sFRP-2蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的表达及意义

陈永尚

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,2010年世界卫生组织报告：引起全球女性癌症死亡的恶性肿瘤中,宫颈癌的死亡率跌出前五名,说明随着对宫颈癌早期筛查越来越多的重视,越来越多的宫颈癌在早期被发现,总的死亡率有所下降,然而宫颈癌的发病率却依旧呈上升以及低龄化的趋势［1］。Wnt信号通路的异常激活在肿瘤的发生发展中起到重要作用,该信号通路的抑制性蛋白质分泌型Frizzled相关蛋白2(sFRP-2)通过直接结合Wnt从而改变Wnt与Wnt受体复合物结合的能力。本研究采用免疫组织化学SABC法检测了sFRP-2蛋白在宫颈癌及癌前病变组织中的表达,进而探讨sFRP-2蛋白在宫颈病变发生、发展中的作用。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选择本院病理科2011年10月~2013年1月妇产科行手术切除的子宫颈鳞癌组织蜡块51例、宫颈上皮内瘤变蜡块63例(其中Ⅰ级、Ⅱ级28例,Ⅲ级35例),随机选取30例正常子宫颈组织蜡块作为对照,正常子宫颈组织均为同期因子宫肌瘤行子宫全切术获得。所有患者均为女性,年龄23~65岁,平均年龄(41.17±12.08)岁,所有患者术前均未实施放、化疗措施,术后经病理明确诊断。

1.2 实验方法

1.2.1 免疫组织化学技术检测组织中sFRP-2蛋白表达 兔抗人sFRP-2多克隆抗体购于上海领成生物科技有限公司,二抗鼠抗兔即用型SABC试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。切片脱蜡,水化,PBS洗两次各5 min,抗原修复,PBS洗5 min。滴加封闭液,甩去多余液体,滴加一抗(sFRP-2:1:200)4℃过夜,37℃复温,PBS洗三次各2 min,滴加二抗,PBS洗三次各2 min,滴加试剂SABC,PBS洗4次各5 min,DAB显色,苏木素复染,盐酸酒精脱水、封片,阴性对照利用PBS代替一抗。用染色强度联合阳性细胞百分比进行评分：着色程度：无着色：0分,淡黄色：1分,棕黄色：2分；阳性细胞百分比分级如下：阳性细胞数≤2%记为0分,2%~20%记为1分,21%~50%记为2分,≥50%：记为3分。最后得分为阳性细胞数以及着色程度相加值≥2分为阳性。

1.2.2 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件进行数据的处理。率的比较用χ2检验,检验水准取α=0.05。

2 结果

2.1 免疫组化结果 sFRP-2蛋白主要定位于细胞质,细胞质呈现棕黄色颗粒为阳性标志。见图1。sFRP-2的表达在宫颈上皮内瘤变组织和宫颈鳞癌组织中明显低于正常宫颈组织,差异有统计学意义(P<0.05)；宫颈上皮内瘤变Ⅲ级组低于低度病变组(Ⅰ级和Ⅱ级),差异有统计学意义(P<0.05),宫颈鳞癌组sFRP-2的表达低于低度病变组,差异有统计学意义(P<0.05)；宫颈鳞癌组sFRP-2的表达低于高度病变组(P<0.05),具体见表1。

图1 sFRP-2在宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变组织及正常宫颈组织中的免疫组化染色(A：正常宫颈组织中sFRP-2阳性染色；B：宫颈上皮内瘤变组织中sFRP-2阳性染色；C：宫颈鳞癌组织中sFRP-2阴性染色, SABC法,400X, 标尺 ：100 μm)

2.2 sFRP-2与宫颈鳞癌临床病理因素的关系 sFRP-2在≥40岁和＜40岁的阳性表达率分别为41.2%、35.3%；在临床分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期阳性表达率分别为42.3%、40%、20%；在宫颈浸润深度<1/3、1/3~1/2和>1/2肌层的阳性表达率分别为36.4%、44.4%和40.0%；在淋巴结转移阴性组和淋巴结转移阳性组的阳性表达率分别为36.4%、57.1%,差异均无统计学意义(P>0.05)。在组织学分级中高分化和低分化的阳性表达率分别为26.7%、57.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 sFRP-2在各组织中的表达情况［n(%)］

表2 sFRP-2与宫颈鳞癌临床病理因素的关系［n(%)］

3 讨论

通过对既往文献的回顾,目前已知经典的Wnt信号通路在结肠癌、口腔癌、皮肤癌中均有研究,尤其是对于结肠癌、胃癌的研究报道较多,例如韩向春等［2］报道Wnt-1在胃癌中高表达。但是关于经典Wnt信号通路在妇科肿瘤尤其是宫颈病变中的报道并不多见。研究表明［2,3］一系列肿瘤的发生、发展与该信号通路的激活有密切关系。Wnt信号通路拮抗因子根据作用方式的不同分为两大类 ,而 sFRP(secreted Frizzled related protein)这一种类型,能够通过直接结合Wnt蛋白,使得Wnt蛋白与Wnt受体复合物结合的能力发生改变,该类型包括分泌性卷曲蛋白家族(即sFRP 家族 )、WIF-1(Wnt inhibitory factor-1)和Cerberus。赵苏云等［3］发表于2009年的文章提到在子宫肌瘤细胞中存在Wnt信号通路,而正常子宫肌层中却并不存在,说明Wnt信号通路与宫颈良性肿瘤：子宫肌瘤的发生密切相关,与Dimitrova 等［4］的实验结果类似。本研究发现,sFRP-2的表达在宫颈上皮内瘤变组织和宫颈鳞癌组织中明显低于正常宫颈组织；宫颈上皮内瘤变Ⅲ级组低于低度病变组(Ⅰ级和Ⅱ级)；宫颈鳞癌组sFRP-2的表达低于低度病变组；宫颈鳞癌组sFRP-2的表达低于高度病变组,差异均有统计学意义。并且在宫颈鳞癌组中,sFRP-2的表达与患者的年龄、肿瘤浸润深度、淋巴结有无转移、临床分期均无相关性(P>0.05),而在不同组织分化程度间表达差异有统计学意义,这个结果与王美红等［5］研究sFRP-1在宫颈癌及正常宫颈组织中的表达结果相同,而在苏珊［6］的研究中发现宫颈HSIL组与LSIL组中sFRP-1的表达没有统计学意义,可能是因为本实验中样本量较大,或者是不同的统计学方法造成的。大量研究表明［7-9］,sFRP启动子的甲基化引起的sFRPs的表达沉默是Wnt通路异常导致肿瘤发生的一种可能机制。而一旦启动子去甲基化那么sFRPsmRNA在肿瘤细胞中再次高表达,可以减弱Wnt信号通路的作用,进而导致瘤细胞的凋亡。

总之,作为目前肿瘤研究的热点,Wnt信号通路的各种抑制因子在子宫良恶性肿瘤发生、发展中的作用并不明确,相关报道亦不多见。本文检测了sFRP-2蛋白在宫颈癌及癌前病变组织中的表达,进而探讨sFRP-2蛋白在宫颈病变发生、发展中的作用,有利于明确其相关的机制,为将来宫颈癌的靶向治疗提供了新的切入点。但是由于受样本量的限制,本实验没有探讨sFRP-2蛋白在宫颈腺癌组织中的表达,以及这种表达在分子水平上的研究,未来可以作进一步深入的探讨。

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