在使用胰岛素控制血糖的情况下增加使用C肽，可提高患者肾血流量，降低肾小球的滤过率及尿白蛋白排泄率，降低其高灌注、高滤过[11]。还可防止TNF诱导的近端肾小管上皮细胞的凋亡[12]。Kernell等[13]发现，1型糖尿病患者的空腹C肽水平与视网膜屏障功能存在负相关。通过糖尿病大鼠模型的研究显示，在糖尿病早期单独应用C肽可以减少出现前色素膜，视网膜周围血流灌注增加。另有研究显示，C肽对糖尿病多发性神经病变有冶疗效果[14]。本研究发现血清nskMLCK与空腹C肽水平呈负相关，提示MLCK还可能参与胰岛素水平的变化，进而在糖尿病病变中发挥作用。

为了解可能影响血清MLCK水平的因素，我们还分析了高血压、高血脂、白内障、代谢综合征以及患者年龄、病程、性别对血清nskMLCK的影响情况。其中血清nskMLCK的水平受代谢综合征和病程的影响，而与单独高血压、高血脂、白内障及性别无关。该研究结果显示，血清nskMLCK水平不受空腹血糖浓度、血压、血脂和性别等的影响，可能是独立的用于糖尿病及微血管并发症的一个指标，糖尿病患者患有代谢综合征及糖尿病病程是影响血清nskMLCK水平的因素。

[1]Takashima S.Phosphorylation of myosin regulatory light chain by myosin light chain kinase,and muscle contraction[J].Circ J,2009, 73(2)∶208–213.

[2]Cho YE,Ahn DS,Morqan KG,et al.Enhanced contractility and myosin phosphorylation induced by Ca(2+)-independent MLCK activity in hypertensive rats[J].Cardiovasc Res,2011,91(1)∶162-170.

[3]Kamp R,Sun X,Garcia JG.Making genomics functional∶deciphering the genetics of acute lung injury[J].Proc Am Thorac Soc, 2008,5(3)∶348-353.

[4]Blair SA,Kane SV,Clayburgh DR,et al.Epithelial myosin light chain kinase expression and activity are upregulated in inflammatory bowel disease[J].Lab Invest,2006,86(2)∶191-201.

[5]Flores C,Ma SF,Maresso K,et al.A variant of the myosin light chain kinase gene is associated with severe asthma in African Americans[J].Genet Epidemiol,2007,31(4)∶296-305.

[6]Cui WJ,Liu Y,Zhou XL,et al.Myosin light chain kinase is responsible for high proliferative ability of breast cancer cells via antiapoptosis involving p38 pathway[J].Acta Pharmacol Sin,2010,31 (6)∶725-732.

[7]Leveille N,Fournier A,Lavrie C.Androgens down-regulate myoslin light chain kinase in human prostate cancer cells[J].J Steroid Biochem Mol Biol,2009,114(3-5)∶174-179.

[8]Sun C,Wu MH,Yuan SY.Nonmuscle myosin light chain kinase deficiency attenuates atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice via reduced endothelial barrier dysfunction and monocyte migration[J].Circulation,2011,124(1)∶48-57.

[9]Muthu P,Kaxmierczak K,Jones M,et al.The effect of myosin RLC phosphorylation in normal and cardiomyopathic mouse hearts[J].J Cell Mol Med,2012,16(4)∶911-919.

[10]Li X,Pan W,Yang GZ,et al.Proteome analysis of differential protein expression in brain of rats with type 1 diabetes mellitus[J]. Exp Clin Endocrinol Diabetes,2011,119(5)∶265-270.

[11]Johansson BL,Kermell A,Sjoberg S,et al.Influence of combined C-peptide and insulin administration on renal function and metabolic control in diabetes type 1[J].J Clin Endocrinol Metab, 1993,77(4)∶976-981.

[12]AI-Rasheed NM,Willars GB,Brunskill NJ.C-peptide signals via Galpha i to protect against TNF-alpha-mediated apoptosis of opossum kidney proximal tubular cells[J].J Am Soc Nephrol,2006, 17(4)∶986-995.

[13]Kernell A,Ludvigsson J,Finnstrom K.Vitreous fluorophotometry in juvenile diabetics with and without retinopathy in relation to metabolic control∶insulin antibodies and C-peptide levels[J].Acta Ophthalmol(Copenh),1990,68(4)∶415-420.

[14]Zhang W,Kamiya H,Ekberg K,et a1.C-peptide improves neuropathy in type 1 diabetic BB/Wor-rats[J].Diabetes Metab Res Rev,2007,23(1)∶63-70.

Study of correlation between the levels of serum MLCKs and other indicators of diabetes

LIU Mi,PAN Wei,LI Xing.Department of Clinical Laboratory,the Affiliated Cancer Hospital of Guiyang Medical College，Guiyang 550004,China

Objective To investigate the correlation between serum non-skeletal muscle myosin light chain kinase(nskMLCK) and other indicators of diabetes,and the possible role of nskMLCK in diabetes.Methods The levels of serum skMLCK，fasting plasma glucose(FPG),glycohemoglobin(HbA1c),Vitamin D3(VD3),and fasting serum C peptide were detected in 144 patients with diabetes.The relationships between serum nskMLCK and other indicators of diabetes were analyzed by Spearman＇s rank correlation analysis,and the influences of hypertension,hyperlipidemia and other factors on the level of serum nskMLCK were also analyzed.Results The results showed that serum nskMLCK had no correlation with BMI,FPG,HbA1cand VD3,but had negative correlation with fasting C peptide(r=-0.187).Analysis of other factors acting on the levels of serum nskMLCK showed that metabolic syndrome and disease duration could effect the levels of serum nskMLCK(P=0.045 and 0.011,respectively).Hypertension,hyperlipidemia,cataract and gender was unrelated to the levels of serum nskMLCK.Conclusion The negative correlation with fasting C peptide indicates that serum nskMLCK might play an important role in diabetes.

Diabetes mellitus;Myosin light kinase;Fasting C peptide

R587.1,R446.62

A

1674-1129(2014)06-0674-03DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.008

2014-08-15；

2014-10-01)

贵阳市科技计划项目（编号：201310320）；贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目（编号：黔省专合字201240）。

刘宓，女，1975年4月生，副主任技师，硕士研究生，主要研究方向为糖尿病的蛋白质组学

李兴，男，教授，博士研究生，硕士生导师，主要从事糖尿病蛋白质组学研究。