鱼腥草中槲皮素的提取及含量测定

李瑞玲，崔运启，秦彩霞

（黄淮学院化学化工系，河南 驻马店463000）

鱼腥草（Houttuynia cordata Thunb）为三百草科蕺菜属植物，性辛、味微寒，归肺经，具有清热解毒、消痈排脓等功能，用于肺痈吐脓、痰热喘咳、热淋、热痢、痈肿疮毒等症。《本草纲目》载：“其叶腥气，故俗称鱼腥草”。鱼腥草为药食两用植物，早在唐代《新修本草》中就有“叶似荞麦，肥地亦能蔓生，茎紫赤色，多生湿地，山谷阴处，山南江左人好生食之”的记载［1］。鱼腥草中含有多种有效成分，主要有槲皮素、槲皮甙、金丝桃甙、芦丁等黄酮类化合物［2］。已有文献报道鱼腥草中绿原酸［3］、芦丁［4］、癸酰乙醛等的含量分析，但关于鱼腥草中槲皮素的提取工艺及含量分析［5］涉及得较少。

作者采用单因素实验和正交实验，考察提取温度、提取时间、乙醇体积分数对超声波法提取鱼腥草中槲皮素的影响，并测定了最佳提取条件下，不同产地鱼腥草中不同部位槲皮素的含量，拟为鱼腥草的高效合理利用提供依据。

在针对导致城市污染的各种问题进行分析的时候，会发现导致城市出现污染的各个原因大不相同。其中通过对实际情况进行分析，发现最严重的问题之一就是汽车的尾气排放。在当前人们的日常生活质量和水平不断提升，私家车的数量也在不断增加，这样就会导致石油的整个消耗量越来越大。汽车在日常行驶过程中，难免会出现严重的尾气排放，尾气的增多，势必会直接导致生态环境遭受到严重的污染影响。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

鱼腥草购于健民新特大药店和驻马店同仁堂药房。

当前，行业整体面临着严峻的挑战，很多企业退出转型，特别是山东省。山东作为化工大省，历来是化企关注的重点省份。据了解，自去年化工产业安全生产转型行动开展以来，山东已经关闭转产化工企业620家，停产整顿2614家，占全省化工生产企业的42.5%。未来山东还将进一步压减化工生产企业数量，力争在现有基础上关闭20%以上，将全省化工生产企业控制在5000家以内，实现化工企业的减量提升。在压力如此之大的大形势下，很多企业抽身都来不及，倍丰为何却偏偏明知山有虎偏向虎山行呢？

用芽接刀剔除砧木上的方块形树皮，迅速将接穗的方块形芽片取出，紧紧贴在砧木上的方块形中，用薄膜迅速将嫁接口缠紧绑实，只露出接芽、叶柄和溢水缝。

槲皮素标准品（生产批号：10081－200907），中国药品生物制品鉴定所。

CARY100型紫外可见分光光度计，美国；Agilent 1200型高效液相色谱仪，德国；HS2060A型超声波清洗仪，天津瑞森特仪器仪表商行；FA1204型电子天平，上海佑科仪器仪表有限公司。

1.2 鱼腥草中槲皮素的提取

取0.0136g槲皮素标准品于50mL的容量瓶中，用盐酸乙醇溶液溶解并定容至50.0mL。然后分别取1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL于10mL容量瓶中，并用盐酸乙醇溶液定容，其浓度分别为27.2mg·L－1、40.8mg·L－1、54.4mg·L－1、68.0mg·L－1、81.6mg·L－1，分别用高效液相色谱仪测定，以峰面积（y）为纵坐标、槲皮素浓度（x）为横坐标绘制标准曲线，拟合线性回归方程为：y＝285＋65x，R＝0.99875。

首先进行单因素实验。固定其它条件不变，分别改变提取温度（50℃、60℃、70℃、80℃、90℃）、提取时间（35min、40min、45min、50min）、乙醇体积分数（50%、60%、70%、80%），考察各因素对槲皮素提取率的影响。

1.3.3 色谱条件

综上所述，青少年患儿配戴角膜塑形镜后眼表健康的随访观察至关重要，泪液的循环对于配戴角膜塑形镜的效果及安全性都具有重要的作用，监测泪膜质量的变化同时在戴镜早期辅助人工泪液点眼可缓解患者的不适，减少其并发症的发生。本次研究尚不足的是随访时间较短，且没有将睑板腺缺失等因素纳入到研究中。同时，角膜塑形镜材质和透氧性的差别也可能会对泪膜质量评估产生影响，将在日后的观察研究中进一步考虑。

表1 正交实验因素和水平Tab.1 The factors and levels of orthogonal experiment

1.3 高效液相色谱分析

1.3.1 对照品溶液的配制

将20mg槲皮素标准品用配制好的盐酸乙醇溶液完全溶解［6］，用10mL容量瓶定容，分别配制成7个不同质量浓度的对照品溶液，待用。

1.3.2 供试品溶液的制备

从表2可以看出，各因素中对提取率影响最大的是提取时间，其次是提取温度，乙醇体积分数影响最小，最佳工艺组合是A2B3C2，即提取温度为80℃、提取时间为45min、乙醇体积分数为80%。

在单因素实验的基础上，以提取温度、提取时间、乙醇体积分数为考察因素，以槲皮素峰面积为考核指标，进一步进行正交实验以优化提取条件。正交实验的因素和水平见表1。

采用Eclipse XDB－C18（4.6mm×150mm，5μm）色谱柱，以甲醇－0.1%磷酸水溶液（45∶55，体积比）为流动相；流速1.0mL·min－1；检测波长375nm；柱温：室温；进样量20μL。

2 结果与讨论

2.1 单因素实验结果

在1.3.3色谱条件下，取同一供试品溶液，分别进行以下两组实验：（1）连续3d，在同一时间对供试品进行测定；（2）1d内连续测定3次。两组实验的峰面积值的相对标准偏差RSD值分别为1.63%、0.75%。表明该方法的精密度良好。

2.2 正交实验结果与分析（表2）

表2 正交实验结果与分析Tab.2 The result and analysis of orthogonal experiment

取足够量的鱼腥草茎（叶）粉碎，过40目筛，称2.000g鱼腥草粉末加入到50.0mL盐酸乙醇溶液中，于80℃超声提取45min，离心、过滤，得到供试品溶液。供试品溶液经0.45μm的有机微孔滤膜过滤，待用。

2.3 高效液相色谱分析方法学考察

2.3.1 线性关系

称取2.0g鱼腥草茎（叶）粉末，用配制好的盐酸乙醇溶液［80%（体积分数）乙醇∶25%（质量分数）盐酸＝4∶1（体积比），下同］溶解，并定容到50.0mL，浸泡20min，在一定温度下超声提取一定时间，离心分离后定容，所得滤液用于HPLC分析（滤液中槲皮素的峰面积对应提取率）。

在最佳提取条件下提取不同产地鱼腥草不同部位的槲皮素，并对其含量进行测定，平行测定3次，结果见表3。

通过单因素实验，初步确定最佳的提取温度为80℃、提取时间为45min、乙醇体积分数为80%。

2.4 样品测定

2.3.2 精密度

随着多媒体技术发展，档案信息数据类型日趋多样化，多源异构的多媒体化档案正逐渐取代传统的纸质档案。数字化档案不仅包括了传统的纸质类型档案（电报、案卷、条约等），也新增了多媒体电子档案（电子公文、会议视频、电话录音等）。种类繁多的数字化档案是信息化时代的产物也是我们宝贵的财富，如何有效地利用数字档案信息资源是数字化档案建设的重点研究方向之一。

表3 不同产地鱼腥草不同部位槲皮素含量测定结果Tab.3 Determination results of quercetin content in different parts of Houttuynia cordata Thunb from different sources

从表3可以看出，鱼腥草根茎中槲皮素含量：贵州最高，驻马店最低，湖北居中；鱼腥草叶中槲皮素含量：驻马店最高，贵州最低，湖北居中，且叶中槲皮素的含量明显较高，是根茎中的6～17倍（针对本实验样品）。表明，不同产地鱼腥草中槲皮素含量差别较大；同一产地鱼腥草中不同部位槲皮素的含量差别也比较大。

3 结论

（1）通过单因素实验和正交实验确定鱼腥草中槲皮素的最佳提取工艺参数为：提取温度80℃、提取时间45min、乙醇体积分数80%。

目前，关于EGR研究以直列柴油机为主。直列柴油机具有结构简单和布置相对简便的特点，而V型柴油机，由于结构复杂，使得EGR循环更加困难。V型柴油机的进气管和排气管通常采取两列平行结构，为废气的引出和流入增加难度，如果从单一列进排气管完成废气再循环，将会造成发动机各个缸内燃烧程度不同，使其运行的稳定性遭到破坏。为避免该情况发生，一般将双管道改造成单管道，或在双管道间通过加装旁通阀的方法让两列气流一致，来改善柴油机工作的稳定性。

（2）高效液相色谱法适宜于鱼腥草中槲皮素含量的分析，精密度高、重现性好。

虽然异步协作的价值巨大也有许多理论和实践方面的证据，但在实体产品的创新和研发中的研究、应用和成果均非常少[30]。与维基百科和开源软件两个典型异步协作案例相比，实体产品的研发有很多本质的区别，例如维基和开源是完全开放的模式，而团队中的协作创新行为则属于小群体内的重复博弈，团队成员之间的行为模式有较大区别;另外，维基和开源两种异步协作模式均不存在商务模式，即显式的利益分配行为，所有参与者均为自愿参与，其回报则体现为个人声誉等隐性的非经济收入。因此，已有的成功模式不能直接搬用，这是本文研究的出发点和重要基础。

（3）不同产地鱼腥草中槲皮素含量差异较大，且鱼腥草叶中槲皮素含量明显较高，是根茎中的6～17倍。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.2010版.北京：化学工业出版社，2005：155.

［2］胡凤莲，倪细炉，刘文哲.鱼腥草中总黄酮和槲皮素含量的动态变化［J］.安徽农业科学，2008，36（10）：4128－4130.

［3］贺义昌，李湘洲，旷春桃，等.绿原酸和芦丁的提取工艺研究进展［J］.应用化工，2011，40（11）：2001－2003.

［4］彭全材，杨占南，胡继伟，等.高效液相色谱法同时测定鱼腥草中7黄酮的含量［J］.江西师范大学学报（自然科学版），2008，32（6）：645－648，661.

［5］罗世琼，彭全材，柳丹丹.高效液相色谱法测定鱼腥草不同部位中槲皮素的含量［J］.贵州师范大学学报（自然科学版），2008，26（3）：96－99.

［6］吴景林.鱼腥草中槲皮素提取方法的研究［J］.四川化工，2010，（1）：17－21.