四君子汤对新生儿窒息患儿肠道菌群及体液免疫的影响

温秋玉 刘俊峰 黄军华 汪浩文 李宗辉 任大伟

新生儿窒息后由于体内血液的重新分布而造成胃肠道激素的异常分泌，出现包括频繁呕吐、胃排空减慢，甚至消化道出血等在内的一系列喂养不耐受的表现。同时，新生儿发生窒息后由于肠道内的微环境发生了改变，势必会造成肠道菌群的失调以及大量毒性代谢产物的产生，由此造成肠道内过度激活的炎症反应，进而影响肠道局部正常的屏障作用及免疫功能。对此，笔者采用四君子汤对其进行治疗，并对其肠道双歧杆菌及肠球菌定植情况及体液免疫水平进行检测，以探讨四君子汤对对新生儿窒息患儿肠道菌群定植及体液免疫水平的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 从华北石油总医院儿科2006年12月-2009年6月收治的新生儿窒息患儿中随机选取52例作为研究对象，男28例，女24例；均为妊娠37~42周顺产娩出的适于胎龄儿；生后1 min的Apgar评分为3~5分，窒息持续时间为5~10 min。将其随机分为两组，四君子汤治疗组及对照组，每组26例，同时选取26例同期顺产娩出的正常新生儿，男14例，女12例。治疗组及对照组性别、孕周、出生体重比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 治疗方法 对照组采用常规对症处理及静脉营养支持，治疗组在此基础上加用四君子汤进行治疗。组方为：人参5 g，白术5 g，茯苓5 g，炙甘草2 g。用清水80 ml煎至20 ml，1 ml/（kg·次），3次/d口服。

1.3 检测方法

1.3.1 肠道菌群培养 各组新生儿于生后4~5 d内，取自然排出的新鲜粪便，将其终末端放入无菌培养采集瓶内。于超净工作台内称取0.5 g粪便，加入4.5 ml生理盐水，经震荡混匀并逐步以10倍稀释至106。用移液器吸取lO μl粪便悬液滴加至细菌培养基上，分别于37 ℃的厌氧及需氧条件下进行细菌培养48 h。对细菌进行鉴定并行菌落计数。

1.3.2 体液免疫检测 各组新生儿于生后4~5 d内清晨空腹采集静脉血5 ml，离心后收集血清使用重庆医学检验试剂研究所提供的试剂盒采用单扩法测定血清IgA、IgG和IgM含量，严格按操作规程集中进行检测。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学处理，正态分布计量资料以（±s）表示，多组样本的比较采用单因素方差分析检验，组间比较采用q检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肠道菌群定植情况 正常新生儿生后4~5 d肠道内已存在双歧杆菌及肠球菌的定植，经便培养结果显示，肠球菌所形成的菌落数为（4.2±1.5）×108个/g粪便，双歧杆菌所形成的菌落数为（2.9±1.2）×108个/g粪便。而在伴有出生窒息史的新生儿，对照组菌群数量则明显少于正常新生儿（P<0.01）。而四君子汤治疗组肠球菌及双歧杆菌所形成的菌落数均较对照组明显增多（P<0.01）。见表1。

表1 各组菌落数量的比较 108个/g粪便

2.2 体液免疫情况 与正常新生儿相比，新生儿窒息后各组患儿血清IgG水平比较差异无统计学意义（P>0.05），而对照组IgA、IgM与正常组相比均存在一定程度的下降（P<0.01），经四君子汤治疗后其IgA、IgM较对照组显著升高（P<0.01），且与正常组比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

表2 各组血清免疫球蛋白水平的比较 mg/ml

3 讨论

新生儿窒息不仅是导致颅内出血、缺氧缺血性脑病等严重疾病的主要原因之一[1]，同时在窒息过程中，由于血流的重新分布造成胃肠道血流减少，局部缺氧的微环境造成代谢及胃肠道激素分泌的异常，进而导致胃肠道功能紊乱的发生，并出现诸如腹胀、频繁呕吐、消化道出血等喂养不耐受的症状[2]。我们前期的研究显示，新生儿窒息后血浆胃动素的水平显著的下调，以及血清一氧化氮的水平的显著增高均与喂养不耐受的发生呈现明显的相关性[3]。此外，局部缺血、胃肠道运动减弱及各种代谢产物的聚集也会对正常菌群的定植产生一定的影响，进一步加剧肠道功能紊乱的发生，并有可能对机体的免疫功能产生影响。四君子汤，记载于《太平惠民和剂局方》，组方为人参、茯苓、白术、炙甘草，多用于调节脾胃气虚所见诸证，在胃炎、胃肠疾病中能够显示出很好的临床疗效[4]。西医学研究显示，四君子汤不仅能够促进消化吸收，改善胃肠道疾病的临床症状，同时在胃肠道激素水平的调节、黏膜的损伤修复以及肠道局部免疫功能的调理上均具有一定的药理活性[5-6]。然而其对于新生儿肠道菌群及体液免疫的影响却鲜有研究。

肠道菌群是一个非常复杂的微生态系统，不仅参与食物的消化过程、提供机体所必需的维生素，同时在免疫调节方面也发挥着重要的作用。新生儿出生后脱离子宫的无菌空间，自然环境中的多种细菌会通过消化系统进入并定植于肠道，逐渐达到一种稳态。研究表明，不同的出生周龄、分娩方式、喂养方法均会对肠道菌群的定植造成一定的影响[7]。而新生儿发生窒息后，由于胃动素分泌减少及一氧化氮生成的增加造成胃肠道的蠕动减弱，加之缺血对肠道局部微环境的影响，无疑都会影响到肠道菌群的定植。在本研究中，通过对发生窒息的新生儿生后3~4 d内的粪便进行培养，我们发现在相同的培养体系下，窒息新生儿粪便内肠球菌及双歧杆菌所形成的菌落数量均明显少于正常新生儿，其中尤以双歧杆菌更为显著。这表明，相对正常新生儿而言，产程中窒息的发生明显的阻碍了肠道菌群的定植。由于双歧杆菌作为最重要的益生菌之一，不仅在维持肠道菌群稳态、抑制致病菌生长过程中发挥着重要的作用，同时对机体的特异性免疫及非特异性免疫都具有一定的调节作用[8]，因此新生儿窒息后肠道双歧杆菌定植的延缓极有可能会造成机体免疫功能的减低，降低其对致病菌的抵抗能力，从而易于发生坏死性小肠结肠炎等严重的并发症，甚至危及患儿的生命。在此，我们通过对窒息患儿生后3~4 d血清体液免疫水平进行了检测，结果显示，其IgA、IgM水平与正常新生儿相比均存在一定程度的降低。而经过四君子汤的治疗后，不仅明显增加了肠球菌及双歧杆菌的肠道定植数量，同时对患儿体液免疫的改善亦能够起到一定的改善作用。

由此可见，新生儿发生窒息后由于血浆胃动素分泌水平的降低和一氧化氮生成的增多，使得胃肠道的蠕动减慢，正常运动功能的下降延缓了双歧杆菌及肠球菌等肠道正常菌群的定植，进一步将导致肠道屏障作用减弱，并造成机体免疫功能下降。而四君子汤的应用可以通过增加胃动素和降低一氧化氮的生成从而有效地改善肠道的运动功能[9]，进而有效地促进肠道菌群的定植并上调机体的体液免疫水平。

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[3] 刘俊峰，黄军华，王杰.微量喂养在窒息后喂养不耐受新生儿中的应用及其对胃动素和-氧化氮的影响[J].中国新生儿科杂志，2009，24（3）：176-177.

[4] 李翼.方剂学[M].北京：中国中医药出版社，2006：166.

[5] 叶富强，陈蔚文.四君子汤对胃肠道作用的药理研究[J].时珍国医国药，2005，16（1）：73-74.

[6] 蒋灵芝，熊平，蒋任才.四君子汤修复烧伤后肠黏膜屏障的超微结构变化[J].中医药临床杂志，2004，16（1）：80-81.

[7] 韩彤妍，李在玲，叶鸿瑁.新生儿和婴儿肠道菌群的构成及影响因素[J].实用儿科临床杂志，2006，21（2）：119-121.

[8] 穆小萍，张德纯.双歧杆菌的免疫调节作用研究现状与展望[J].中国微生态学杂志，2007，l9（1）：109-111.

[9] 黄军华，刘俊峰，宋冬梅，等.四君子汤联合微量喂养治疗新生儿窒息后喂养不耐受及其对胃动素、一氧化氮的影响[J].中医药导报，2011，17（8）：18-19.