丹参注射液对兔视网膜缺血再灌注损伤后保护作用

张铁华 杨 涛 张永利 张春丽 刘太平 河北省玉田县医院眼科（玉田064100）

缺血再灌注可造成视网膜损伤，与其他组织的损伤机制相同，也是多因素综合作用的结果，主要包括自由基的大量产生，细胞内的钙超载现象，白细胞作用以及细胞凋亡等。本实验旨在通过检测视网膜丙二醛（MDA）含量以及Ca2＋含量，来研究丹参注射液对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其保护作用机制，为临床用药提供理论依据。

1材料和方法

1.1材料 48只健康纯种大耳白兔（购于北京实验动物中心），体重3.0±0.2kg，雄性，外眼及眼底检查均正常，室温环境饲养。随机分为对照组：球后注射平衡盐溶液（48只左眼）和治疗组：球后注射丹参注射液（48 只右眼）。30min后制作缺血模型，维持缺血60min，分别于再灌注1h、6h、24h、72h进行MDA 和Ca2＋含量检测。

1.2 方法 1.2.1兔视网膜缺血再灌注损伤模型的制作以20%乌拉坦5mL／kg耳缘静脉注射麻醉，同时兔眼滴用0.4%倍诺喜（奥布卡因）行表面麻醉。于缺血再灌注损伤前30min左眼球后注射平衡盐溶液0.05mL，右眼球后注射丹参注射液0.05mL。球后注射半小时后开始建立模型，复方托品酰胺滴眼液散瞳后将连接生理盐水的5号头皮针从耳前方角巩膜缘内刺入前房，缓慢升高输液瓶高度产生16.7kP 压力（125.25mmHg 即170.30cm 水柱），观察并监测眼睛情况。60min后将输液瓶高度逐渐降低，缓慢减低眼内压，直至输液瓶高度到动物眼球水平，拔除灌注针头，视网膜血供恢复。

1.2.2 标本制作 根据各组不同的再灌注时间，分别于损伤后lh、6h、24h和72h全身麻醉后，耳缘静脉快速注入空气栓塞处死，取出眼球，至于冰生理盐水中，剪开角巩膜缘，弃去眼前节及玻璃体，外翻眼球壁，在显微镜下剥离视网膜，分析天平称重，用生理盐水稀释，匀浆，低温离心机3500r／min 离心10min，取上清液，硫代巴比妥酸法测量丙二醛（MDA）含量，分光光度计法测定钙含量。

2 结果

2.1 MDA 含量检测 见表1。

表1 两组伤后不同时间MDA 含量（±s）

表1 两组伤后不同时间MDA 含量（±s）

△同一时间点对照组与治疗组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

伤后时间组 别1h6h24h72h对照组4.15±0.15 4.32±0.16 6.19±0.21 6.73±0.23治疗组3.78±0.15△ 3.93±0.26△ 5.25±0.15△ 5.52±0.14△

2.2 钙含量检测 见表2。

表2 两组伤后不同时钙含量（±s）

表2 两组伤后不同时钙含量（±s）

△除缺血再灌注后1h外（P＞0.05），同一时间点对照组与治疗组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

伤后时间组 别1h6h24h72h对照组0.121±0.005 0.181±0.173 0.496±0.413 0.349±0.207治疗组0.115±0.0130.140±0.170△0.407±0.368△0.299±0.202△

3 讨 论 视网膜缺血再灌注是由多种因素介导的复杂病理生理过程，而自由基连锁反应是造成组织损伤的核心环节。在视网膜缺血再灌注损伤过程中，抗氧化酶系统活性减弱，氧自由基及氧自由基类产物增加［1］。大量超氧化物阴离子自由基，与组织发生反应，使盘膜、线粒体和内质网膜内的脂类受到不可逆损害，使生物膜的通透性、流动性和功能受损，并导致生物膜溶解，此外缺氧时氧可以还原为O2－自由基，使脂质过氧反应增强，丙二醛生成增多，加重视网膜损伤。

Ca2＋广泛存在于身体的各种组织中，在体内参与许多重要生理活动，也参与了许多病理过程。钙超载是许多原因引起细胞损害的“最后共同通路”。视网膜是代谢非常旺盛的组织，其耗氧及糖原分解能力超过全身其它任何组织，因此对缺血、缺氧极其敏感。范定怀等［2］以大鼠视网膜为研究对象，观察缺血再灌注对其细胞线粒体钙含量的影响。各种实验证实，在视网膜缺血再灌注过程中，缺血数分钟就会引起视网膜神经节细胞内钙离子含量开始升高。再灌注开始几分钟大量钙离子进入视网膜神经节细胞内，说明钙超载主要是发生在再灌注期。RIRI致使在兴奋性氨基酸毒性的作用钙离子大量内流导致神经节细胞的损伤。

丹参具有抑制细胞凋亡、抗脂质过氧化和清除自由基、钙拮抗剂作用，此外丹参还具有抗肿瘤、抗菌、抗炎等作用。丹参是一种强抗氧化剂，经临床应用使血清SOD 上升、MDA 下降。丹参的保护作用可能是打破氧自由基介导的细胞损害、发病机制的恶性循环，抑制脂质过氧化物的形成，抑制自由基介导的细胞损害作用，保护细胞膜结构和功能的完整性［3］。丹参作为一种钙拮抗剂，可通过降低膜通透性、阻断细胞膜钙通道、阻断细胞内钙库钙释放通道等途径减轻钙超载。Oh－Ju等［4］应用免疫组织化学技术发现视网膜缺血再灌注损伤后钙结合蛋白－28的变化与视网膜缺血再灌注的时间密切相关。Bringmann等发现过度表达的谷氨酸受体引起的Ca2＋内流可触发视网膜神经节细胞凋亡。这也充分证实钙离子在视网膜缺血再灌注损伤中的作用。从本实验中可以得出：丹参注射液可以通过清除自由基、减轻钙超载，而起到对视网膜缺血再灌注损伤的保护与治疗作用。

［1］ Song Y，Gong YY，Xie ZG，Li CH，Gu Q Wu XW.Edaravone（MCI－186），a free radical scavenger，attenuates retinal ischemia／reperfusion injury in rats［J］.Acta Pham a col Sin，2008，29（7）：823－828.

［2］ 范定怀，陈少强，黄 炎，等.缺血再灌注大鼠视网膜微血管基膜细胞外基质与视网膜线粒体钙含量的变化［J］.中国临床康复，2005，9（30）：144－146.

［3］ 周昆宝.大剂量丹参黄茂治疗新生儿缺氧缺血性脑病的疗效观察［J］.江西医学院学报，2004，44（1）：78－79.

［4］ Kwon OJ，Kim JY，Kim SY，et al.Alterations in the localization of calbindin D28K－，calretinin－，and parvalbuminimmuno－reactive neurons of rabbit retinal ganglion cell layer from ischemia and reperfusion［J］.Mol Cells，2005，19，（3）：382－390.