EDTA依赖性假性血小板减少症的临床分析

王明慧

（吉林省白城中心医院检验科，吉林 白城 137000）

EDTA依赖性假性血小板减少症的临床分析

王明慧

（吉林省白城中心医院检验科，吉林 白城 137000）

目的探讨乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝血时导致血小板计数假性减少现象及避免措施。方法对采用全自动血球计数仪检测血小板计数值异常偏低的1例标本，进行再次血涂片，观察血小板分布情况，对其中发现的涂片与计数明显不符，进行复检。其血细胞计数方法为手工细胞计数、末梢血涂片观察血小板分布情况、抽取枸橼酸钠抗凝血。结果上述1例标本在后三种方法复检时血小板计数在正常范围，与初次EDTA-K2抗凝血血细胞分析仪所测血小板计数结果明显不符。结论EDTA抗凝剂偶尔可导致血小板发生聚集，引起EDTA依赖性假性血小板减少症，产生的假性血小板计数减少、白细胞增多会导致患者临床辅助检查增多，严重时易导致临床误诊、误治。因此，PTCP应该在临床检验工作中得到广泛重视。

血小板聚集；乙二胺四乙酸盐（EDTA）；依赖性假性血小板减少症

在临床检验实际工作中，经全自动血细胞分析仪进行血细胞计数时，极少数患者出现血小板检测值异常偏低，临床表现与检测结果严重不符，采用其他方法复检血小板数正常。为探讨其发生原因，笔者对白城中心医院血常规检验中遇到的1例EDTA依赖性假性血小板减少症（EDTA-PTCP，EDTA-dependent pseudo throm-bocytopenia）患者报告分析如下，引起临床检验者的注意，并准确的血小板和白细胞化验结果指导临床实践。

1 资料与方法

1.1 病例来源

患者女性，58岁，2012年11月因脑外伤来白城中心医院神经外科住院治疗。

1.2 仪器和试剂

血细胞分析仪：日本光电MEK-8222K五分类血细胞分析仪，仪器经全血校准物校正各项指标均正常，室内质控在控，双目显微镜，血细胞计数板。

溶血剂、稀释液、清洗液均为仪器配套进口试剂；1%草酸铵血小板稀释液及白细胞稀释液（科室自配）；EDTA-K2真空抗凝管与枸橼酸钠真空抗凝管；瑞氏染液。

1.3 方法

仪器法：①全血模式测定分别用EDTA-K2抗凝管和枸橼酸钠抗凝管抽取静脉血并混匀，按仪器标准操作规程在全自动血细胞分析仪全血模式进行测定，记录PLT与WBC值。②稀释血液模式测定严格操作规程，准确吸取患者无名指末梢血10 μL，加入仪器设定的标准量稀释液中，混匀静置5 min后进行稀释模式下测定，记录PLT与WBC值。

手工法：按第三版《全国临床检验操作规程》[1]，准确吸取手指末梢血20 μL加入到0.38 mL草酸铵血小板稀释液中充分混匀，待完全溶血后再次混匀，取血小板悬液1滴冲入计数池内，静置10～15 min后，高倍镜计数血小板数，同样的方法手工计数白细胞数。

血涂片瑞氏染色观察：分别取EDTA-K2抗凝血与手指末梢血制作血涂片，经瑞氏染色，在油镜下观察血小板形态。

2 结 果

此患者入院初次采集EDTA-K2抗凝血查血常规，结果PLT低于正常值，与临床医师沟通了解到患者无皮肤黏膜出血点、紫癜等明显出血征象、肝脾淋巴结不大，随后对此患者分别用不同抗凝剂重新采集全血、稀释血上机复查及手工计数，同时检测凝血功能、红细胞沉降率、肝肾功能等项目，结果发现在血球计数仪分析时再用EDTA抗凝血时血小板检测值仍然明显偏低，用非EDTA抗凝血方法复检血小板计数却正常，其他的检测项目也未见明显异常结果。采用血涂片法直接检测末梢血表明血小板数量和分布未见异常，而血涂片直接检测EDTA抗凝血可见血小板明显聚集成簇，甚至成片，单独存在的血小板极少见。由此可见，血小板计数假性减少的原因为大量血小板聚集在一所致，并非机体功能异常所致疾病引起。

三种方法对该患者的检测结果为：EDTA抗凝之血液标本采用血细胞分析仪检测WBC总数为25.4×109/L，血小板为44×109/L；显微镜下直接检查枸橼酸钠抗凝之血液标本检测WBC总数为19.4×109/L，血小板为230×109/L；枸橼酸钠抗凝之血液标本采用血细胞分析仪检测WBC总数为18.3×109/L，血小板为182×109/L。

3 讨 论

通常情况下，EDTA并不影响血液中血细胞的形态和血小板聚集性，国际血液学标准委员会（ICSH）将EDTA作为应用血细胞分析仪检测血细胞数量的常用抗凝剂，并被临床检验工作广泛推广应用。但对于个案个体来说，EDTA可增加其血小板的聚集性，由此出现血小板数量降低的假象。1969年，Gowland首次报道了由于使用EDTA抗凝所致血小板聚集后血小板假性减少的病例，临床检验者关注这一现象，并对异常者采用他法进行血小板计数检测。

EDTA-K2抗凝血涂片可见血小板聚集现象或与单核细胞、淋巴细胞有相互粘连及被吞噬现象，也可见血小板围绕淋巴细胞呈现卫星现象。EDTA作为血细胞分析的常用抗凝剂有很大的优点，但对有些患者或者健康人血液的血小板有一定的聚集作用，造成假性血小板减少，分析原因有以下两点：①EDTA-K2可使血产生免疫介导，出现冷抗血小板抗体，血小板因出现抗原抗体反应而发生凝集现象；与血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa直接作用的自身抗Fc端结合于淋巴细胞或单核细胞膜上Fc受体，造成卫星现象的出现[2-3]。②EDTA-K2能促使血小板活化并改变其形态，这改变了血小板膜表面某种隐匿性抗原的表位构象，改变后的血小板与血浆中的自身抗体结合后，细胞膜中能活化血小板纤维蛋白原受体的某些物质被激活，导致血小板与纤维蛋白原聚集成团[4-5]，这两种原因在表象上都表现为血小板的体积增大。目前，血液分析仪多采用电阻抗法为原理进行血细胞分类和计数，血细胞为相对非导电性质，悬浮在电解质溶液中的颗粒在通过计数小孔时可引起电阻的变化，从而对血细胞进行计数和体积测定。由于EDTA-K2可引起血小板的聚集或发生卫星现象，分析仪不能识别凝集的血小板，导致血小板计数偏低，当血小板聚集成堆与白细胞体积接近时，可被分析仪当作白细胞进行计数，这就造成了血小板假性减少和和白细胞假性增多。

为确保血小板计数的准确性，应采用不同的方法复查对结果有疑问的血样：①经瑞氏染色后的血涂片在显微镜下直接观察EDTA抗凝血标本的血小板分布情况，如大量聚集或分布并不减少者，应作为可疑病例进一步复查。②换用枸橼酸类等非EDTA抗凝剂复查血小板计数，如果所得结果明显差异于与手工结果，不能向临床发放检验报告书，应进一步确认。但EDTA致血小板聚集原因基本可以排除，对诊断EDTA-PTCP有一定的帮助。

目前，手工法用于评价血小板计数准确性的“参考方法”，但其精密度较差，血小板与某些非特异性颗粒在镜下往往难以辨清，准确性相对不够高。尽管如此，该方法仍不失为一种方便有效的血小板异常结果复检的方法。

EDTA-PTCP可见于正常人，但多伴有癌症、肝病、肺心病、自身免疫性疾病和原因不明的疾病。其发生率极低（在0.07%～1.00%），住院患者的发生率为0.1%～2.0%，且在人健康或患病时均可能出现[6]。但一旦发生，会导致临床进行大量的进一步检查。所以对无出血症状但血小板减少者，一定要用不同方法进行复查，以防误诊误治，应该受到临床医务工作者广泛重视。要告知EDTA-PTAP的确诊患者，以后血常规检查时抗凝剂不得使用EDTA盐，以免造成不必要的检查和治疗。

[1] 叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出板社,2006.

[2] Nicola MD,Maurizia BD.EDTA-dependent Pseudo thrombocytopenia association with Antiplateletand Antiphospholipid Antibodies [J].Am J Clin Pathol,2002,103(1):10.

[3] 宓庆梅,施巍宇.EDTA依赖性假性血小板减少症1例[J].中华检验医学杂志,2004,27(10):719.

[4] Yamaguchi M,Mayumi M,Kasuya T.A Patient with EDTA～dependent pseudo thrombocytopenia who underwent clipping surgery for a ruptured aneurysm.Excerpta Med Section 25[J].Hematol, 1998,68(2):93.

[5] 高琼.EDTA盐依赖性血小板减少症1例分析[J].中国误诊学杂志,2012,12(3):584.

[6] Bragnani G,Bianconcini G,Brogna R,et al.Pseudo thrombocytopenia.Clinical Comment on 37 Cases[J].Minerva Med,2001,92(1): 13-17.

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B

1671-8194（2014）13-0317-02