连翘种子质量标准研究

赵艳，李安平，孙斌，王进明，王玉龙，王栋，肖淑贤

（山西振东道地药材开发有限公司，山西长治047100）

连翘[Forsythiasu spensa（Thunb.）Vahl]是山西省野生的优势药材树种，也是该省道地药材品种之一。其果入药，具有清热解毒，消肿散结的功效。用于风热感冒，瘟病初起，温热入营，高热烦渴，神昏发斑，热淋尿闭[1]。目前连翘种子没有检验和质量标准，无法对市场上连翘种子的质量进行有效检验，使得连翘种子检验工作没有标准，种子的质量控制受到较大制约，因此，开展连翘种子质量标准的研究是中药材规范化生产亟需解决的问题。

1 材料与方法

1.1 材料

光照恒温培养箱，干燥箱，水浴锅，电子分析天平（万分之一）。试验用连翘种子采自山西安泽、陵川、闻喜等16个产地，来源见表1，室温储藏备用。

1.2 方法

1.2.1 净度分析。采用徒手减半法分取样品，将种子铺在光滑洁净的平板上，充分混合均匀。以四分法选取种子样品，选取10 g种子，称重后，分选，将纯净种子、其他种子、果梗枝梗和杂质分开[2]，分别称重，净度分析后各成分之和与原始重量之差不能超过5%，超过该误差，须重新进行试验。试验重复3次。

1.2.2 千粒重测定。净度分析后的净种，随机挑选100粒10份，500粒4份，1 000粒3份，用万分之一电子天平称重，分别计算各处理标准差和变异系数，每重复的变异系数应小于4.0%，选取变异系数最小的作为连翘干重测定方法[3]。

表1 连翘种子来源

1.2.3 含水量测定。为确定种子含水率最佳测定方法，分别采用整粒105℃、整粒130℃、磨碎105℃、磨碎130℃4种方法测定种子含水率，每隔1 h称重一次[4]，比较4种方法测定结果与烘干时间的关系，从而确定种子含水量的最佳测定方法。每种方法3次重复，每份2 g样品。

1.2.4 种子吸水曲线测定。为确定种子吸水饱和期，取100粒净种，称重，置烧杯中40℃水冲洗3次，烧杯内加3～4倍于种子体积水，置于25℃水浴锅中，每隔2 h，滤纸吸取种子表面水，称重，记录，直至种子重量开始减少时为止[5]。

1.2.5 发芽率及发芽势检测。取净种，清洗后加水置于25℃水浴锅中浸泡24 h，于恒温培养箱中（温度25℃、湿度65%、全光照60%），分别用滤纸、脱脂棉、纱布、砂子、海绵为材料进行发芽床预试验，确定连翘种子最适发芽床[6]。净种25℃水浴24 h，弃上面漂浮种子，每皿100粒，每份种子3次重复，置培养箱中培养，每天观察，计数，注意补水，保持滤纸湿润。

1.2.6 生活力测定。采用TTC检测法，采用4因素4水平正交试验，浸种时间设置 20、24、28、32 h4个水平；染色温度设置 25、30、35、40 ℃4 个水平；染色时间设置 12、16、20、24 h 4 个水平；TTC 浓度设置0.1%、0.2%、0.3%、0.5%4个水平。种子浸泡后沿种胚横切，留50%种胚置于染色液中，观察种胚染色情况并记录，重复3次，每次50粒[7]。种胚完全着色或大部分着色者为有生活力种子，大部分不着色或完全不着色者为无生活力种子。

1.2.7 种子形态鉴定。随机从净种样品中选取种子，借助放大镜、游标卡尺逐粒记录种子形态特征（包括种子大小、长、宽、形状、颜色、光泽及表面斑点）。每次3重复，每次100粒[8]。

2 结果与分析

2.1 不同产地连翘种子的净度

连翘种子的净度大多在74%～98%，杂质中以花芽居多，不同产地种子显著性差异不大，其中沁源种子净度最低，净度仅为74.20%，杂质中花芽、果梗较多，结果见表2。

2.2 不同产地连翘种子重量

随机选取3份净重，在百粒重、五百粒重、千粒重这3种方法中，发现3份材料采用五百粒法称取干重的变异系数都小于4%；而采用千粒重法，虽然公司材料的变异系数很小，但东寺头材料却接近4%。五百粒重差异最小，因此，选五百粒重作为连翘种子重量的检测标准，种子五百粒重多为1.7 g左右，其中长治县种子大而饱满，五百粒重高达2.14 g，沁水种子五百粒重最小，为1.230 4 g（表3）。

2.3 不同产地连翘种子的含水率

经试验，采用高温整粒法测定含水率，连翘种子含水率多在6%左右，其中沁水种子含水率最高，为7.71%；而左权和壶关种子含水率最低，为6.01%（表4）。

2.4 种子吸水曲线

由图1可知。种子浸种吸涨立即启动，种子重量急剧增加，浸种4～12 h是吸水最快期，而后缓慢吸水，至24 h后，吸水停止。在后期的种子活力检测中种子要预先浸泡24 h，使种子充分吸涨后再进行TTC染色。

表2 不同产地连翘种子净度分析结果

表3 连翘种子重量分析预试验结果

图1 连翘种子吸涨曲线

2.5 不同产地种子活力检测

采用TTC检测法，采用4因素4水平正交试验，浸种时间 20、24、28、32 h；染色温度 25、30、35、40℃；染色时间 12、16、20、24 h；TTC 浓度 0.1%、0.2%、0.3%、0.5%，结果见表5。

由表5可知，用TTC法染色，浸种时间24 h，TTC浓度为0.1%，染色时间为16 h，染色温度35℃。不同产地连翘种子生活力在66%～96%，壶关种子活力较高，屯留种子活力较低。

2.6 不同产地种子发芽率检测

不同产地连翘种子发芽率差异明显。其中发芽最快的是东寺头种子，发芽率最高的是陵川种子，为91%。图2为长治县连翘种子发芽情况。其中发芽率最差的为闻喜种子，没有发芽。在发芽率相同时，发芽势高的种子，说明种子生命力强，在场地的播种发芽率较高，播种后幼苗出土正常（表4）。

表4 不同产地连翘种子净度、干重及含水率

表5 长治县连翘种子活力检测预试验结果

2.7 连翘种子质量分级标准的制定

以连翘种子净度、五百粒重、含水率、生活力、发芽率5项指标，去除发芽率低于50%的不合格的4份种子[9]，用SPSS软件进行K聚类分析，最终类中心值见表6。

以连翘种子净度、五百粒重、含水率、生活力、发芽率5项指标作为连翘种子分级标准的参考值，并在此基础上制定了连翘种子质量分级标准（表7）。除去发芽率低于50%的不合格种子，12份试样中Ⅰ级有3个，Ⅱ级有5个，Ⅲ级有4个。该标准可为连翘种子品质检验提供一定参考。

3 结论与讨论

图2 连翘种子发芽情况

（1）连翘种子分级的5项指标中，发芽率和五百粒重2项指标作为主要分级依据。其中发芽率为重中之重，因为发芽率的高低决定了种子的实际利用价值，依据发芽率可以计算出田间实际种子播种量，参考价值很高。种子活力是种子发芽和出苗率、幼苗生长潜势、植株抗逆能力和生产潜力的总和，是种子品质的重要指标。而种子重量可以反映种子的成熟度和饱满度。含水量、净度、种子活力3个指标作为次要分类依据，种子净度反映清洁度与纯度，含水率反映种子对储藏条件的要求，净度和含水率也可以通过再加工来提高质量[10]。

表6 K类中心聚类分析结果

表7 连翘种子质量分级标准

（2）种子优劣是决定药材种植、生产、加工后能否获得后期药材高产、优质、稳定的关键，特别是无害的中药材，种子质量监控更是不可或缺。笔者提供的连翘种子分级标准是在基础试验研究上提出的，是连翘生产质量管理的重要组成部分，能为野生抚育基地选择连翘种子提供一定的参考。

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